miR-19a-3p靶向细胞黏附分子2阻断AKT通路抑制肾癌细胞786-O的增殖和迁移

目的:探讨肾癌组织高表达的miR-19a-3p靶向调控细胞黏附分子2(cell adhesion molecule 2,CADM2)并通过AKT信号通路影响肾癌细胞增殖和迁移的机制。方法:收集2012年4月至2017年11月苏州大学附属第一医院肾内科收治的42例资料完整的肾癌患者手术切除的肾癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测肾癌组织和786-O等4种肾癌细胞系中mi R-19a-3p的表达水平,CCK-8、Transwell和免疫荧光法检测miR-19a-3p敲减对肾癌786-O细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-19a-3p与CADM2的靶向关系。采用Wb检测miR-19a-3p通过CADM2对AKT信号通路的调控作用。结果:miR-19a-3p在肾癌组织及细胞系中均高表达(均P<0.01)。敲减miR-19a-3p可显著抑制786-O细胞增殖、迁移和上皮间质转化,且miR-19a-3p靶向作用CADM2并下调其表达水平(P<0.05或P<0.01)。敲减miR-19a-3p通过靶向上调CADM2并阻断AKT信号通路进而显著抑制786-O细胞增殖、迁移和上皮间质转化(均P<0.05或P<0.01),从而缓解肾癌发生发展。结论:肾癌组织中miR-19a-3p高表达,敲减miR-19a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,其机制可能是通过miR-19a-3p/CADM2/AKT分子轴起作用。

miR-576-5p通过结合CADM2调节胃腺癌DNA损伤和放化疗敏感性

目的 探究miR-576-5p通过调控细胞黏附分子(CADM)2基因对胃腺癌DNA损伤和放化疗敏感性的影响。方法 GEO2R分析胃腺癌数据集(GSE26595、GSE6174)中表达上调的基因,GSEA分析miR-576-5p与细胞增殖和DNA损伤的关系。按照转染物的不同,分为空白对照组(miR-NC)和miR-576-5p模拟物组(miR-576-5p),向miR-576-5p组的BGC-823、SGC-7901细胞中转染miR-576-5p模拟物组,miR-NC组细胞仅转染对应的对照片段。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BGC-823、SGC-7901细胞中miR-576-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活力。将miR-576-5p过表达的BGC-823细胞皮下注射至裸鼠体内,成瘤后检测小鼠瘤重和体积,qRT-PCR检测肿瘤组织中miR-576-5p表达水平。以不同剂量的γ射线照射BGC-823、SGC-7901细胞,Western印迹检测γH2AX的蛋白表达。CCK8检测细胞对多柔比星化疗的敏感性。双荧光素酶活性实验验证miR-576-5p和CADM2的关系,qRT-PCR和Western印迹检测转染miR-576-5p模拟物的BGC-823、SGC-7901细胞中CADM2表达。向miR-576-5p高表达的BGC-823、SGC-7901细胞中转染CADM2过表达质粒,设为miR-576-5p+CADM2组,Western印迹检测CADM2的表达,CCK8检测细胞活力。结果 与miR-NC组相比,miR-576-5p组细胞活力显著增强(P<0.05)。体内实验结果表明,miR-576-5p过表达显著诱导了胃腺癌BGC-823细胞的肿瘤体内增殖,肿瘤体积和质量显著增加(P<0.05),miR-576-5p在miR-576-5p过表达的肿瘤组织中显著上调(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-576-5p组γH2AX蛋白表达显著下调,且呈照射剂量依赖性。同时剂量依赖性抑制胃腺癌细胞对多柔比星的化疗敏感性,抑制细胞活力(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-576-5p组荧光素酶活性被显著抑制(P<0.05),miR-576-5p过表达显著抑制了CADM2 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-576-5p组CADM2的表达显著下调,而与miR-576-5p组相比,miR-576-5p+CADM2组CADM2表达上调。与miR-NC组相比,miR-576-5p组细胞活性显著增强,而与miR-576-5p组相比,miR-576-5p+CADM2组细胞活性显著被抑制(P<0.05)。结论 miR-576-5p在胃腺癌中高表达,通过靶向抑制CADM2的表达促进胃腺癌细胞体内外增殖,抑制DNA损伤和降低对放化疗的敏感性。

CADM2抑制宫颈癌细胞增殖和转移的作用机制研究

目的:研究细胞黏附分子2(CADM2)对宫颈癌细胞增殖和转移能力的影响,并探讨其发挥作用的可能分子机制。方法:采用TCGA数据库分析CADM2在宫颈癌组织中的表达水平;qRT-PCR检测CADM2在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和正常宫颈上皮鳞状细胞H8中的表达,选择低表达CADM2的宫颈癌细胞系进行CADM2过表达慢病毒的感染,分为LV组和OE-CADM2组;qRT-PCR检测各组细胞中CADM2的表达水平;CCK8检测各组细胞增殖能力;流式细胞仪检测各组细胞周期情况;Transwell实验检测各组细胞转移能力;Western blot检测各组细胞中cyclin D1、CDK4和MMP2蛋白的表达。结果:TCGA数据库分析结果显示CADM2在宫颈癌组织中的表达显著低于在正常宫颈组织中的表达。qRT-PCR检测结果显示CADM2在宫颈癌细胞系的表达水平均显著低于在正常宫颈上皮鳞状细胞中的表达,选择表达水平较低的C33A细胞进行功能实验。qRT-PCR检测发现感染CADM2过表达慢病毒后,与LV组相比,CADM2在OE-CADM2组细胞中的表达显著增加,OECADM2组C33A细胞的增殖和转移能力降低,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞中cyclin D1、CDK4和MMP2蛋白的表达降低。结论:CADM2可能通过调控细胞周期相关蛋白和转移相关蛋白抑制宫颈癌细胞增殖和转移能力。

心肌细胞系H9c2缺氧上清诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-2的表达

目的探讨心肌细胞H9c2的缺氧培养上清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-2(ICAM-2)表达的影响及其分子机制。方法大鼠心肌细胞系H9c2在氧浓度为1%的条件下缺氧培养24 h后收集上清,用于HUVEC培养。收集不同时间点HUVEC细胞,提取总RNA和总蛋白,RT-PCR方法检测ICAM-2 mRNA表达,Western杂交方法检测ICAM-2蛋白表达。适当浓度细胞因子孵育HUVEC 6 h,收集细胞提取总蛋白,Western杂交方法检测ICAM-2蛋白表达。ELISA方法测定H9c2缺氧培养上清和常氧培养上清的PDGF-BB和PDGF-AB浓度。结果在mRNA水平,HUVEC在H9c2缺氧培养上清孵育1 h后ICAM-2的表达明显升高,3 h后达到最高;同时在HUVEC表达ICAM-2蛋白在3 h、6 h明显增高。细胞因子刺激实验表明PDGF-BB和PDGF-AB可以使HUVEC表达ICAM-2显著增加。在缺氧上清中PDGF-BB有显著性增加(P<0.05),而缺氧上清中的PDGF-AB却有显著减少(P<0.01)。结论心肌细胞系H9c2的缺氧培养上清可以诱导内皮细胞HUVEC表达ICAM-2,H9c2在缺氧条件下产生的因子PDGF-BB可能是其中起作用的物质。

NCAM2基因的结构、功能及表达调控研究进展

神经细胞黏附分子2(neural cell adhesion molecule 2,NCAM2)是一类属于免疫蛋白超家族的细胞黏附分子(CAM),该蛋白与NCAM1是旁系同源,胞外域由5个免疫球蛋白(Ig)模块和2个纤连蛋白Ⅲ型(FnⅢ)同源模块组成。多聚唾液酸(polysialic acid,PSA)是NCAM家族中的一种重要修饰,但大部分NCAM为非PSA化。NCAM2在脑组织中高表达,是许多神经发育疾病的关键调控候选基因,被认为刺激神经突生长及束缚和抑制突触成熟等。概述了NCAM2的结构、表达和生物学功能,从癌症治疗、唐氏综合征等方面介绍NCAM2的作用及研究进展,并对其存在的问题及发展方向提出展望,以期为今后的研究提供参考。

神经细胞黏附分子衍生肽P2对缺血性脑卒中大鼠神经功能损伤的修复作用及机制

目的探讨神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)衍生肽P2对缺血性脑卒中大鼠神经功能损伤的修复作用及机制。方法提取并培养原代皮质神经元,氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)造模后采用CCK-8法观察不同浓度P2对OGD条件下皮质神经元活性的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白及细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal regulated kinase 1/2,Erk1/2)的表达。选取清洁级雄性SD大鼠进行动物实验,采用大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)建立大鼠脑卒中缺血/再灌注损伤动物模型,造模成功的大鼠按照随机数字表法分为假手术组、MCAO组和MCAO+P2组,每组12只。术后MCAO+P2组大鼠每日一次皮下注射1 mg/kg P2,持续至术后14 d,其余两组大鼠均皮下注射等体积0.9%氯化钠溶液。平衡木实验观察大鼠运动功能损伤及恢复情况。免疫荧光染色检测大鼠脑梗死灶周边的神经元凋亡比率,Western blot检测大鼠脑梗死灶周边脑组织内Erk1/2蛋白的表达。采用SPSS 22.0进行统计分析,平衡木实验数据采用重复测量方差分析,其他实验数据以单因素方差分析进行检验。结果与OGD组相比,0.5,1.0和2.0μmol/L的P2均可以提高OGD条件下神经元细胞活性,其中1μmol/L的P2效果最好(2.436±0.284,1.551±0.410,P<0.05)。Western blot结果显示,加入1μmol/L P2后凋亡相关蛋白bax[(76.120±3.232)%,(88.965±5.208)%,P<0.05]、cleaved caspase-3[(76.736±4.306)%,(97.781±8.111)%,P<0.05]和cleaved caspase-9[(88.833±6.581)%,(104.962±4.788)%,P<0.05]表达均低于OGD组,bcl-2[(56.146±3.882)%,(43.170±6.945)%,P<0.05]以及磷酸化Erk1/2蛋白[(73.583±8.557)%,(55.219±4.615)%,P<0.05]表达均高于OGD组。与MCAO组相比,P2干预后第14天时大鼠瘫痪侧后肢的滑脱率低[(23.438±11.540)%,(41.733±13.631)%,P<0.05],病灶周边神经元凋亡比率低[(13.144±6.485)%,(26.699±6.402)%,P<0.05],大鼠梗死灶周边脑组织内磷酸化Erk1/2蛋白表达高[(74.062±7.458)%,(53.327±7.093)%,P<0.05]。结论低浓度NCAM衍生肽P2可对OGD条件下的神经元以及缺血性脑卒中大鼠发挥神经保护作用,其作用机制可能与Erk信号通路的活化有关。

miRNA-182-5p对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制

目的探讨miR-182-5p对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR-182-5p的表达。将miR-182-5p抑制剂、miR-182-5p模拟物及阴性对照转染食管鳞癌Eca109和TE1细胞,RT-qPCR检测转染后ESCC细胞中miR-182-5p的表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测ESCC细胞的增殖能力,Transwell小室法检测ESCC细胞的侵袭能力。双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与细胞黏附分子2(CADM2)的相互作用,RT-qPCR检测ESCC组织中CADM2的表达,并分析其与miR-182-5p表达的相关性。Western blot检测转染后CADM2、粘着斑激酶(FAK)、p-Akt和Akt蛋白的表达。结果ESCC组织中miR-182-5p的相对表达水平为2.180±1.295,显著高于正常组织(0.890±0.284,P<0.001)。miR-182-5p高表达ESCC患者的生存率低于低表达患者(P<0.05)。ESCC组织中miR-182-5p的表达与ESCC的TNM分期和淋巴结转移有关关(均P<0.05)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450和KYSE70中miR-182-5p的相对表达水平分别为2.449±0.082、2.965±0.088、4.873±0.258、1.338±0.045和1.999±0.082,均高于正常食管上皮细胞Het-1A(0.989±0.087,均P<0.01)。miR-182-5p抑制剂组Eca109和TE1细胞中miR-182-5p的表达下调,细胞的增殖和侵袭能力降低,而miR-182-5p模拟物组Eca109和TE1细胞中miR-182-5p的表达上调,细胞的增殖和侵袭能力增强。双荧光素酶报告实验显示,在CADM23′非翻译区-野生型载体和miR-182-5p模拟物共转染后,Eca109和TE1细胞中荧光素酶的活性显著降低(P<0.01),CADM2是miR-182-5p的直接作用靶点。ESCC组织中CADM2 mRNA的相对表达水平为0.190±0.143,显著低于正常组织(0.845±0.327,P<0.001)。ESCC组织中miR-182-5p和CADM2的表达呈负相关(r=-0.5004,P<0.001)。ESCC组织中CADM2表达与ESCC的TNM分期和淋巴结转移均密切相关(P<0.05)。CADM2高表达ESCC患者的生存率高于低表达患者(P<0.05)。miR-182-5p抑制剂组CADM2蛋白表达上调,FAK、p-Akt和Akt蛋白表达下调,而miR-182-5p模拟物组CADM2蛋白表达下调,FAK、p-Akt和Akt蛋白表达上调。结论miR-182-5p参与ESCC的发生发展过程,有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。

血清VEGF及sVCAM-2在2型糖尿病视网膜病变患者中的表达及意义

目的探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)及可溶性血管内皮细胞黏附分子-2(sVCAM-2)在2型糖尿病视网膜病变患者中的表达及意义。方法选取2018年3月至2019年12月本院收治的2型糖尿病视网膜病变患者54例,根据病变程度分为增生型糖尿病视网膜病变组28例,非增生型糖尿病视网膜病变组26例;收集单纯2型糖尿病患者42例为对照组。采集空腹肘静脉血,测定血清VEGF、sVCAM-2水平以及内皮细胞和内皮祖细胞百分比。结果 3组血清VEGF及sVCAM-2水平比较差异有均统计学意义(均P<0.01)。3组内皮细胞比例、内皮祖细胞比例比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。增生型糖尿病视网膜病变组和非增生型糖尿病视网膜病变组患者血清VEGF、sVCAM-2与内皮细胞水平呈正相关(均P<0.01),与内皮祖细胞水平呈负相关(均P<0.01)。结论血清VEGF及sVCAM-2在2型糖尿病视网膜病变患者中高表达,与微血管内皮功能水平明显相关。