山柰酚对人表皮黑素细胞黑素合成及增殖凋亡的影响观察

目的观察山柰酚对人表皮黑素细胞黑素合成及增殖凋亡的影响。方法取20岁以下男性包皮标本制作人表皮黑素细胞悬液,培养后采用CCK-8法确定山柰酚、H_(2)O_(2)的应用剂量。取黑素细胞分成10μmol/L山柰酚组、阴性对照组:10μmol/L山柰酚组加入10μmol/L的山柰酚,阴性对照组加入等体积培养液,采用NaOH裂解法观察山柰酚对人表皮黑素细胞黑素合成的影响,以黑素合成量表示。取黑素细胞分成对照组、山柰酚组、H_(2)O_(2)组、山柰酚+H_(2)O_(2)组:对照组加入黑素细胞培养48 h,山柰酚组加入10μmol/L山柰酚培养48 h,H_(2)O_(2)组加入0.8 mmol/L H_(2)O_(2)培养48 h,山柰酚+H_(2)O_(2)组加入10μmol/L山柰酚处理24 h后继续加入0.8 mmol/L H_(2)O_(2)再培养24 h;采用CCK-8法观察山柰酚对黑素细胞增殖的影响,以细胞增殖率表示;采用Annenxin V/PI双染色法观察山柰酚对黑素细胞凋亡的影响,以细胞凋亡率表示。结果阴性对照组、10μmol/L山柰酚组黑素合成量分别为100.33±0.68、162.97±3.34,两组相比,P<0.05。对照组、山柰酚组、H_(2)O_(2)组、山柰酚+H_(2)O_(2)组细胞增殖率分别为100.61%±1.71%、110.27%±5.83%、51.49%±2.35%、74.96%±0.53%,组间相比,P均<0.05。对照组、山柰酚组、H_(2)O_(2)组、山柰酚+H_(2)O_(2)组细胞凋亡率分别为4.30%±0.72%、3.80%±1.21%、25.93%±2.23%、9.73%±2.39%,其中H_(2)O_(2)组细胞凋亡率高于其余各组(P均<0.05);对照组、山柰酚组、山柰酚+H_(2)O_(2)组细胞凋亡率组间相比,P均>0.05。结论10μmol/L的山柰酚可促进人表皮黑素细胞的黑素合成。山柰酚预处理可促进H_(2)O_(2)刺激下的黑素细胞增殖,抑制其凋亡。

积雪草甙对酪氨酸酶活性的抑制作用及对Cloudman S91黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的 探讨积雪草甙外用脱色素的作用机制。方法 体外观察积雪草甙对蘑菇酪氨酸酶活性的作用并进行酶促反应动力学分析。进一步以系列浓度的积雪草甙作用于体外培养的Cloudman 591黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。结果 积雪草甙能剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶活性,酶促动力学分析提示积雪草甙为蘑菇酪氨酸酶混合型抑制剂。进一步研究发现,积雪草甙能抑制体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成,但对细胞增殖无明显影响。与氢醌相比,积雪草甙抑制酪氨酸酶活性低于相同浓度的氢醌。结论 积雪草甙可直接作用于黑素细胞,抑制黑素合成,是一种无细胞毒性的皮肤脱色剂。

补骨脂素对A375细胞黑素合成的影响及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究补骨脂素对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路的调控作用机制。方法:通过NaOH裂解法、多巴醌氧化法测得黑素含量及酪氨酸酶活性,使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光PCR法测MAPK通路中关键蛋白激酶和MITF、TYPE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38及加入p38信号通路阻断剂后上述蛋白及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达。结果:补骨脂素具有类雌激素样作用,其与空白对照组比较能抑制细胞黑色素含量和酪氨酸酶活性,显著降低MITF、TYRE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38蛋白表达及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达(P<0.01)。而p38信号通路阻断剂(SB203580)的加入反转了补骨脂的抑制作用。结论:补骨脂素可通过p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素生成。

中药单体胡椒碱促进表皮黑素细胞黑素合成的实验研究

目的:研究中药单体胡椒碱对表皮黑素细胞黑素合成的影响,初步探讨胡椒碱影响表皮黑素细胞黑素合成的作用机制。方法:培养的表皮黑素细胞分别以系列浓度的胡椒碱作用24、72、120h,测定细胞增殖率、黑素含量,激光共聚焦显微镜观察并定量分析荧光染色后细胞内酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白酶(TRP)1、TRP2的表达情况。结果:胡椒碱呈浓度依赖性促进黑素合成,且作用72h时效果最明显。0.50mmol/L胡椒碱作用72h可促进表皮黑素细胞酪氨酸酶、TRP1的表达,而对TRP2的表达无明显影响。结论:中药单体胡椒碱可轻度抑制表皮黑素细胞的生长,明显促进表皮黑素细胞的黑素合成,其机制可能主要通过上调酪氨酸酶和TRP1的表达而发挥作用。

甘草酸、熊果苷及氢醌对小鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的比较研究

比较观察了 18α 甘草酸双胺盐、熊果苷及氢醌对体外培养B16F10鼠黑素瘤细胞细胞形态、酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率的影响 ,结果发现 3种化合物均显示有抑制黑素生成的作用 ,其中以 5 0 μmol/L熊果苷对酪氨酸酶活性和黑素含量抑制作用最为明显 ,其次是10 0 μmol/L 18α 甘草酸双胺盐 ,但二者并无统计学上的差异 (P >0 0 5 )。氢醌对酪氨酸酶活性的影响呈双向作用 ,即低浓度 ( 0 1～ 0 5 μmol/L)时下调酶活性 ,高浓度 ( 1～ 10 μmol/L)时则能轻度上调。细胞增殖率测定结果显示 18α 甘草酸双胺盐、熊果苷在实验浓度 ( 10～ 5 0 0 0 μmol/L)对细胞增殖率无明显抑制 ,而氢醌浓度超过5 μmol/L时能明显抑制细胞增殖或呈现细胞毒性。细胞形态观察发现 1～ 10 μmol/L氢醌作用2 4h ,细胞胞体变小 ,树状突明显增多且变得细长 ,部分树状突呈串珠状改变。提示 18α 甘草酸双胺盐、熊果苷的皮肤脱色作用机制与氢醌可能不同 ,后者低浓度时以抑制酪酸酶活性为主 ,高浓度时主要是细胞毒 ,且细胞早期的损伤部位可能发生在树状突。 18α

黄芩甙对紫外线诱导人正常黑素细胞黑素合成的抑制作用研究

体外培养黑素细胞(MC)分别经隔日长波紫外线(UVA)或中波紫外线(UVB)照射和(或)黄芩甙处理后,观察细胞增殖情况,测定酪氨酸酶活性和黑素含量。结果:(1)UVA使细胞增殖增快,但剂量较大时增殖减慢;UVB使细胞增殖减慢。二者均可使细胞酪氨酸酶活性和黑素含量高于对照组。(2)黄芩甙具有抑制UVA和UVB诱导的MC增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成改变的作用。提示黄芩甙能抑制UVA和UVB诱导的细胞反应,还可通过抑制酪氨酸酶减少MC黑素合成。

淫羊藿苷抑制正常黑素细胞黑素合成的研究

目的:观察中药单体淫羊藿苷对体外培养的正常黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择高、中、低3个浓度的中药单体作用于体外培养的黑素细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。采用间接免疫荧光染色法对药物作用的黑素细胞和对照的酪氨酸酶(tyrosinase熏TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinaserelatedprotein-1熏TRP-1)、TRP-2进行标记,然后采用激光共聚焦显微镜半定量分析淫羊藿苷作用后细胞内3种成分表达量的变化。结果:淫羊藿苷明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.01),且呈浓度依赖性,但淫羊藿苷抑制黑素生成的作用较氢醌弱(P<0.01);淫羊藿苷以浓度依赖的方式促进细胞的增殖,氢醌则抑制了细胞的增殖;淫羊藿苷对黑素细胞内TYR和TRP-2的表达没有明显影响,但是对TRP-1的表达却明显增加了。结论:淫羊藿苷能够抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,这种抑制可能主要通过抑制酪氨酸酶活性起作用。

鱿鱼皮胶原蛋白多肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的研究不同分子量鱿鱼皮胶原蛋白多肽SP1(Mr>10000u)、SP2(6000u<Mr<10000u)、SP3(2000u<Mr<6000u)对小鼠B16黑素瘤细胞黑素含量、酪氨酸酶活性及酪氨酸酶基因表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖活性,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶mRNA表达。结果不同分子量鱿鱼皮胶原蛋白多肽均能明显降低B16黑素瘤细胞黑素含量(P<0.05,P<0.01),抑制酪氨酸酶活性(P<0.01),并下调酪氨酸酶mRNA表达(P<0.05,P<0.01),且剂量效应关系明显。结论不同分子量鱿鱼皮胶原蛋白多肽均具有明显抑制B16黑素瘤细胞黑素合成的作用,其中SP2的抑制效果较SP1、SP3明显(P<0.05)。

日本刺参胶原肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的:研究不同分子量日本刺参胶原肽A1(6000U<Mr<10000U)、A2(Mr<6000U)对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成、酪氨酸酶活性及酪氨酸酶基因表达的影响。方法:采用MTT法测定细胞增殖活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶mRNA表达。结果:不同分子量日本刺参胶原肽均能显著促进B16细胞增殖,抑制B16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性,下调酪氨酸酶mRNA表达,且剂量效应关系明显。结论:不同分子量日本刺参胶原肽均具有显著抑制B16黑素瘤细胞黑色合成的作用。其中,A1的抑制效果较A2显著。

验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的研究验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨验方治疗黄褐斑的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定验方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,475nm比色法测定验方对黑素含量的影响。结果验方祛斑汤对体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖,降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用。结论该方能抑制黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一。

原花青素(OPC)抑制紫外线辐射后表皮黑素细胞黑素合成的实验研究

目的:研究葡萄籽提取物原花青素(OPC)对正常表皮黑素细胞以及紫外线辐射后表皮黑素细胞黑素合成的影响。方法:培养的正常表皮黑素细胞和经10mJ/cm2紫外线辐射后的表皮黑素细胞分别以高中低(10、50、100μg/ml)三种浓度的OPC作用72h,测定细胞增殖率、黑素含量,酪氨酸酶活性。结果:OPC对正常表皮黑素细胞的增殖和黑素合成无明显影响,但可呈浓度依赖性抑制紫外线辐射后的表皮黑素细胞的黑素合成,并能减轻紫外线辐射对细胞增殖的抑制作用。结论:天然寡聚体OPC对紫外线辐射的黑素细胞有光保护作用,它可明显抑制紫外线辐射后表皮黑素细胞的黑素合成,而对正常表皮黑素细胞的黑素合成无影响。

川芎嗪对正常人黑素细胞黑素合成的抑制作用

目的 了解川芎嗪对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法 采用黑素细胞体外纯培养技术 ,在药物处理后的细胞中掺入3H TdR测定细胞增殖情况 ,用氧化DOPA反应测定酪氨酸酶活性 ,NaOH法测量黑素生成量。结果 随着药物浓度增加 ,黑素细胞增殖降低 ,但浓度过高 ( >5 0 0 μg/ml)则显示其毒性作用。细胞酪氨酸酶活性及黑素生成量同药物浓度成反比。结论 川芎嗪在较低的相对安全浓度下 ( 5 0～ 40 0 μg/ml)即可有效抑制黑素细胞增殖 ,降低酪氨酸酶活性 ,从而减少黑素合成。

川芎嗪对中波紫外线诱导黑素细胞黑素生成的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对不同剂量中波紫外线(UVB)诱导正常人黑素细胞黑素合成的影响,并初步探讨其机理。方法:常规分离培养正常人黑素细胞,分别用30mJ/cm2、90mJ/cm2的UVB照射细胞,然后加入100μg/ml、300μg/ml、600μg/ml的TMP孵育至72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果:30mJ/cm2的UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP能显著抑制该效应,并呈剂量依赖性;90mJ/cm2的UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP则能减轻其细胞毒作用,并也表现为剂量依赖性,以600μg/ml的TMP作用最为显著,差异有统计学意义。结论:TMP不但能抑制低剂量UVB照射诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,而且还能减轻高剂量UVB照射对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。

鞣花酸抑制黑素细胞黑素合成及黑素传递的实验研究

目的观察鞣花酸对黑素细胞(melanocyte,MC)合成黑素以及传递黑素的影响并探讨其机制。方法分别纯化培养来自人包皮的表皮黑素细胞和角质形成细胞(keratinocyte,KC),传第2代后以1∶10的比例将两细胞接种到3 cm×3 cm的小培养皿中,单独或混合培养的细胞经高、中、低(100、10、1 mg/L)3种浓度的鞣花酸干预48 h后,分别检测干预前后黑素细胞中黑素含量、酪氨酸酶活性的变化,采用流式法检测混合培养细胞中黑素传递的情况,以10 nmol/L熊果苷为阳性对照。结果 3种浓度鞣花酸浓度均可下调细胞酪氨酸酶活性,并呈浓度依赖性。除了1 mg/L的鞣花酸对黑素细胞黑素合成无明显作用,其余浓度的鞣花酸均可降低黑素含量。鞣花酸同时具有抑制黑素传递的作用。结论鞣花酸可抑制黑素合成及黑素传递,或可作为一种皮肤美白剂应用。

黄芩苷联合NB-UVB对黑素细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响

目的:观察体外培养的人正常黑素细胞经黄芩苷和窄波紫外线(NB-UVB)处理后细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的变化,为白癜风的新疗法研究提供理论依据。方法:人正常黑素细胞分为空白对照组、不同浓度黄芩苷组、不同剂量NB-UVB组及黄芩苷和NB-UVB联合组。应用MTT法检测各组黑素细胞增殖率,应用NaOH裂解法测定黑素水平,应用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组比较,1×10-4 mol·L-1黄芩苷及30mJ·cm-2 NB-UVB组黑素细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,黄芩苷组、NB-UVB组及联合组黑素水平及酪氨酸酶活性均增加(P<0.05或P<0.01);与黄芩苷组和NB-UVB组比较,联合组黑素水平和酪氨酸酶活性均增加(P<0.01)。结论:黄芩苷与NB-UVB联合应用较2种方法单独应用具有更好的促黑素合成效果。

驱虫斑鸠菊黄酮促人表皮黑素细胞黑素合成及其机制的研究

目的:观察驱虫斑鸠菊黄酮对体外培养的人表皮黑素细胞(MC)黑素合成和酪氨酸酶活性的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:噻唑兰比色法(MTT)测定药物对细胞增殖率的影响,选择高、中、低3种浓度(30、10、3μg/ml)的驱虫斑鸠菊黄酮作用体外培养的人表皮黑素细胞,观察对黑素细胞的形态、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响。免疫印迹法测定药物作用前后MC酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)和酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)蛋白表达的变化。结果:≥90μg/ml驱虫斑鸠菊黄酮可明显抑制MC的增殖;试验浓度范围内可明显促进MC黑素合成和酪氨酸酶活性增加,并以浓度依赖方式促进TRP-1的蛋白表达,但对TYR、TRP-2的表达没有影响。结论:驱虫斑鸠菊黄酮在体外能直接刺激表皮MC黑素合成,上述变化可能通过促进TRP-1的蛋白表达和TYR的翻译后修饰作用来完成。

甲氧沙林对培养人表皮黑素细胞黑素合成的影响及信号转导的研究

目的:观察甲氧沙林(8～甲氧补骨脂素,8-MOP)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响,并初步探讨8-MOP诱导表皮黑素细胞分化的信号转导途径。方法:采用4种浓度(10～500μmol/L)的8-MOP作用于体外培养的人表皮黑素细胞,观察不同浓度、不同时间8-MOP对黑素细胞的形态、增殖、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响,并用放射免疫法测定8-MOP对细胞内环磷腺苷酸(cAMP)含量的影响。结果:100μmol/L 8-MOP作用黑素细胞120 h能显著促进酪氨酸酶的活性,提高黑素细胞的黑素含量,8-MOP抑制黑素细胞增殖和提高细胞内cAMP的水平呈浓度依赖性。结论:8-MOP在体外能直接刺激表皮黑素细胞的黑素合成,上述变化可能通过cAMP依赖的蛋白激酶(PK)A信号通路发挥作用。

血清药理学方法研究复方中药对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的运用血清药理学方法研究复方中药白斑一号对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响。方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,运用血清药理学、细胞学的方法,测定药物对B16黑素瘤细胞增殖情况,对酪氨酸酶活性调节作用及黑素含量的影响。结果复方中药白斑一号能促进黑素合成和激活酪氨酸酶,从而阐明了该方在白癜风治疗中的机制。

Q-开关激光对黄褐斑动物模型黑素细胞黑素合成的影响

目的：观察Q开关激光不同能量照射对黄褐斑动物模型黑素细胞的增殖、黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法：用Q开关激光不同能量照射黄褐斑动物模型，取表皮黑素细胞进行细胞培养，采用MTT法测定细胞活力的影响；氢氧化钠裂解法测定黑素的含量；体外多巴氧化反应法测定酪氨酸活性的变化；光学显微镜观察细胞形态学变化。结果：除高能高频组外各能量密度和频率组激光照射后即刻黑素细胞形态无明显变化。第5次治疗后高能量密度照射组明显可见黑素细胞数目减少、体积变小、树突数量减少，长度缩短。而低能量高频率照射组仅黑素细胞体积变小，树突数量减少，长度缩短。与术前比较，低能量低频率照射组黑素细胞增殖、黑素含量、酪氨酸活性无显著差异，但其他三组显著性下降。然而，3周术后黑素细胞增殖、黑素含量、酪氨酸活性增强趋势，有显著性意义（P〈0．05）。结论：当激光能量和频率达到一定阈值时能抑制黑素细胞的合成和酪氨酸活性，而这种损伤在一定范围内是可逆性的。从而为临床应用Q开关Nd：YAG 1064nm激光治疗色素性疾病提供了实验依据。