苦参碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡和迁移的作用及机制研究

目的探讨苦参碱对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用及其机制。方法以不同浓度的苦参碱干预A549细胞,采用CCK-8检测细胞增殖能力变化;Hoechst 33528/PI双染分析细胞凋亡形态变化;划痕实验分析细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western Blot检测Opa1、p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved-caspase-3、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果苦参碱可以降低肺癌细胞A549的增殖活性、提高A549细胞凋亡率。划痕和Transwell实验证实苦参碱可以抑制A549细胞的侵袭转移能力。Western Blot检测发现苦参碱可以提高A549细胞中p53、Bax和Cleaved-caspase-3蛋白的表达,同时可以抑制A549细胞中Opa1、Bcl-2、Caspase-3、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达,且随着浓度变化呈量效关系。结论苦参碱具有抑制肺癌细胞增殖和迁移侵袭,增强细胞凋亡的药理作用,其中药理学机制与其对Opa1/p53/Bcl-2/Bax/Caspase-3信号轴、N-cadherin和Vimentin的调控有关。

丹参酮Ⅱ_(A)对人肺腺癌细胞A549生物学行为的影响初探

目的探讨丹参酮Ⅱ_(A)对人肺腺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法实验分为空白对照组(A组,等体积培养基),顺铂组(B组,10μg/mL顺铂),丹参酮Ⅱ_(A)低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组,5,10,20μmol/L),各组细胞以加入相应药物或培养基处理。采用MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验法观察细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、整合素(integrin)α2、integrinβ1、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达水平。结果与A组比较,B组及C1组、C2组、C3组细胞处理24,48,72 h时的增殖率均显著降低,24 h时的迁移细胞数及侵袭细胞数均显著减少,凋亡率均显著升高(P<0.05)。与A组比较,B组及C1组、C2组、C3组细胞处理24 h的G0/G1期细胞占比均显著升高,S期、G2/M期细胞占比均显著降低(P<0.05)。与A组比较,B组及C1组、C2组、C3组细胞处理24 h的MMP-2,MMP-9,integrinα2,integrinβ1,Cyclin B1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低,Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论丹参酮Ⅱ_(A)可抑制A549细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡,其作用机制可能与下调MMP-2,MMP-9,integrinα2,integrinβ1,Cyclin B1的表达和上调Caspase-3的表达有关。

臭椿酮对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的增敏作用

目的探讨臭椿酮(AIL)对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的增敏作用。方法采用MTT检测AIL对A549和A549/DDP细胞活力的影响;Chou-Talalay中效法分析臭椿酮与顺铂的联合用药指数(CI);流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达水平。结果AIL(0.6μmol/L)与DDP(50μg/mL)联合用药有协同作用;细胞周期阻滞在G1期,同时细胞凋亡率升高;Caspase-3和Bcl-2蛋白表达下降,Cleaved Caspase3、Bax、CDK4和CyclinD1的蛋白表达升高。结论AIL可增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性,协同DDP抑制A549/DDP细胞的生长,促进其凋亡。

曼谷城区总悬浮颗粒物的化学组成特征、来源解析及其人肺上皮细胞A549毒性

城市大气颗粒物暴露与人群健康不利效应密切相关,由于颗粒物来源广泛、组成复杂,其引致的健康毒性效应不尽相同。本研究旨在探查城市颗粒物的化学组成、来源及其对人体细胞的毒性效应。采集泰国曼谷城区一年的大气总悬浮颗粒物(TSP)样品,分析水溶性离子、微量金属元素、碳质组分及有机分子标志物含量,并利用正定矩阵因子(PMF)模型解析曼谷TSP来源;测定人肺上皮细胞A549暴露于TSP水萃取组分和有机萃取组分后细胞毒性的变化,包括细胞存活率、活性氧(ROS)生成、白细胞介素-8(IL-8)及细胞凋亡。结果表明,曼谷TSP浓度呈现干季高、湿季低的季节趋势,有机组分和水溶性离子是TSP的主要组分(>50%)。PMF模型解析结果显示,生物质燃烧(24.7%)、陆地化石燃料燃烧(21.1%)和土壤扬尘(20.6%)是干季内曼谷TSP质量浓度的主要贡献者,而湿季内曼谷TSP的主要来源为陆地化石燃料燃烧(29.5%)、生物质燃烧(16.6%)及海盐(16.0%)。曼谷TSP水萃取组分和有机萃取组分均可引起A549细胞毒性,其中TSP有机萃取组分暴露后的细胞具有更高的死亡率、ROS水平和凋亡率,而TSP水萃取组分暴露后的细胞则具有更高的IL-8水平,这种差异表明诱导胞内ROS(即氧化应激响应)和细胞死亡(细胞存活率与凋亡率)的主导活性组分与诱导IL-8的主导活性成分不同。

冬凌草活性成分Rabdoternin F诱导肺癌细胞A549凋亡及其周期阻滞研究

目的:探讨Rabdoternin F对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及其机制。方法:选取肺癌细胞A549作为研究对象,采用MTT法及单克隆形成试验考察Rabdoternin F对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测Rabdoternin F处理后细胞凋亡、周期分布以及ROS产生情况;Western Blot检测Rabdoternin F作用后A549细胞中凋亡及周期相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Cyclin A2、CDK2的表达。结果:Rabdoternin F可呈时间及浓度依赖性抑制A549细胞增殖及克隆形成;流式细胞术结果表明Rabdoternin F可诱导A549细胞中ROS产生,诱导凋亡,引起细胞周期S期阻滞;Western Blot结果显示Rabdoternin F可显著下调细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin A2表达,进而引起细胞发生S期阻滞,同时显著升高Bax/Bcl-2比值,上调cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达,从而诱导细胞凋亡。结论:Rabdoternin F可通过诱导A549细胞中ROS蓄积,触发凋亡和周期阻滞来抑制人肺癌A549细胞增殖。

罗汉果提取物诱导肺癌细胞A549凋亡的研究

目的探讨罗汉果醇诱导肺癌细胞凋亡的作用及可能的分子机制。方法通过分离、纯化得到罗汉果醇单体,以肺癌细胞A549为对象,采用MTT法检测罗汉果醇对肺癌细胞的抑制作用;利用荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期;以蛋白印迹法检测罗汉果醇对p21、Bcl-2蛋白表达的影响。结果罗汉果醇能抑制肺癌细胞的增殖,具有促进细胞凋亡、阻滞细胞周期的作用;蛋白印迹检测表明,罗汉果醇可以促进p21表达升高,Bcl-2表达下降。结论罗汉果醇通过调节p21、Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡和周期阻滞,从而促进肺癌细胞A549的凋亡。

桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖协同增效诱导肺癌细胞A549 S期阻滞及凋亡的研究

通过细胞抑制试验研究桑黄子实体粗多糖与蛹虫草子实体粗多糖混合后的粗多糖对肺癌细胞A549的抑制作用,为利用药用真菌开发抗肿瘤药物提供试验依据。采用MTT法检测0.8 mg/m L的桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖对肺癌细胞A549增殖均有一定的抑制作用,作用48 h后的抑制率分别为32.95%、41.93%;将0.8 mg/m L桑黄粗多糖和0.8 mg/m L蛹虫草粗多糖按1∶1体积比混合的粗多糖则表现出协同增效抑制A549细胞增殖作用,抑制率可达54.71%。用流式细胞计数法测试分析的结果是:0.8 mg/m L蛹虫草粗多糖可影响A549细胞周期各时相的分布,而0.8 mg/m L桑黄粗多糖则对细胞周期无明显作用,但0.8 mg/m L混合粗多糖对A549细胞周期各时相分布的影响显著增强,G0/G1期细胞比率从75.39%±2.49%降低至64.43%±2.12%(P<0.01),S期细胞比率从16.61%±0.87%升高至27.97%±2.82%(P<0.01);混合粗多糖作用48 h后,A549细胞的晚期凋亡率从正常组的1.92%±0.55%提高至20.75%±0.24%,坏死细胞率由正常组的1.88%±0.43%提高至9.64%±0.42%,表现出明显的协同增效诱导A549细胞凋亡的作用。荧光定量PCR检测结果表明,A549细胞分别用0.8mg/m L的桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖及其混合粗多糖处理后,细胞内周期调控相关蛋白基因Cyclin A、CDK4的mRNA转录水平均显著下调,Cyclin D1、CDK2的mRNA转录水平显著上调,凋亡相关基因Bid、Bak、Cyt-C、Caspase3的mRNA转录水平也显著上调。研究结果提示桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖混合使用,具有协同增效抑制肺癌细胞A549增殖的作用,推测其通过调控细胞周期和细胞凋亡相关基因的表达,导致Cyt-C释放及启动caspase级联反应,从而诱导细胞凋亡。

化州柚花挥发油的GC-MS分析及其对肺癌细胞A549增殖、迁移的影响研究

目的:提取化州柚花挥发油,鉴定其成分,并评价其对肺癌细胞A549增殖、迁移的体外抑制作用。方法:采用水蒸气蒸馏法提取化州柚花挥发油;采用气质联用法(GC-MS)分析其化学组成,以峰面积归一化法计算各组分的相对百分含量;采用MTT法检测其对肺癌细胞A549增殖的抑制作用,计算细胞相对活力和增殖抑制率;采用细胞划痕实验评价其对肺癌细胞A549迁移能力的影响,计算相对迁移面积和迁移抑制率。结果:从100 g化州柚花中提取得到挥发油0.7 g,得率为0.7%。共从中分离得到了46个组分,鉴定了其中35个组分,占总峰面积的96.95%;相对百分含量较高的化合物包括D-柠檬烯(28.43%)、γ-萜品烯(20.74%)、β-月桂烯(11.97%)、芳樟醇(7.41%)等。与空白对照组比较,120 mg/L化州柚花挥发油可显著降低肺癌细胞A549的相对活力(P<0.05),增殖抑制率上升至21.72%;而1、5、10、20、40、60、80、100 mg/L化州柚花挥发油对肺癌细胞A549的相对活力均无显著影响(P>0.05)。作用24、48 h时,60、120 mg/L化州柚花挥发油可显著缩小肺癌细胞A549的相对迁移面积(P<0.05),迁移抑制率分别为132.46%、125.08%(24 h)和124.54%、124.66%(48 h);而30 mg/L化州柚花挥发油对肺癌细胞A549的相对迁移面积均无显著影响(P>0.05)。结论:GC-MS法可用于鉴定化州柚花挥发油的化学组成。化州柚花挥发油以D-柠檬烯、γ-萜品烯、β-月桂烯等成分为主,对肺癌细胞A549的增殖、迁移能力具有一定的体外抑制作用。

不同组分马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对人肺癌细胞A549作用的研究

本研究采用不同组分马尾藻岩藻聚糖硫酸酯（sF）对人肺癌细胞A549细胞的抑制作用进行了研究。根据Mtt比色法检测不同细胞铺板数量及不同质量浓度sF对该细胞生长曲线的影响；不同组分sF在不同时间对该细胞的增殖抑制率；倒置显微镜下观察SF对该细胞形态的影响。研究结果表明，当SF的浓度在1-25mg／mL范围、细胞铺板数量为5×10个／mL时，细胞生长曲线线性良好；各组分sF对人肺癌细胞A549均有抑制作用，其中SF2一R对细胞的抑制效果较强，抑制率为61．06％。

温度对人肺癌细胞A549蛋白质表达的影响

肺癌蛋白质组的研究,有助于阐明其发病机制并对肺癌的防治有益。本文从研究人肺癌细胞热休克蛋白的表达情况出发,通过比较37℃、42℃和45℃培养条件下的人肺癌细胞A549总蛋白质的双向电泳图谱,获得3个温度敏感的差异蛋白点,依次命名为P_1、P_2、P_3。对差异蛋白进行MALDI-TOF-MS分析和采用SWISS-PROT数据库中的Peptident软件检索后,初步鉴定P_1与2种醛酮还原酶家族成员相匹配,P_2可能为一种新蛋白,P_3为锌指蛋白11A。

二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的作用研究

目的:研究二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的抑制作用、最佳给药方案及诱导细胞凋亡。方法:采用MTT法,观察不同给药天数、不同剂量、不同采血时间、不同培养时间的二冬汤血清对肺癌细胞A549的抑制效应,及应用FITC/PI流式细胞术检测最佳给药方案含药血清对A549细胞的凋亡率。结果:二冬汤含药血清对人肺癌细胞A549具有抑制作用,中剂量组[7.99g/(kg.d)]给药5天、10天,末次给药2h的含药血清与细胞培养48h后的抑制作用最明显,抑制率分别为42.27%和39.67%,与空白血清组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01);但从给药天数以及与肺癌细胞培养时间上来看,与空白血清组比较,差异无显著性意义(P>0.05);FITC/PI双染法显示二冬汤含药血清对A549的凋亡总计为(28.45±0.68)%,与空白血清组(6.75±0.46)%比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:二冬汤最佳给药方案为给药5天,末次给药2h后取血,此时制备的含药血清能诱导细胞发生凋亡。

CIK细胞对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响,并探讨机制。方法常规方法体外诱导生成CIK细胞,CIK细胞为效应细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,比较观察人肺癌细胞A549的凋亡情况。结果电镜法观察CIK细胞能诱导人肺癌细胞A549出现凋亡的超微结构变化,annexinV/PI流式细胞分析法检测早期凋亡率发现CIK实验组明显高于对照组。结论体外培养的CIK细胞可明显诱导人肺癌细胞A549凋亡。

碳离子辐照对人肺癌细胞A549细胞周期进程的影响

选取对数生长期人肺癌细胞A549接受0—6.0 Gy碳离子照射,用克隆形成法检测细胞的存活率;并于照射后12和24 h收集细胞,用流式细胞术检测细胞周期各时相的细胞百分比,观察不同剂量碳离子辐照对A549细胞周期进程的影响。结果显示:0—6.0 Gy碳离子照射后细胞存活率显著下降;照射后12 h细胞发生G0/G1期阻滞,而照射后24 h,1.0 Gy照射组细胞在G0/G1期阻滞,2.0—6.0 Gy照射组细胞在G2/M期阻滞。上述结果表明,在A549细胞接受碳离子照射后的12和24 h内,1.0 Gy照射可持续激活细胞G1期检查点,而2.0—6.0 Gy碳离子照射后其细胞周期进程是随时间变化的。

人肺腺癌细胞A549放射前后蛋白质组测定及分析

筛选了人肺腺癌细胞A549放射前后的差异蛋白质,并探讨了其在放射中的作用。用双向凝胶电泳对人肺腺癌细胞A549放射前后的蛋白质谱进行分析,寻找差异蛋白质,并用MALDI-TOF-MS进行蛋白质鉴定。检测出25个差异蛋白质点,对其中差异2倍以上的7个蛋白质点用MALDI-TOF-MS鉴定,鉴定出锰超氧化物歧化酶B亚型前体、角蛋白8、角蛋白9、dystrobrevin、不均一核糖核蛋白1(HNRPH1)、烯醇化酶1等6种蛋白质。用双向凝胶电泳筛选细胞系放射前后差异蛋白质,筛选的蛋白质与抗氧化、辐射防护、信号转导、RNA加工和转运、能量代谢及细胞凋亡有关,对于揭示放射的分子机制有一定的意义。

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及其诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

通过RT-PCR的方法克隆H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并构建了真核表达载体pCMV-Myc/NS1。将此真核表达质粒转染肺腺癌细胞A549,48 h后,经Western印迹检测,NS1基因能在细胞中正确表达。经荧光显微镜、透射电镜观察和流式细胞仪检测,发现该株流感病毒的NS1蛋白可诱导肺腺癌细胞A549凋亡。

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。

白藜芦醇对人肺腺癌细胞A549增殖及迁移的抑制作用

目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌细胞A549增殖及迁移的抑制作用。方法取对数生长期A549细胞,分别应用0、10、30、50、100、300及500μmol/L的白藜芦醇进行干预,24 h、48 h及72 h后检测各组人肺腺癌细胞A549的增殖抑制率。分别应用0、10、30、50、100、300μmol/L白藜芦醇干预A549细胞,24 h、48 h、72 h后测定各组细胞迁移能力。结果在10~100μmol/L浓度范围内,相同作用时间下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇浓度的增加而提高,且在相同的白藜芦醇浓度下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇作用时间延长而提高(P<0.05)。在大于100μmol/L浓度范围时,相同作用时间下不同浓度白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但同一浓度下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇作用时间延长而提高(P<0.05)。相同作用时间下10~300μmol/L白藜芦醇浓度组细胞的划痕宽度较0μmol/L白藜芦醇组增大,且10~300μmol/L白藜芦醇浓度组的划痕宽度随作用时间延长而增大(P<0.05)。结论白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖及迁移有较好的抑制作用,在一定的浓度范围内抑制率呈时间和剂量依赖性。

制滴菌素A治疗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤的实验研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂制滴菌素A (trichostatinA ,TSA)对人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠移植瘤的治疗作用。方法 建立人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型 ,瘤内注射TSA和 0 9%生理盐水 (NS) ,对治疗前后的裸鼠进行瘤重量、瘤体积、细胞形态和凋亡的观察。结果 在实验组和对照组之间 ,瘤重量差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;TSA治疗 1周和 2周后瘤体积与治疗前瘤体积相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。NS治疗 1周后瘤体积与治疗前相比差异无显著性 ,而治疗 2周后瘤体积与治疗前相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。电镜下可见肿瘤细胞的凋亡现象经TSA干预后明显增多。结论 TSA治疗人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型有效。

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。