靶向切割HPV16E6 mRNA的核酶诱导宫颈癌细胞CaSKi凋亡的研究(英)

背景与目的:人乳头瘤病毒与宫颈癌的发生相关,核酶是一种能切割靶RNA的特殊RNA。本研究旨在探讨转染了靶向切割HPV16E6mRNA核酶的宫颈癌细胞株的表型,以及核酶对宫颈癌细胞增殖与调亡的作用。方法:计算机设计特异性切割HPV16E6mRNA的核酶,构建抗HPV16E6核酶(HRz)的真核表达质粒。以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R和CaSKi-P细胞。Northern杂交检测3种细胞中E6基因的表达。流式细胞仪检测3种细胞的凋亡率,将3种细胞在相差显微镜和荧光显微镜下观察,采用荧光(Hoechst33342)染色和TUNEL(TDT-mediateddUTPnickendlabeling)两种方法测定细胞凋亡。流式细胞术测定HPV16E6、c-myc、bcl-2、p53、Fas等蛋白的表达。结果:RNA点杂交证实核酶mRNA能稳定表达于CaSKi-R细胞中。Northern杂交证实CaSKi-R中E6mRNA表达水平较CaSKi细胞明显降低,而CaSKi-P和CaSKi细胞的E6mRNA表达水平无差异。CaSKi-R细胞凋亡率明显高于CaSKi和CaSKi-P细胞,细胞周期阻滞于G2期,S期细胞百分率下降。抗HPV16E6核酶能明显减少CaSKi-R细胞中HPV16E6、c-myc、bcl-2蛋白的表达,增高p53蛋白的表达;这种现象并不发生于CaSKi-P细胞中。Fas蛋白的表达在3种细胞中都相近。

宫颈癌根治术中加用顺铂诱导Caski细胞凋亡的机制

目的探讨宫颈癌根治术术中加用顺铂的临床效果及诱导Caski细胞凋亡的机制。方法 2009年3月-2014年3月随机在包头医学院第三附属医院选择需要行宫颈癌根治术的患者300例,根据术中是否加用顺铂治疗分为顺铂组和对照组各150例,采用不同的方法了解加用顺铂后的优势。1Caski细胞形态应用倒置显微镜;2Western印迹检测方法分析Caski细胞内Bcl-2、Bax等凋亡相关基因的表达;3流式细胞仪及相应方法测定Caski细胞的细胞周期时相改变和细胞凋亡率;4MTT方法检测Caski细胞的生长抑制率;5荧光染色方法观察Caski细胞线粒体膜电位改变。结果手术中加用顺铂可使得Caski细胞核浓缩、破碎,促进细胞器退变、凋亡小体形成,加快凋亡,顺铂不仅能够造成Caski细胞形态变化,对Caski细胞还可以起到明显的抑制增殖作用,降低G0、G1、G2、M期细胞,升高S期细胞,改变细胞周期,诱导并加速细胞凋亡,在根治术中应用顺铂可抑制肿瘤细胞Bcl-2表达,促进Bax合成,活化Caspase 3,并降低细胞线粒体内膜跨膜电位等。结论顺铂有很好促进Caski细胞凋亡的效果,降低Caski细胞数量,宫颈癌根治术术中加用顺铂可明显提高患者治疗效果,降低复发率,但仍需完善治疗指证后广泛推广。

宫颈癌根治术中加用顺铂的临床疗效分析

目的探讨宫颈癌根治术中加用顺铂的临床效果。方法选择2004年3月至2009年3月建湖县人民医院收治的须行宫颈癌根治术的患者300例,根据术中是否加用顺铂治疗分为顺铂组和对照组,各150例。随访5年,观察两组患者术后复发率、生活质量,对比病死率,分析顺铂诱导Caski细胞凋亡的机制。结果对照组患者5年复发率、病死率高达64.0%(96/150)和34.7%(52/150),顺铂组分别为29.3%(44/150)和20.7%(31/150),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后顺铂组患者Kupperman分数低于治疗前[(16.6±6.5)分比(20.4±3.7)分],但明显高于对照组[(6.2±2.4)分],差异有统计学意义(P<0.01)。顺铂组患者性生活、婚姻质量等明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论宫颈癌根治术术中加用顺铂可降低5年复发率和病死率,提高患者生活质量,在利用顺铂诱导Caski细胞凋亡的同时给患者带来好处,需完善治疗指征后广泛推广。