麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨组织形态及细胞bFGF影响的研究

目的:观察麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨组织形态及细胞bFGF的影响,探讨麝香乌龙丸治疗骨关节炎是否与改变软骨组织形态以及调节细胞bFGF有关。方法:建立木瓜蛋白酶关节腔注射兔实验性膝骨关节炎模型,灌胃4周后,观察软骨组织形态及细胞bFGF表达情况。以软骨组织病理积分、阳性细胞率、阳性细胞平均光密度对观察目标量化。结果:麝香乌龙丸能减轻实验兔关节软骨病理积分,麝香乌龙丸组与模型组比较单项病理积分有显著差异(P<0.01),麝香乌龙丸组与模型组比较病理总积分有显著差异(P<0.01)。麝香乌龙丸能上调细胞bFGF的表达,麝香乌龙丸组与模型组和正常组比较均有差异(P<0.01),模型组和正常组比较无差异(P>0.05)。结论:麝香乌龙丸治疗膝骨关节炎可能与调节bFGF的表达,修复软骨损害有关。

P物质对肉芽组织成纤维细胞bFGF表达的调控作用及意义

目的 观察感觉神经肽P物质 (substanceP ,SP)对离体培养的肉芽组织成纤维细胞中碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)表达的特点及调控作用。 方法 采用甲醛注射的方法造成Wistar大鼠局部无菌性炎性反应 ,提取肉芽组织进行成纤维细胞原代培养 ;采用RT PCR方法检测SP对肉芽组织成纤维细胞bFGF基因表达的调控作用 ,观察时间及剂量 效应关系 ;采用Western blot方法检测bFGF蛋白表达情况 ,观察时间及剂量 -效应关系。结果 10 -7mol/LSP可诱导成纤维细胞bFGFmRNA的表达 ,在作用后 3、6h与对照组比较 ,差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1) ;12h后可检测到bFGF蛋白表达明显增强 (P <0 .0 1) ,2 4h达高峰 ,4 8h后逐渐回落。SP在 10 -9～ 10 -5mol/L范围内可显著促进成纤维细胞bFGFmRNA表达 ,在 10 -8～ 10 -5mol/L范围可诱导bFGF蛋白的表达 ,均在 10 -7mol/L剂量点达到峰值 (P <0 .0 1)。 结论 SP可诱导肉芽组织成纤维细胞bFGF基因和蛋白的表达 ,且呈现出一定的时间和剂量特点 ,在SP调控创伤愈合的作用中具有重要意义。

bFGF促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经元转化及机制

目的 探讨碱性成纤维生长因子对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的作用及信号通路。方法 利用bFGF与不同生长因子和化学诱导剂组合诱导间充质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)向神经元转化 ,观察分化过程中细胞形态、数目的变化 ,观察免疫细胞化学检测分化后细胞神经细胞标志蛋白和部分神经功能相关蛋白以及FGFR的表达情况 ,并计算转化率。结果 ① 3组不同条件诱导后 ,MSCs均能分化为具有典型神经元形态的细胞 ,并明显表达NSE、MAP2和 5 HT1D,但不表达GFAP ;②bFGF预诱导组的转化率明显高于未预诱导组 ;③诱导后的神经元样细胞FGFR3表达明显增强。结论 以DMSO和BHA为基础诱导剂 ,bFGF预处理可明显提高MSCs跨胚层分化为神经元样细胞的转化率 ,浓度为 10ng/ml的bFGF主要是通过FGFR3作用于MSCs。

粘着斑激酶在bFGF引起细胞迁移中的动态变化及意义

本文旨在观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)引起体外培养的ECV-304细胞迁移时粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的动态变化及FAK与细胞迁移的关系。建立体外培养的ECV-304细胞划痕损伤模型,观察经不同剂量(0、5、10、15 ng/ml)bFGF作用12-24 h内细胞迁移距离(电脑图像测定)和FAK蛋白含量(Western blot)、活性(免疫沉淀加Western blot)和mRNA(RT-PCR)的动态变化。用免疫细胞化学(ABC法)染色研究整合素α3表达。结果发现,低浓度(5 ng/ml)bFGF促进细胞迁移,FAK蛋白含量增加42.07±2.02％、活性增加71.37±1.85％,与对照组比,差异显著(P<0.05),并与迁移距离呈正相关(P<0.05)。高浓度(15 ng/ml)bFGF抑制细胞迁移,FAK的变化相反。FAK mRNA的变化比蛋白变化早出现6 h。与对照细比,各实验组整合素α3表达无明显差异。由此可见,不同剂量bFGF对ECV-304细胞迁移的双相调节作用与FAK含量、活性与mRNA表达呈正相关,FAK在bFGF引起的细胞迁移的信号转导途径中起着重要作用。

COX-2、bFGF及TGFβ1在慢性粒细胞白血病中的表达及其意义

目的:检测不同分期慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者血清环氧合酶-2(serum cyclooxygenase-2,COX-2)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)及转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGFβ1)的变化,并探讨其在CML的诊治及预后判定中的临床意义。方法:以在安康市中心医院就诊的50例初诊患者(其中慢性期30例,加速期10例,急变期10例)为研究对象,以该院体检中心健康体检者40例为正常对照,采用ELISA方法检测血清COX-2、b FGF及TGFβ1水平,并对CML患者进行治疗前、后两个不同阶段的动态检测。结果:初诊时,CML组患者的血清COX-2及b FGF含量显著升高,而TGFβ1含量明显减低(P<0.001)。CML组加速期和急变期患者血清b FGF及COX-2水平较慢性期患者均明显增高,而TGFβ1水平均显著减低,差异有统计学意义。完全缓解(complete response,CR)时,血清b FGF及COX-2含量明显下降,而TGFβ1含量基本恢复到正常水平,与正常对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);未达到缓解时,血清b FGF、COX-2及TGFβ1水平与CR组比较差异显著(均为P<0.001)。CML初诊患者治疗前血清b FGF、VEGF水平与TGFβ1呈负相关(分别为r=-0.330,P=0.020;r=-0.632,P<0.001)。结论 :CML患者初诊时COX-2及b FGF高表达,TGFβ1低表达,经过甲磺酸伊马替尼治疗后,达到CR时,血清这些因子水平基本恢复正常,提示C ML的发生、发展与这些因子密切相关。因此,动态监测CML患者血清COX-2、b FGF及TGFβ1水平,可作为CML病情评估的重要参考指标。

非小细胞肺癌患者血清bFGF和MMP-9检测的临床意义

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在非小细胞肺癌患者和健康者的血清样本中的含量及其与肿瘤分化程度、临床分期、远处转移等病理特征的相关性。方法通过酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测非小细胞肺癌患者和正常对照者的血清样本中的MMP-9、bFGF的浓度,并进行统计学分析。结果 MMP-9和bFGF在非小细胞肺癌患者血清中的含量明显高于健康人群(P<0.01),并与肿瘤分期、肿瘤大小、远处转移呈正相关(P<0.05),与分化程度呈负相关(P<0.05);而与年龄、性别、肿瘤的病理类型无关(P>0.05),经Pearson相关性检验发现两者之间显著相关(r=0.807,P<0.01)。结论 MMP-9和bFGF共同参与非小细胞肺癌的发生发展、侵袭转移过程,联合检测可作为临床监测病情发展的指标。

hbFGF基因转染骨髓间充质干细胞促进种植体周骨界面形成的研究

目的:本研究通过构建质粒载体pDC316bFGF-IREs-EGFP,将bFGF基因转移至MSCs中,再移植到种植体周围,为寻找一种新的促进种植体周骨界面形成的方法提供实验依据。方法:采用密度梯度离心法分离培养犬BM-MSCs,通过细胞表面标记和分化能力进行鉴定。将重组质粒pDC316bFGF-IREs-EGFP通过脂质体Lipofectamine2000介导转染犬骨髓源MSCs。再将其与藻酸钙凝胶复合移植到种植体周围,4周后通过大体、放射线、Micro-CT及组织学观察缺损再生情况。结果:结果显示实验组种植体周围骨组织的再生速度明显快于未转染bFGF的MSCs移植组。讨论和结论:pDC316bFGF-IREs-EGFP转染的MSCs可以提高骨形成的效率,具有潜在的临床应用价值。

bFGF缓释微球的制备及其促雪旺细胞分裂增殖的初步研究

研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缓释微球的制备方法及其对雪旺细胞的促分裂增殖作用。以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,采用复乳包囊法制备bFGF-PLGA缓释微球,并对微球的形态学、粒径分布、载药量和包封率、及体外释药进行研究。将bFGF、bFGF-PLGA微球分别加入不同组的雪旺细胞培养液中,分别测定雪旺细胞的数量、活力和细胞周期。结果显示,复乳包囊法制备的bFGF-PLGA缓释微球表面光滑圆整,球体均匀度好;微球平均粒径为1.552±0.015μm,平均径距为1.310±0.010;载药量和包封率分别为(27.18×10-3)%±(0.51×10-3)%、66.43%±1.24%;微球的体外释药过程较为稳定,11d释药率为72.47%。体外细胞试验中,培养1、2d时,bFGF组的细胞计数、吸光度明显高于bFGF缓释微球组;培养3、4d时,bFGF组和bFGF缓释微球组的细胞计数、吸光度无统计学差异;培养6、8d时,bFGF缓释微球组的细胞计数、吸光度明显高于bFGF组。流式细胞仪检测结果显示,培养2d后,bFGF组的G2/M+S期百分数高于bFGF缓释微球组;培养4、8d后,bFGF缓释微球组的G2/M+S期百分数高于bFGF组,差异具有统计学意义。说明采用复乳包囊法制备bFGF-PLGA缓释微球的工艺可行,微球中bFGF的生物活性保存良好,能缓慢持续释放活性bFGF,促进雪旺细胞的分裂增殖。

胶原-壳聚糖/bFGF培养人成纤维细胞生物特性研究(英文)

目的:研究一种适于人成纤维细胞生长的组织工程支架材料,确定碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的用量。材料与方法:采用胶原与壳聚糖整合bFGF做为人成纤维细胞生长的支架材料,用体外细胞培养法确定胶原与壳聚糖在材料中的配比,用体外细胞相容性直观法观察材料与人成纤维细胞的相容性。结果:选择出了胶原与壳聚糖在材料中较佳的配比,确定了bFGF在材料中的用量范围,人成纤维细胞在胶原-壳聚糖/bFGF膜持续生长繁殖,具有生物降解性。材料与细胞呈低毒性反应。结论:胶原-壳聚糖/bFGF可做为组织工程的支架材料。

利用植物反应器生产碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的研究

综述了植物反应器发展的现状以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)转化亚麻芥的研究目的意义,一方面可利用植物系统生产外源蛋白,另一方面为我国农业生产路线提供了一条新的思路。

白藜芦醇对K562细胞COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF基因表达的影响

目的:探讨白藜芦醇对人白血病细胞增殖的影响及其机制研究。方法:采用不同浓度白藜芦醇(resveratrol,Res)及伊马替尼(imatinib,IM)对K562细胞进行干预,流式细胞术观察细胞凋亡情况,采用荧光定量PCR及Western blot检测其给药后COX-2、b FGF、TGFβ1及VEGF的变化。结果:流式细胞术检测显示单用白藜芦醇及单用伊马替尼对人白血病细胞K562均具有凋亡作用,而随着白藜芦醇浓度的增加,K562细胞的凋亡率逐渐增高;随着伊马替尼浓度的增加,K562细胞的凋亡率逐渐上升。PCR及Western blot结果显示,与对照组相比,0.2μmol/L伊马替尼组的COX-2、b FGF及VEGF的蛋白表达量及mRNA表达水平明显降低,而TGFβ1的蛋白表达量及mRNA表达水平显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);而用200μmol/L白藜芦醇+0.2μmol/L伊马替尼联合作用于K562细胞后,与不用药对照组和0.2μmol/L伊马替尼组比较,细胞中TGFβ1的蛋白表达量及mRNA表达水平显著增高,而COX-2、bFGF及VEGF的蛋白表达量及mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇及伊马替尼对白血病K562细胞株均具有促进凋亡作用,联合用药可明显增加其凋亡率。白藜芦醇抗白血病K562细胞作用机制可能是通过下调COX-2、bFGF及VEGF mRNA和蛋白的表达及上调TGFβ1 mRNA和蛋白的表达来实现的。

联合应用rhBMP-2与bFGF对兔骨髓基质细胞表达VEGF及其成骨潜能的影响

目的:观察兔骨髓基质细胞经rhBMP-2与bFGF刺激后,其VEGF因子表达及成骨潜能的变化。方法:取兔双侧股骨骨髓基质细胞,采用骨髓基质细胞体外培养技术,单独或联合以rhBMP-2、bFGF刺激细胞。细胞培养5 d后,进行细胞形态(HE染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(改良钙钴法染色)、成骨结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测。结果:①联合应用rhBMP-2、bFGF在细胞记数、ALP活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率4个检测项目上优于单独应用rhBMP-2或bFGF,差别有统计学意义。②分开联合应用rhBMP-2、bFGF优于同时应用rhBMP-2或bFGF。结论:合理的联合使用rhBMP-2和bFGF,不仅可促进骨髓基质细胞的快速增殖及向成骨细胞转化,还可促进促血管内皮细胞增生的重要介质VEGF的表达。此项技术可应用于骨组织工程,促进工程化骨在体内的存活。

bFGF、NGF在基底细胞癌表达的研究

目的:探讨基底细胞癌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和神经生长因子(NGF)在基底细胞癌发病中的可能作用。方法:用免疫组化的方法对10例基底细胞癌进行了检测。结果:10例基底细胞癌均表达bFGF及NGF。结论:bFGF及NGF可能在基底细胞癌的发生中起一定作用。

bFGF对犬隐静脉间质细胞体外培养细胞内钙及钙化的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对作为组织工程瓣间质种子细胞的犬隐静脉间质细胞(SVICs),体外培养细胞内钙及钙化的影响。方法:分离培养犬隐静脉间质细胞,以免疫组织化学方法鉴定其特征。将3~6代传代细胞分为2组:对照组,细胞在正常标准条件下培养;bFGF组,细胞在含5μg/L浓度bFGF条件下培养。2周后激光共聚焦显微镜检测细胞内钙,流式细胞仪检测细胞凋亡率,原子吸收法测定细胞层钙沉积及von kossa染色。结果:犬隐静脉间质细胞主要由平滑肌细胞、肌纤维母细胞和成纤维细胞组成。培养2周后,对照组有细胞结节形成,bFGF组细胞呈极性密集生长,无明显细胞结节形成。对照组von kossa染色呈弱阳性,bFGF组阴性。对照组细胞内游离钙浓度相对比值高于bFGF组(45±3vs19±7,P<0.01),bFGF组细胞凋亡率及细胞层钙沉积显著低于对照组[(7.6%±0.88%vs25.4%±1.68%,P<0.01;0.192±0.024μmol/gvs2.198±0.173μmol/g,P<0.01)]。结论:bFGF具有维持犬隐静脉间质细胞内游离钙的平衡,抑制细胞凋亡及钙化的作用。

bFGF对人晶状体上皮细胞系内钙离子及IP3R、RyR的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶状体上皮细胞系LEC-B3内静息Ca2+浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)、ryanodine受体(RyR)表达的影响。方法:LEC-B3细胞系传代培养,分别以1,10,100μg/L bFGF诱导第3代细胞的增殖,MTT法检测其增殖度,激光扫描共聚焦显微镜测细胞内静息钙浓度;RT-PCR(reverse-transcriptase,PCR)方法检测10μg/L bFGF作用后细胞内IP3R和RyRmRNA的表达。结果:与对照组相比,3个浓度的bFGF对LEC-B3都有促增殖作用(P<0.01),其中10μg/L作用最强;bFGF作用后细胞内Ca2+浓度呈bFGF浓度依赖性增高,10μg/L,100μg/LP<0.01,1μg/L<0.05;10μg/L bFGF作用后的细胞IP3RI mRNA表达无明显变化,III型表达明显减弱(P<0.01),ryan-odineRI,IIImRNA表达升高(P<0.05,0.01)。结论:bFGF诱导LEC-B3细胞增殖引起细胞内钙离子浓度增加。Ca2+升高呈bFGF浓度依赖性,并不与细胞增殖度平行。bFGF对IP3R和RyR亚型的mRNA表达有一定影响,并且细胞内Ca2+浓度升高与bFGF刺激RyRmRNA表达升高有关。

TGF和bFGF对牙周膜细胞ALP活性及Fn合成的影响

目的探讨转化生长因子α,β(TGFα,β)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜(PDL)细胞碱性磷酸酶(ALP)活性及纤维结合蛋白(Fn)合成的影响。方法体外培养人PDL细胞,与一定浓度的TGFα,β或bFGF作用后,用ELISA法检测Fn含量,用酶动力学方法检测ALP活性。结果TGFα使PDL细胞合成Fn的水平(0.937±0.036)比对照组(0.687±0.023)增加了136.4%(P<0.05),TGFβ使Fn的水平(2.885±0.052)明显提高(P<0.001),bFGF组(0.738±0.041)则没有明显影响(P>0.05)。与对照组(2.431±0.051)相比,TGFβ(1.748±0.042)可抑制PDL细胞的ALP活性(P<0.05),bFGF(1.138±0.046)显著抑制PDL细胞的ALP活性(P<0.01),TGFα(0.331±0.022)的抑制作用更强(P<0.01)。结论TGFα,β和bFGF可能通过调节PDL细胞的ALP活性和合成Fn的水平,发挥PDL细胞在牙周组织的再生中的作用。

人参总皂苷对萎缩性胃炎大鼠免疫球蛋白及bFGF蛋白的影响

目的研究人参总皂苷对萎缩性胃炎大鼠免疫球蛋白及成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白的影响。方法48只大鼠随机分为健康组(健康大鼠)、胃炎组(胃炎模型大鼠)、对照组(胃炎模型大鼠给予替普瑞酮干预)、人参组(胃炎模型大鼠给予人参总皂苷干预)各12只,各组均干预8 w。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃黏膜组织病理形态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM水平;免疫组化检测胃黏膜组织转化生长因子(TGF)-β1阳性表达。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃黏膜组织中重组人音猬因子(Shh)、重组人Patched蛋白(Ptch)、锌指蛋白(Gli)-1 mRNA表达水平。Western印迹检测胃黏膜组织中bFGF、肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达水平。结果与健康组相比,胃炎组黏膜产生不同程度萎缩并变薄,固有层腺体减少,排列杂乱无章,有炎性细胞浸润。与胃炎组相比,人参组与对照组黏膜腺体数量减少,排列较为有序,炎性细胞浸润减少,以人参组效果更佳。与健康组相比,胃炎组血清中IgG、IgA、IgM水平及胃黏膜组织中Shh、Ptch、Gli-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),TGF-β1、bFGF、TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与胃炎组相比,人参组与对照组血清中IgG、IgA、IgM水平及胃黏膜组织中Shh、Ptch、Gli-1 mRNA表达水平显著升高,TGF-β1、bFGF、TNF-α蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与人参组相比,对照组血清中IgG、IgA、IgM显著降低,bFGF蛋白显著升高(P<0.05),其余指标比较无统计学差异(P>0.05)。结论人参总皂苷可提高萎缩性胃炎大鼠免疫功能,降低炎症水平,改善病情严重程度,其作用机制可能与抑制bFGF表达有关。

IGF-1、bFGF对人牙髓干细胞的体外诱导分化的影响

目的研究IGF-1、bFGF对人牙髓干细胞分化的影响。方法酶消化法获得人牙髓干细胞,形态学观察,计算细胞克隆形成率;第3代牙髓干细胞,以IGF1、bFGF细胞因子诱导,免疫组化染色和RTPCR方法检测牙本质涎蛋白(dentinsialoprotein,DSP)、牙本质基质蛋白1(dentinmatrixprotein1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)的mRNA的表达。结果人牙髓干细胞呈集落状生长,在体外具有一定的克隆形成能力,经细胞因子刺激后细胞表达DSP、DMP-1蛋白和DSPP的mRNA。结论人牙髓组织中有呈克隆样生长的成体干细胞,IGF1、bFGF可诱导人牙髓干细胞定向分化。

沙利度胺抑制肿瘤细胞分泌VEGF/bFGF机制的探讨

目的:探讨Cereblon(CRBN)对沙利度胺抑制人肺癌A549细胞及人肝癌HepG2细胞分泌VEGF/bFGF的影响。方法:采用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰技术建立稳定敲低CRBN的A549细胞系(A549_(CRBN))及HepG2细胞系(HepG2_(CRBN))并通过实时定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质印记(Western blot)实验验证。将A549细胞分为阴性对照组(A549_(luciferase))、CRBN低表达组(A549_(CRBN));HepG2细胞分为阴性对照组(HepG2_(luciferase))、CRBN低表达组(HepG2_(CRBN)),以上细胞按照3×10^(5)cells/well接种到6孔板中,放入37℃,5%CO_(2)的培养箱中培养24 h,分别加入1 ml含100μmol/L沙利度胺(thalidomide组)和1 ml 1‰DMSO(control组)的培养液,继续培养24 h再行后续实验,每组设计3个复孔。MTS法检测沙利度胺对细胞增殖的影响;Real-time PCR检测VEGF、bFGF、c-jun mRNA表达,ELISA法检测VEGF、bFGF蛋白表达。结果:与对照组比较,沙利度胺在浓度为1、10、50、100μmol/L时对A549及HepG2细胞的增殖能力无显著影响(P>0.05)。与A549_(CRBN)或HepG2_(CRBN)组比较,A549_(luciferase)及HepG2_(luciferase)组分泌的VEGF及bFGF均显著降低(P<0.05)。与A549_(luciferase)或HepG2_(luciferase)细胞的对照组比较,沙利度胺可抑制A549_(luciferase)和HepG2_(luciferase)细胞的VEGF和bFGF的表达(P<0.05),而对A549_(CRBN)和HepG2_(CRBN)细胞中VEGF和bFGF的表达无显著抑制作用;与HepG2_(luciferase)细胞的对照组比较,沙利度胺可抑制HepG2_(luciferase)细胞的c-Jun表达(P<0.01),而对HepG2_(CRBN)细胞的c-Jun表达无显著抑制作用。结论:沙利度胺对A549和HepG2细胞VEGF和bFGF表达的抑制作用可能是通过CRBN介导的,而c-Jun可能是抑制作用的关键转录因子之一。