老年人无症状细菌尿与免疫系统关系研究

目的:探讨老年人无症状细菌尿与其免疫功能的关系。方法:应用流式细胞术检测60例无症状细菌尿的老年住院患者外周血淋巴细胞亚群,采用免疫比浊法检测其免疫球蛋白IgA、lgG、IgM,并与30名健康体检老年人及30名健康体检年轻人对照,分析老年人无症状细菌尿的病因、病原以及与免疫系统的关系。结果:老年人无症状细菌尿最常见的原因是大肠杆菌感染最多见。健康老年人较健康年轻人CD3、CD4明显下降。无症状细菌尿老年组CD3、CD4、CD4/CD8较健康年轻组明显下降,而IgM、IgG高于健康年轻组;IgA、IgM、IgG、CD8水平显著高于健康老年组。结论:老年人无症状细菌尿与其免疫功能变化有关,表现为细胞免疫功能部分减弱及体液免疫相对增强,使得我们必须重新解读其与免疫系统的关系,无症状的细菌感染可能会重新激活老年人的免疫系统。

问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位

目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR／PatocI抗血清为一抗的Westernblot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL2ls的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果：改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8．5％和46．5％。两种rLipL21均能与TR／PatocI抗血清发生免疫结合反应，免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近，均为1：80～1：320。LipL21位于钩体外膜表面。结论：LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量，其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性，其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。

1型嗜肺军团菌和其他常见肺炎致病菌共同抗原的研究

目的:探讨1型嗜肺军团菌(LP 1)与其他常见细菌性肺炎病原菌之间是否存在共同抗原。方法:用LP 1菌体抗原免疫家兔,取其血清作为多克隆一抗;提取LP 1和肺炎链球菌等细菌的菌体抗原;将这些抗原进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE);再进行免疫印迹分析(W estern-b lot)。结果:W estern-b lot显示:表皮葡萄球菌、流感嗜血杆菌和铜绿假单胞菌在154 kD a和97 kD a处、流感嗜血杆菌和铜绿假单胞菌在79 kD a处、大肠埃希菌和流感嗜血杆菌及肺炎克雷伯菌在58 kD a处、铜绿假单胞菌在44 kD a处与LP 1多抗均有交叉反应。金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌与LP 1多抗未出现结合反应。结论:LP 1和流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌之间存在有3个具有交叉反应的膜抗原条带,和表皮葡萄球菌之间有2个,和大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌之间只有1个,和金黄色葡萄球、肺炎链球菌间没有交叉反应的膜抗原条带。

新式SOE PCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用

目的探讨新式SOEPCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用。方法通过引物设计的改变,将6种人VH基因和11种人VL基因利用两步法直接互相两两连接为人scFv基因,并且与传统的SOE法进行对比。scFv基因用于构建噬菌体单链抗体库。结果新式SOEPCR法成功的将6种人VH基因和11种人VL基因连接成66种不同的人scFv基因,与传统的SOEPCR法相比,效率高且方法简便,经过约130次电转化后,抗体库的总库容为5·58×109。结论成功地改进了传统的SOEPCR方法,高效组装了66种不同的人scFv基因,提高了抗体库的多样性。

Helicobacter pylori infection causes gastric cancer? A review of the epidemiological,meta-analytic, and experimental evidence

Since the discovery of Carnpylobacter-like organisms （Helicobacter pylori） more than two decades ago the possibility of a relationship with gastric cancer has been postulated, tested and supposedly proven. There have been numerous human studies of various designs from many countries around the world. Several meta-analyses have been published and more recently a small number of experimental animal studies were reported looking at the association between Helicobacter pylori infection and gastric cancer. Over the years, the human epidemiological studies have produced conflicting results; the metaanalyses have as one would expect produced similar pooled estimates; while the early experimental animal studies require replication. The exact mechanisms by which H pylori might cause gastric cancer are still under investigation and remain to be elucidated.

活动性肺结核患者诊断指征与抗体水平观察

目的:调查痰结核菌培养阳性、培养阴性、有空洞和无空洞活动性肺结核患者(TB)血清抗PPD抗体和抗38KDa抗原抗体阳性率和特异度。方法:采用SPA-ABC ELISA检测各组TB和健康人血清PPD抗体和抗38KDa抗体。结果:培阳TB、培阴TB与健康人血清PPD抗体和38KDa蛋白抗体检测阳性率分别为70.6%、36%、3.8%和84.7%、76%、0.96%,38KDa和PPD特异度分别为91%和87.8%;空洞TB、无空洞TB和健康人PPD抗体和38KDa蛋白抗体的阳性率分别为79%、51.2%、4.95%和85.5%、73.2%、1.98%,38KDa抗原和PPD用于空洞结核病血清学诊断的特异度分别为93%和91.9%。结论:38KDa抗原用于血清学诊断对活动性肺结核有很高的阳性率和特异度。

全人源抗鼻咽癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

目的从全人源抗鼻咽癌噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体（ScFv），并对其特异性进行鉴定。方法通过噬菌体表面展示技术把ScFv表达在噬菌体表面，以鼻咽癌细胞作为抗原，用抗原递减法，通过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体，及ELISA筛选，获得特异阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果通过对抗体库进行三轮正负淘洗和富集后，随机挑选4212个克隆进行ELISA，发现3个克隆对CNE2呈强阳性反应，而与人正常细胞系HUVEC等呈弱阳性反应或不反应。对克隆HNSA033进一步进行免疫细胞化学验证，结果与ELISA反应一致；免疫组织化学鉴定表明克隆HNSA033与鼻咽癌组织和鼻咽组织阳性率的差别有统计学意义。结论通过淘选富集、ELISA和免疫化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆，为鼻咽癌发病机制的研究和临床诊断以及治疗奠定了基础。

Cell biology and immunology lessons taught by Legionella pneumophila

Legionella pneumophila is a facultative intracellular pathogen capable of replicating within a broad range of hosts. One unique feature of this pathogen is the cohort of ca. 300 virulence factors(effectors) delivered into host cells via its Dot/Icm type IV secretion system. Study of these proteins has produced novel insights into the mechanisms of host function modulation by pathogens, the regulation of essential processes of eukaryotic cells and of immunosurveillance. In this review, we will briefly discuss the roles of some of these effectors in the creation of a niche permissive for bacterial replication in phagocytes and recent advancements in the dissection of the innate immune detection mechanisms by challenging immune cells with L. pneumophila.