细菌变异株生长热谱研究

用微量热法研究微生物的生长与代谢,是生物热力学一个新的研究领域.我们已经测得细菌生长的完整热谱,这种热谱具有良好的重现性和明显的特征性,可以作为细菌的“指纹图”对其进行种的分类和鉴定[1～5].但在研究中发现,同种细菌不同变异株的生长图谱略有差异,若培养基选择?..

念珠菌类细菌样变异株基因特征初步研究

目的在对念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状研究的基础上,进一步探讨念珠菌类细菌样变异株基因特征。方法在低温、营养缺乏条件下诱导白色念珠菌标准菌株使其变异;用不同浓度梯度的氟康唑等临床常用抗真菌药物诱导白色念珠菌标准菌株变异。采用煮沸法制备真菌基因模板,采用细菌保守基因16SRNA序列引物和真菌保守基因18SRNA序列引物分别扩增16SRNA和18SRNA序列,琼脂糖凝胶电泳,观察并记录结果。同时将细菌保守基因16S RNA扩增片段进行测序,所得序列进行BLAST比对分析。结果念珠菌类细菌样变异株16SRNA序列均扩增阳性,而白色念珠菌标准株未出现相应的扩增条带。念珠菌类细菌样变异株18SRNA序列扩增除2号菌株有微弱的条带外,其余变异株均未扩增出目的条带,而白色念珠菌标准株则出现相应的扩增条带,表明念珠菌类细菌样变异株基因组中18S RNA序列所占比例不多或是因多次传代遗失。念珠菌类细菌样变异株16SRNA扩增片段经纯化后进行DNA序列测定,BLAST进行比对分析,发现念珠菌类细菌样变异株序列与数据库中细菌序列有较高的相似性。结论念珠菌类细菌样变异株基因组含有细菌保守基因及少量真菌保守基因,具有原核生物学性状的念珠菌类细菌样变异株是源于真核生物的念珠菌。此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。

类细菌样念珠菌变异株对普通抗细菌药物敏感性观察

目的了解念珠菌发生类细菌样变异前后对普通抗细菌药物的敏感性是否发生了改变。方法采用常规MH药敏试验方法，观察ATCCl0231白色念珠菌标准菌株和其自发变异后得到的类细菌样念珠菌变异株，9002．9白色念珠菌标准菌株及其经抗真菌药物诱导形成的类细菌样念珠菌变异株，临床分离的类细菌样念珠菌变异株及变异株返祖后得到的念珠菌株，共11株菌对普通抗细菌药物头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁、亚胺培南、环丙沙星、红霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素、四环素的敏感性。结果两株白色念珠菌标准菌株、临床分离类细菌样变异株返祖后的念珠菌株对普通抗细菌药物无抑菌圈；而不同条件下得到的类细菌样念珠菌变异株则对以上普通抗细菌药物有一定的敏感性。结论白色念珠菌发生类细菌样变异后，对普通抗细菌药物的敏感性发生了改变，变异前对普通抗细菌药物不敏感，但发生类细茼样变异后对普通抗菌药物均有一定的敏感性，其抗菌谱与普通细菌基本一致。

念珠菌类细菌样变异株生物学性状及遗传学特征研究

目的：了解念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状的改变情况，并通过其遗传学特征研究从分子水平揭示这种变异发生的机理。方法实验室研究中，利用不同的营养条件及生长环境、不同的唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌株进行诱导使其变异；临床研究中，从抗真菌治疗效果不佳患者的阴道分泌物、痰液、胸腔积液、胃液等标本中分离念珠菌变异株，并对以上变异株的形态特点、核结构、生化反应、耐药性、菌体组分、遗传学特征等进行研究。结果菌体形态：念珠菌极易发生类细菌样变异，变异株菌体可呈 G＋球菌状、G＋杆菌状、G＋长丝状、G－球菌状、G－杆菌状等；核结构：电镜透射扫描证实念珠菌变异株失去真核细胞固有的核结构而呈原核生物样改变；生化反应：在所观察的20项生化试验中有5项不同；药敏试验：念珠菌发生变异后对原本敏感的抗真菌药物完全耐药，而对原本耐药的普通抗细菌药物敏感，且耐药谱与普通细菌耐药谱相同；菌体组分改变：经质谱仪鉴定念珠菌变异株和变异菌返祖株菌体组分有明显不同；真菌最保守基因表达：采取 PCR 技术对变异株进行真核生物最保守基因16S sRNA 检测发现，念珠菌发生类细菌样变异后仍表达真核生物保守基因，由此可证明具有原核细胞生物学特性的念珠菌类细菌样变异株是源于具有真核细胞的念珠菌。结论念珠菌极易发生类细菌样变异，变异株各种生物学特性与原核生物酷似。电镜观察具有明确亲缘关系的念珠菌标准菌株、念珠菌类细菌样变异株、变异菌返祖株在核物质存在形式上确有质的改变，此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。

变异念珠菌常见菌落和菌体形态

目的 研究白色念珠菌变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 用唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌进行实验室诱导得到不同的变异株;不同培养环境下获得白色念珠菌自发变异株.从抗真菌药物治疗效果不佳的临床念珠菌感染患者标本中分离培养的念珠菌变异株.将以上变异株进行培养,革兰染色,镜下观察菌体形态.结果 氟康唑诱导变异株菌落呈黏液状,革兰染色为阳性长杆状;伊曲康唑诱导的变异株菌落呈水滴状,革兰染色为阴性球杆状;酮康唑诱导的变异株菌落呈灰白色,革兰染色为阳性葡萄状;白色念珠菌自发变异株和临床分离念珠菌变异株菌落多产红色、黄色等色素形态为革兰阳性球菌状、革兰阴性杆状,也可呈白色毛绒状、淡粉色粉末样菌落,革兰染色为阳性念珠菌.结论 常用抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体可发生类细菌样改变,因此,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.