新式SOE PCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用

目的探讨新式SOEPCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用。方法通过引物设计的改变,将6种人VH基因和11种人VL基因利用两步法直接互相两两连接为人scFv基因,并且与传统的SOE法进行对比。scFv基因用于构建噬菌体单链抗体库。结果新式SOEPCR法成功的将6种人VH基因和11种人VL基因连接成66种不同的人scFv基因,与传统的SOEPCR法相比,效率高且方法简便,经过约130次电转化后,抗体库的总库容为5·58×109。结论成功地改进了传统的SOEPCR方法,高效组装了66种不同的人scFv基因,提高了抗体库的多样性。

全人源抗鼻咽癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

目的从全人源抗鼻咽癌噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体（ScFv），并对其特异性进行鉴定。方法通过噬菌体表面展示技术把ScFv表达在噬菌体表面，以鼻咽癌细胞作为抗原，用抗原递减法，通过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体，及ELISA筛选，获得特异阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果通过对抗体库进行三轮正负淘洗和富集后，随机挑选4212个克隆进行ELISA，发现3个克隆对CNE2呈强阳性反应，而与人正常细胞系HUVEC等呈弱阳性反应或不反应。对克隆HNSA033进一步进行免疫细胞化学验证，结果与ELISA反应一致；免疫组织化学鉴定表明克隆HNSA033与鼻咽癌组织和鼻咽组织阳性率的差别有统计学意义。结论通过淘选富集、ELISA和免疫化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆，为鼻咽癌发病机制的研究和临床诊断以及治疗奠定了基础。