双平板对照筛选跟踪分离细菌外排泵抑制剂

建立了细菌外排泵抑制剂的筛选与活性跟踪方法。准备2个平板,一个为普通营养琼脂平板,另一个为含小蘖碱的普通营养琼脂平板,通过比较两个平板含药纸片周围抑菌圈的直径大小判断筛选结果,方法可靠稳定。筛选发现某霉菌提取物对细菌外排泵有抑制活性,经活性跟踪分离,得到单体化合物,经NMR鉴定为4′,5,7-三羟基异黄酮。方法简便易行,成本低,适宜于对大批样本进行快速筛选并在分离时进行活性跟踪。

细菌外排泵抑制剂对光动力疗法抑制牙菌斑生物膜内主要致龋菌作用的影响

目的探讨细菌外排泵抑制剂(microbial efflux pump Inhibitor,EPI)——维拉帕米对以血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monom-ethylether,HMME)为光敏剂的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)抵抗牙菌斑生物膜内主要致龋菌作用的影响。方法以变形链球菌、血链球菌、嗜酸性乳杆菌和粘性放线菌为实验菌株,建立牙菌斑生物膜模型。以维拉帕米作为细菌外排泵抑制剂,根据在PDT过程中加入维拉帕米和光敏剂的先后顺序,实验分为5组:A组:同时加入光敏剂和维拉帕米PDT处理组,B组:先加入维拉帕米后加入光敏剂PDT处理组,C组:先加入光敏剂后加入维拉帕米PDT处理组,D组:单纯PDT处理组,E组:生理盐水处理组。激光照射后平板菌落计数观察PDT作用后牙菌斑内致龋菌的活力。结果与生理盐水处理组相比,单纯PDT处理组牙菌斑内致龋菌存活的数量(CFU/mL)明显减少(P<0.05),其抑菌率高达95.26%,与单纯PDT处理组相比,加入维拉帕米的PDT处理组内牙菌斑内致龋菌存活数量有上升趋势。其中先加入维拉帕米后加入光敏剂PDT处理组牙菌斑内致龋菌存活数量显著性上升(P<0.05),抑菌率仅为80.92%。结论 HMME-PDT可以通过有效抑制致龋菌的生长而起到防龋的作用。细菌外排泵抑制剂对HMME-PDT抑制牙菌斑生物膜内主要致龋菌有抑制作用。

细菌外排泵抑制剂对光动力疗法防龋效果的影响

目的:探讨细菌外排泵抑制剂(microbial efflux pump Inhibitor,EPI)———维拉帕米对以甲苯胺蓝O(toluidine blue O,TBO)为光敏剂的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)抑制牙菌斑生物膜内主要致龋菌作用的影响。方法:以变形链球菌、血链球菌、嗜酸性乳杆菌和粘性放线菌为实验菌株,建立牙菌斑生物膜模型。以维拉帕米作为细菌外排泵抑制剂,根据在PDT过程中加入维拉帕米和光敏剂的先后顺序,实验分为5组。A组:生理盐水处理组。B组:单纯PDT处理组。C组:同时加入光敏剂和维拉帕米PDT处理组。D组:先加入维拉帕米后加入光敏剂PDT处理组。E组:先加入光敏剂后加入维拉帕米PDT处理组。平板菌落计数观察牙菌斑生物膜活性,并运用激光共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscopy,CLSM)对处理后的牙菌斑生物膜进行断层扫描、分析。结果:与生理盐水处理组相比,单纯PDT处理组牙菌斑内致龋菌存活的数量(CFU/mL)明显减少(P<0.05),其抑菌率为81.02%;与单纯PDT处理组相比,加入维拉帕米的PDT处理组内牙菌斑内致龋菌存活数量有下降趋势。其中先加入维拉帕米后加入光敏剂PDT处理组牙菌斑内致龋菌存活数量显著性下降(P<0.05),抑菌率高达93.60%;激光共聚焦显微镜观察发现菌斑生物膜发生明显的变化。结论:实验表明光动力疗法有明显的防龋效果,且细菌外排泵抑制剂对PDT防龋效果有促进作用。

激光共聚焦显微镜观察维拉帕米对HMME—PDT抑制混合菌菌斑生物膜作用的影响

目的探讨细菌外排泵抑制剂（EPI）——维拉帕米对以血卟啉单甲醚（HMME）为光敏剂的光动力疗法（PDT）抵抗牙菌斑生物膜内主要致龋菌作用的影响。方法以变形链球菌、血链球菌、嗜酸性乳杆菌和黏性放线菌为实验菌株，建立牙菌斑生物膜模型。以维拉帕米作为细菌外排泵抑制剂，根据在PDT过程中加入维拉帕米和光敏剂的先后顺序，实验分为5组：A组为同时加入光敏剂＋维拉帕米组，B组为维拉帕米（先）＋光敏剂组（后）组，C组为光敏剂（先）＋维拉帕米（后）组，D组为单纯PDT处理组，E组为生理盐水处理组。激光照射后以激光共聚焦显微镜观察PDT作用后生物膜的变化。结果生理盐水处理组：生物膜内活菌数量占据大多数。以此组为正常细菌活力组作对比，单纯PDT处理后，红色荧光显著增加，细菌失去了积聚能力，多呈散乱分散状态；与单纯PDT组相比，加入维拉帕米的PDT组绿色荧光染色增多，细菌活力增加，其中先加入维拉帕米后加入光敏剂组，绿色荧光染色明显增多，红色荧光减少，说明活菌相对活力较高。结论实验表明，HMME。PDT在对混合菌菌斑生物膜中的细菌有抑制效应，细菌外排泵抑制剂对HMME—PDT抑制牙菌斑生物膜内主要致龋菌有抑制作用；且前期维拉帕米给药能够显著抑制PDT治疗龋病的效果．