细菌外膜囊泡应用于肿瘤治疗

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是由革兰氏阴性菌分泌的纳米囊泡,主要由细菌外膜和周质成分组成,因此表面富集的病原体相关分子模式(PAMPs)使OMVs能激起强烈的免疫反应。在抗肿瘤研究中,OMVs主要被用于抗肿瘤药物的递送,不仅能增加药物的肿瘤富集还能激活免疫反应协同杀伤肿瘤;同时,OMVs也用于开发肿瘤疫苗的佐剂,可显著提高免疫响应的能力。本综述主要概括了OMVs的生物发生机理、OMVs对宿主免疫系统的影响及其在肿瘤治疗中的研究进展。

细菌外膜囊泡在疫苗领域的应用研究进展

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是一种由革兰阴性菌在生长过程中分泌的纳米球状颗粒,通过释放毒力因子、调控宿主免疫反应、外排抗生素等途径参与细菌感染性疾病的发生过程。由于OMVs携带大量细菌组分,如蛋白质、脂质、遗传物质等,可以有效激活免疫系统,具有作为疫苗、疫苗佐剂以及优良外源抗原载体的潜力,可用于传染性疾病预防疫苗和肿瘤免疫治疗疫苗的开发研制过程中。随着医药和生物技术等高新产业的迅速发展,现有疫苗都被发现存在不同的缺陷,亟需一种能够同时保证安全性与有效性的疫苗,由此可见,外膜囊泡疫苗具有良好的应用前景。本文就细菌外膜囊泡的生物合成、结构组分、生物学作用及其在疫苗领域的应用等各个方面的研究进行综述分析,为进一步推动细菌外膜囊泡疫苗的研发提供了一定的理论基础和借鉴价值。

细菌外膜囊泡的研究及其在医药生物技术领域的应用进展

细菌外膜囊泡（outer membrane vesicles，OMVs）是由革兰阴性细菌以出芽的方式分离出来的直径为20-300nm的球形双层纳米结构。细菌产生的膜囊泡保留了源细菌的理化特性，但不能再生和复制。

基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立

目的建立一种基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法。方法利用细菌外膜囊泡表面携带高丰度细菌外膜蛋白A(OmpA)的特点,构建OmpA-NanoLuc荧光素酶融合蛋白,根据荧光素酶活性评估样品中的细菌外膜囊泡数量。结果成功构建OmpA-NanoLuc融合蛋白表达载体,受试菌株在表达该融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有稳定的荧光素酶活性。可通过检测荧光素酶活性的方式对细菌外膜囊泡进行半定量检测。结论建立了一种基于荧光素酶标记的细菌外膜囊泡半定量检测方法,可用于评估特定菌株的细胞外膜囊泡分泌水平。

细菌外膜蛋白的结构及功能

近年来,细菌分子生物学的发展使人们得以更深入地了解细菌的内部细微结构与功能。在此基础上,对其化学组成也有了深层次的认识,对细菌外膜蛋白的生物学作用也进行了研究。已知,在禽病原性大肠杆菌上,○,

细菌外膜泡与致病性的关系

多种革兰阴性菌在其对数生长期可产生外膜泡。它是外膜的最新合成部分,不含肽聚糖、内膜和细胞质成分。其主要化学成分是脂多糖,外膜泡的形成与脱落实质是活菌释放内毒素的一种方式。此外,它还能作为一些细菌毒素的载体。外膜泡具有蛋白水解酶活性,能增强细菌的粘附力,并赋予细菌抵抗宿主血清杀菌的能力。它还具有防御作用,细菌通过释放外膜泡可摆脱吸附的噬菌体。外膜泡的多种生物学活性使细菌的致病性大大增强,是一种重要的毒力因子。

细菌外膜囊泡纳米载体的制备及其免疫调节作用

目的:以细菌外膜囊泡(OMV)结合三嵌段聚合物普朗尼克F127(PEO_(100)-PPO_(65)-PEO_(100)),构建能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子的纳米载药体系OMV-F127。方法:培养减毒沙门菌,用超滤离心法与超声破碎法提取OMV,机械挤压法制得OMV-F127;蛋白质定量试剂盒和SDS-PAGE法检测OMV的蛋白含量和成分;荧光显微镜、透射电镜、动态光散射法检测OMV-F127形态学特征、粒径、电位及其稳定性;以小鼠巨噬细胞RAW246.7为细胞模型,ELISA检测OMV-F127对抗肿瘤细胞因子的分泌作用。结果:两种方法成功提取到减毒沙门菌的OMV,其蛋白质总量分别为2.8 mg/mL和2.7 mg/mL。成功制备OMV-F127且含有OMV的标志蛋白OmpF/C。OMV为纳米级囊泡结构,F127以及OMV-F127为球形纳米颗粒。OMV、F127、OMV-F127颗粒平均直径分别为(72±2)nm、(90±3)nm、(92±2)nm。OMV-F127能促进抗肿瘤细胞因子IL-12、α-TNF、γ干扰素的分泌。结论:基于细菌OMV的纳米载体OMV-F127能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子,具有免疫调节作用。

细菌外膜囊泡与抗生素相关的研究进展

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是一种在不破坏细胞膜的情况下细菌正常分泌的球状小泡。近年来越来越多的研究表明外膜囊泡在病原微生物感染及致病过程中发挥着重要的作用,其作用机制不同于传统的分泌系统。目前细菌外膜囊泡在细菌毒力、细菌对环境的适应性、帮助细菌摄取营养物质和群体感应等方面的研究已非常广泛,但关于外膜囊泡与抗生素相关的研究还处于起步阶段。因此,本文综述了细菌外膜囊泡及抗生素与细菌外膜囊泡相关的研究,以期为细菌感染治疗及减缓耐药性发展,降低致病菌毒力等工作提供参考。

细菌外膜囊泡的抗肿瘤机制及其应用研究进展

肿瘤治疗是医学和兽医学共同面临的一大挑战,在传统的手术治疗、化学疗法、放射疗法和中医疗法等基础上,研究人员不断探索新的高效、无或低副作用以及费用低的肿瘤治疗手段,其中免疫疗法的发展备受关注。而细菌外膜囊泡凭借它独特的生物和物理特性,不仅可以诱导机体产生一定程度的先天或适应性免疫反应,还是天然的生物纳米材料,且对基因修饰等多种改造方式有强大的耐受性,所以其有望成为肿瘤疫苗和药物递送系统。故在此综述细菌外膜囊泡用于肿瘤治疗及其抗肿瘤机制的研究进展,并对其在兽医临床的潜在应用价值进行展望。

细菌外膜囊泡包覆的载药纳米粒的制备及其小鼠鼻腔免疫效果评价

目的·制备细菌外膜囊泡(outer membrane vesicle,OMV)包覆的载卵清蛋白(ovalbumin,OVA)聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid)copolymer,PLGA]纳米载体并用于小鼠鼻腔免疫效果评价。方法·采用超滤离心法制备OMV,采用乳化溶剂挥发法制备包载OVA的PLGA纳米粒(nanoparticle,NP),采用机械挤出法制备OMV包覆的PLGA载药NP,并对其进行表征。载OVA的OMV-PLGA NP经BALB/c小鼠鼻腔给药,用ELISA法检测鼻腔灌洗液、空肠黏膜和粪便中特异性sIgA抗体水平。结果·OMV包覆的PLGA载药NP粒径为(234.4±22.9)nm,透射电子显微镜观察其具有核壳结构。给药14 d后,载OVA的OMV-PLGA NP给药组在鼻腔灌洗液、空肠黏膜及粪便中sIgA抗体水平最高;与OMV+OVA给药组相比,载OVA的OMV-PLGA NP给药组在鼻腔灌洗液、空肠黏膜及粪便中的OVA特异性sIgA抗体水平分别提高了1.6、2.1和1.7倍,OMV特异性sIgA抗体水平均提高了1.5倍。结论·该纳米给药系统能同时使OMV和OVA被摄取与呈递,产生较强的小鼠黏膜免疫诱导反应。

细菌外膜囊泡调节免疫细胞功能活动的研究进展

外膜囊泡(OMV)是一种来源于革兰氏阴性菌的纳米级大小的球形蛋白脂质体。OMVS可以运输多种化学成分,包括脂类、脂多糖、膜包埋的相关蛋白和小分子、肽聚糖和核酸,特别是粘附素和毒素等毒力因子通常在OMV中富集。OMVs在细菌与宿主细胞间沟通、微生物毒力和调节细菌群落内的微生物相互作用以及调节宿主免疫反应方面发挥着不同的作用。它们在细菌培养和感染过程中无处不在地产生,现在被认为在宿主与细菌的相互作用中发挥着关键作用。在这里,我们着重讨论了OMVs对宿主免疫细胞的影响作用,重点介绍它们对各类免疫细胞所做出的免疫功能调节的研究现状。

细菌外膜蛋白质生成途径中膜间质运输的两个模型及思考

革兰氏阴性菌的细胞外膜系统对于细菌的入侵、生存以及抵抗不同恶劣环境起到非常重要的作用。β-桶外膜蛋白质作为革兰氏阴性菌外膜系统上的主要蛋白质,除了能够构成稳定的外膜系统结构之外,还具有很多重要的功能,因此β-桶外膜蛋白质的合成对于细菌来说,也是生存至关重要的。本文总结了目前对细菌外膜蛋白质生成途径中关键步骤,即膜间质运输的两个模型,并针对目前研究结果进行深入剖析及思考。

抗GPC3单链抗体细菌外膜囊泡的制备及其肝细胞癌靶向性的鉴定

本研究旨在制备抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican-3,GPC3)单链抗体的细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs),分析其在体内外对Hep G2肝癌细胞及组织的靶向效果。通过合成Hbp-h GC 33-sc Fv基因并连接至p ET28a表达载体,构建重组表达质粒p ET28a-Hbp-h GC 33-sc Fv;采用免疫印迹法检测原核表达的融合蛋白Hbp-h GC 33-sc Fv,确定其最适诱导条件;采用超滤浓缩法收集重组表达菌株分泌的外膜囊泡(Hbp-h GC 33-OMVs)并进行表征;采用免疫电镜技术分析Hbp-h GC 33-sc Fv在细菌及Hbp-h GC 33-OMVs的定位情况;采用免疫荧光法观察其与Hep G2细胞的结合效果。建立Hep G2荷瘤小鼠模型,通过活体荧光成像系统观察Hbp-h GC 33-OMVs在小鼠肿瘤部位的靶向滞留情况。结果显示,融合蛋白的实际分子量为175.3 k Da,最佳诱导条件为在OD600=0.5时加入0.5 mmol/L IPTG于16℃低温诱导过夜。Hbp-h GC 33-OMVs平均粒径为(112.3±4.6) nm,具有不规则球形结构,表达外膜囊泡标记蛋白Omp C、Omp A和融合蛋白Hbp-h GC 33-sc Fv。与野生型wt OMVs相比,Hbp-h GC 33-OMVs组对Hep G2细胞的结合效果更强(P=0.008)。活体成像显示,Hbp-h GC 33-OMVs组能快速精准地靶向肿瘤部位。抗GPC3单链抗体细菌外膜囊泡的成功制备为肝细胞癌的特异性靶向治疗奠定了实验基础。

细菌外膜囊泡疫苗的研究进展

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是细菌在生长过程中由出芽形成的纳米球状小泡,与细菌的外膜和周质具有相似的组成,且有良好的免疫原性、自佐剂活性和易于被免疫细胞摄取的特性,已成为一种新兴的疫苗研发平台。目前,OMVs疫苗已成功应用于预防B群脑膜炎球菌,针对其他病原体的OMVs疫苗也逐步进入临床阶段。通过基因工程对细菌进行遗传改造,可提高OMVs产量,减少其内毒素毒性并呈递抗原。现就OMVs疫苗的研究进展作一概述。

细菌外膜蛋白在新生儿不动杆菌感染流行病学调查中的应用

采用十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）化学法提取细菌外膜蛋白（ＯＭＰ）用于医院内新生儿不动杆菌感染的流行病学调查中，１０２９次采样培养分离出不动杆菌１８９株，其中５６株流行菌株有１０条主要ＯＭＰ，非流行株多１条２５Ｋｄ带。４种生物型的ＯＭＰ不同。比较ＳＤＳ化学法与超声物理法提取ＯＭＰ效果，前者更好，超声物理法需超速冷冻离心机，价格昂贵，而ＳＤＳ化学法节省设备、操作简便，适宜基层医院推广。

细菌外膜囊泡在抗肿瘤治疗方面的研究进展

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是在细菌生长过程中分泌出的一种直径为20~300 nm的膜性小泡。由磷脂、脂多糖、蛋白质、RNA或DNA等组成。OMVs包含大量细菌抗原,通过启动信号转导通路增强细胞因子和共刺激分子的表达,促进抗原呈递,有效激活免疫系统。OMVs中的毒力因子可以传递给宿主细胞,刺激细菌-宿主细胞之间的相互作用,具有内在的抗肿瘤活性。另外OMVs有利于进行工程设计,还可作为高效的药物运载体,实现免疫治疗和化疗-光疗的结合,从而提高药物的抗癌能力。OMVs在肿瘤免疫、肿瘤工程疫苗和载药等方面具有良好前景,被认为是抗肿瘤治疗的新型手段。从OMVs的结构组分、产生机制和抗肿瘤机制等方面概述了OMVs在肿瘤治疗中的研究进展,为将来OMVs的深入研究和临床应用提供参考。

细菌外膜囊泡:疾病治疗的新途径

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是由革兰阴性菌分泌的球形纳米囊泡,粒径为20~250 nm,由脂质双分子层和多种来源于亲本细菌的成分组成。基于表面的细菌抗原、病原体相关分子模式、多种蛋白质及囊泡结构,OMVs可作为疾病治疗的一种新途径,开发用于多种生物医学应用,如肿瘤治疗、抗感染疫苗等。本文介绍了OMVs的结构和组成,总结了分离、提取以及鉴定OMVs的方法,对OMVs最新的研究进展和应用前景进行了概述。

细菌外膜囊泡在疾病治疗与预防中的应用

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是细菌产生的由膜包裹的纳米结构,具有非复制性,影响多种生物过程,包括毒力因子的运输、DNA转移、噬菌体的拦截、抗生素和真核宿主防御因子、细胞解毒、细胞代谢物输出、细胞间通讯等。OMVs具有细菌源性、免疫原性、稳定性以及同源靶向性等优势,这使运用OMVs进行疾病治疗与预防具有较好的应用前景。本文基于OMVs的生物学特性、提取方法、脱毒方法以及疾病治疗与预防等方面进行综述,以期为OMVs的应用提供参考。

细菌外膜囊泡肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8+T细胞浸润的影响

目的探讨细菌外膜囊泡(OMVs)肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8+ T细胞浸润的影响。方法采用实验研究方法。采用卵清蛋白(OVA)慢病毒载体质粒pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro构建小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞;采用大肠杆菌来源ClyA-Catchers-OMVs(CC-OMVs)与标签化抗原肽SpyTag-OVA制备OMVs肿瘤疫苗;应用OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠CD8+ T细胞生成, 采用体外细胞杀伤实验(OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组和对照T细胞组)、小鼠皮下胰腺癌成瘤模型(OMVs肿瘤疫苗组和对照组)和免疫组织化学染色检测分析OMVs肿瘤疫苗抑制胰腺癌细胞增殖, 刺激CD8+ T细胞浸润的效果。观察指标:(1)小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况。(2)CC-OMVs形态观察情况。(3)OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况。(4)OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况。(5)OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8+ T细胞浸润情况。正态分布的计量资料以x±s表示, 组间比较采用t检验。计数资料以绝对数或百分率表示。结果 (1)小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况。激光共聚焦检测结果显示:感染OVA慢病毒载体质粒pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro的小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞表达mNeongreen绿色荧光。流式细胞检测结果显示:以小鼠胰腺癌Pan02细胞为参照, Pan02-OVA细胞Flag蛋白表达率为90.7%。(2)CC-OMVs形态观察情况。透射电子显微镜检测结果显示:CC-OMVs呈均匀球形, 直径<50 nm。(3)OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况。细胞增殖毒性检测结果显示:OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞450 nm吸光度为0.41±0.12, 对照T细胞组为1.05±0.15, 两组比较, 差异有统计学意义(t=9.54, P<0.05)。(4)OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况。OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织质量为(81±10)g, 对照组为(153±17)g, 两组比较, 差异有统计学意义(t=8.26, P<0.05)。(5)OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8+ T细胞浸润情况。免疫组织化学染色检测结果显示:OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织中CD8+ T细胞染色数目为(28.7±3.5)个, 对照组为(9.3±1.5)个, 两组比较, 差异有统计学意义(t=8.74, P<0.05)。结论细菌OMVs肿瘤疫苗可抑制胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖并提高肿瘤组织中CD8+ T细胞浸润数目。

细菌外膜囊泡在疫苗领域的研究进展

细菌外膜囊泡是一种主要由革兰阴性菌在其生长过程中正常分泌的球状物质。这种球状小泡在细菌的生存和信息传递中起到了重要的作用。同时,由于这种球状小泡携带大量的细菌毒力相关蛋白,并且不具有复制的能力。因此,是一种良好的潜在疫苗候选抗原。目前,关于细菌外膜囊泡的构成成分、分泌机制、生物学作用等方面的研究已非常广泛。同时,利用细菌外膜囊泡作为主要抗原的疫苗产品也已面世。现就细菌外膜囊泡的结构研究以及细菌外膜囊泡在疫苗领域的研究作一概述,以期为进一步推动细菌外膜囊泡疫苗的研发提供更多的参考。