废弃烟叶中产细菌纤维素菌株的筛选鉴定及混菌发酵工艺优化

以废弃烟叶为来源,分离筛选产细菌纤维素菌株,对筛选菌株进行形态学观察、生理生化试验及分子生物学鉴定。以废弃烟叶浸提液为碳源和氮源,采用筛选菌株与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)以混菌(1∶1)发酵,考察废弃烟叶浸提液添加量、混菌接种量、pH、发酵温度及发酵时间对细菌纤维素产量的影响,并利用单因素、Plackett-Burman和Box-Benhnken试验优化混菌发酵工艺条件。结果表明,筛选得到一株产细菌纤维素菌株YC1,其被鉴定为氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)。最佳混菌发酵工艺条件为:废弃烟叶浸提液添加量10%,菌株YC1与酿酒酵母(1∶1)混菌接种量1.0%,初始pH值5.5,发酵温度30℃,发酵时间6 d。在该优化条件下,细菌纤维素产量最大,为2.71 g/L,比菌株YC1单独发酵细菌纤维素产量(1.18 g/L)提高了1.29倍。

细菌变异株生长热谱研究

用微量热法研究微生物的生长与代谢,是生物热力学一个新的研究领域.我们已经测得细菌生长的完整热谱,这种热谱具有良好的重现性和明显的特征性,可以作为细菌的“指纹图”对其进行种的分类和鉴定[1～5].但在研究中发现,同种细菌不同变异株的生长图谱略有差异,若培养基选择?..

油菜菌核病菌拮抗海洋细菌GM-1菌株的种类鉴定及抑菌作用研究

从连云港海域分离到1株对油菜菌核病菌有显著抑制作用的海洋细菌菌株GM-1,对其进行种类鉴定、抗菌作用测定及盆栽防病效果测定。通过形态特征观察、生理生化试验及16SrDNA序列、gyrB基因序列分析,将该菌株鉴定为芽胞杆菌属(Bacillus)的解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。抑菌作用测定结果表明:GM-1菌株和无菌发酵液对油菜菌核病菌菌丝的生长具有明显的抑制作用,培养7d的抑菌带宽度分别达到30mm和16mm,GM-1菌株和无菌发酵液对菌丝细胞结构有明显的破坏作用,导致菌丝细胞壁变厚、膨大;同时对菌核的萌发有明显的抑制作用,菌液较无菌发酵液的抑制作用更显著。盆栽防病效果测定表明:该菌株菌液对油菜菌核病具有明显的防治作用,防治效果达68%,同时能够促进油菜种子萌发,显示出良好的开发应用前景。

拮抗细菌菌株B5423和Pf7-14对稻瘟病的防效及其在稻株上的种群动态

首先测定了离体条件下6个拮抗细菌菌株对水稻稻瘟病菌、纹枯病菌、恶苗病菌和白叶枯病菌的抑制作用。然后,在温室条件下测定了上述6个菌株对水稻稻瘟病的防治效果,并以菌株B5423和Pf7-14为代表,测定了这两个菌株在稻株上的种群动态。结果表明,上述6个菌株对水稻主要病原菌有着不同程度的抑制作用;菌株B5423对水稻稻瘟病的防效最好,施用后7d、14d的防效分别为56.23%和49.25%,显著地高于其他5个菌株;在相同的浓度下,Pf7-14(对抗生素萘啶酮酸具有天然的抗性)在稻株上的定殖能力比B5423-R(B5423的利福平抗性的突变体)强。

念珠菌类细菌样变异株基因特征初步研究

目的在对念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状研究的基础上,进一步探讨念珠菌类细菌样变异株基因特征。方法在低温、营养缺乏条件下诱导白色念珠菌标准菌株使其变异;用不同浓度梯度的氟康唑等临床常用抗真菌药物诱导白色念珠菌标准菌株变异。采用煮沸法制备真菌基因模板,采用细菌保守基因16SRNA序列引物和真菌保守基因18SRNA序列引物分别扩增16SRNA和18SRNA序列,琼脂糖凝胶电泳,观察并记录结果。同时将细菌保守基因16S RNA扩增片段进行测序,所得序列进行BLAST比对分析。结果念珠菌类细菌样变异株16SRNA序列均扩增阳性,而白色念珠菌标准株未出现相应的扩增条带。念珠菌类细菌样变异株18SRNA序列扩增除2号菌株有微弱的条带外,其余变异株均未扩增出目的条带,而白色念珠菌标准株则出现相应的扩增条带,表明念珠菌类细菌样变异株基因组中18S RNA序列所占比例不多或是因多次传代遗失。念珠菌类细菌样变异株16SRNA扩增片段经纯化后进行DNA序列测定,BLAST进行比对分析,发现念珠菌类细菌样变异株序列与数据库中细菌序列有较高的相似性。结论念珠菌类细菌样变异株基因组含有细菌保守基因及少量真菌保守基因,具有原核生物学性状的念珠菌类细菌样变异株是源于真核生物的念珠菌。此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。

3株降烟草特有亚硝胺细菌菌株的生物学特性研究

[目的]探明3株降烟草特有亚硝胺含量的内生细菌菌株W1、W2、W3的生物学特性。[方法]选用不同的培养基,设置时间、温度、pH梯度,测定不同培养条件下菌液的生长情况。[结果]W1的最佳培养基为TSB,最佳培养时间为8 h,最适培养温度为25～32℃,最适pH为7.0;W2的最佳培养基为TSB,最佳培养时间为24 h,最适培养温度为25℃,最适pH为6.5;W3的最佳培养基为TSB,最佳培养时间为16 h,最适培养温度为25～28℃,最适pH为6.0。[结论]该研究为菌株进一步开发利用提供理论依据。

念珠菌类细菌样变异株生物学性状及遗传学特征研究

目的：了解念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状的改变情况，并通过其遗传学特征研究从分子水平揭示这种变异发生的机理。方法实验室研究中，利用不同的营养条件及生长环境、不同的唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌株进行诱导使其变异；临床研究中，从抗真菌治疗效果不佳患者的阴道分泌物、痰液、胸腔积液、胃液等标本中分离念珠菌变异株，并对以上变异株的形态特点、核结构、生化反应、耐药性、菌体组分、遗传学特征等进行研究。结果菌体形态：念珠菌极易发生类细菌样变异，变异株菌体可呈 G＋球菌状、G＋杆菌状、G＋长丝状、G－球菌状、G－杆菌状等；核结构：电镜透射扫描证实念珠菌变异株失去真核细胞固有的核结构而呈原核生物样改变；生化反应：在所观察的20项生化试验中有5项不同；药敏试验：念珠菌发生变异后对原本敏感的抗真菌药物完全耐药，而对原本耐药的普通抗细菌药物敏感，且耐药谱与普通细菌耐药谱相同；菌体组分改变：经质谱仪鉴定念珠菌变异株和变异菌返祖株菌体组分有明显不同；真菌最保守基因表达：采取 PCR 技术对变异株进行真核生物最保守基因16S sRNA 检测发现，念珠菌发生类细菌样变异后仍表达真核生物保守基因，由此可证明具有原核细胞生物学特性的念珠菌类细菌样变异株是源于具有真核细胞的念珠菌。结论念珠菌极易发生类细菌样变异，变异株各种生物学特性与原核生物酷似。电镜观察具有明确亲缘关系的念珠菌标准菌株、念珠菌类细菌样变异株、变异菌返祖株在核物质存在形式上确有质的改变，此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。

类细菌样念珠菌变异株对普通抗细菌药物敏感性观察

目的了解念珠菌发生类细菌样变异前后对普通抗细菌药物的敏感性是否发生了改变。方法采用常规MH药敏试验方法，观察ATCCl0231白色念珠菌标准菌株和其自发变异后得到的类细菌样念珠菌变异株，9002．9白色念珠菌标准菌株及其经抗真菌药物诱导形成的类细菌样念珠菌变异株，临床分离的类细菌样念珠菌变异株及变异株返祖后得到的念珠菌株，共11株菌对普通抗细菌药物头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁、亚胺培南、环丙沙星、红霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素、四环素的敏感性。结果两株白色念珠菌标准菌株、临床分离类细菌样变异株返祖后的念珠菌株对普通抗细菌药物无抑菌圈；而不同条件下得到的类细菌样念珠菌变异株则对以上普通抗细菌药物有一定的敏感性。结论白色念珠菌发生类细菌样变异后，对普通抗细菌药物的敏感性发生了改变，变异前对普通抗细菌药物不敏感，但发生类细茼样变异后对普通抗菌药物均有一定的敏感性，其抗菌谱与普通细菌基本一致。

白肋烟调制期间细菌菌株动态变化研究

[目的]为了探明白肋烟调制期间对照与处理的细菌菌株动态变化。[方法],在采收前1 d,对白肋烟品种TN86进行WB5菌株喷洒处理,并设清水作对照,调制期间,每隔5 d采集其烟叶样品,分析其不同调制时期的细菌菌株总量,探明其动态变化。[结果]晾制期间烟叶中细菌总量在105～109CFU/g,晾制初期(0～15d)菌量较高,晾制末期(30～45 d)菌量较低。[结论]该研究可为白肋烟进一步的科学研究提供科学理论依据。

食物分离株细菌素RM1的特性及应用研究

乳酸菌产生的细菌素由于其作为天然防腐剂和化学防腐剂的天然替代品而受到越来越多的关注。对从食物分离株RM1产生的细菌素(Ent-RM1)的特性及应用进行了研究,结果表明:筛选的细菌素Ent-RM1具有较高的热稳定性和较宽的pH稳定性,对蛋白酶K敏感。用16%的三-三甲基十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,Ent-RM1的分子量约为4.0k^4.5kDa。硫酸铵沉淀法提取的Ent-RM1(44.7 IU/m L Nisin当量)对接种到牛乳中的单核细胞增生李斯特菌Scott A有杀菌作用,对蜡状芽孢杆菌ATCC 11778具有抑菌作用。在磷酸盐缓冲液与高压处理联合作用,EntRM1对大肠杆菌K12表现出协同灭活作用,表明Ent-RM1对控制食品工业中的细菌污染具有实际应用价值。

细菌菌株可传递机密信息

据2011年10月4日Palacios MA[Proc Natl Acad Sci USA,2011,108（40）：16510-16514]报道,美国塔夫茨大学的科学家们开发出了一种有生命的密码：利用细菌菌株来传递机密信息。除了用于谍报活动外,这项技术还可以让企业给农作物或其他有生命的物体进行身份编码,以防假冒。

细菌表达dsRNA介导的家蚕FTZ-F1基因的RNA干扰

为探索细菌表达目标基因dsRNA介导的RNAi技术是否在家蚕Bombyx mori可行,本研究引入了在其他物种中广泛应用的细菌表达dsRNA的RNAi系统:HT115细菌株和L4440质粒。利用L4440载体两端含有T7启动子的特点,设计并构建了针对家蚕核受体FTZ-F1基因的RNA干扰(RNA interference)载体,将构建好的质粒转入大肠杆菌Escherichia coliHT115,在IPTG诱导下成功获得目标基因对应双链RNA(dsRNA)。结果显示:通过对5龄第7天家蚕幼虫注射IPTG诱导后提取的FTZ-F1基因对应的dsRNA25μg,85%的蛹变态发育过程明显延迟,不能实现幼虫到蛹的形态完全转变。荧光定量PCR分析显示目标基因的表达得到了特异的抑制。实验结果初步表明,通过细菌表达目标基因dsRNA介导的RNAi策略,以其经济、高效的特点,具有广泛应用于家蚕基因功能研究中的潜力。

胆囊结石患者胆汁、结石、粘膜细菌群同步研究

研究胆道感染时胆汁中细菌的变迁，探讨胆囊结石核心的形成与细菌感染的关系。方法：采用Ｘ、Ｙ、Ｌ型培养液同步研究胆囊结石患者的胆汁、结石、粘膜细菌发生及变迁。结果：检测胆汁９８例，结石９８例，粘膜６４例，细菌生长分别为８８例（８９．７９％）、８１例（８２．６５％）、５４例（８４．３８％）。Ｘ型细菌生长分别为８３例、７８例、４８例。生长Ｌ型细菌分别为２３例、１７例、１６例。生长Ｙ型细菌分别为５例、３例、６例。结论：胆道感染时胆汁、结石、粘膜中细菌发生变迁，以粘质沙雷氏菌、大肠杆菌为主。胆囊结石核心的形成与细菌感染有关。

对临床标本细菌学检验的调查

本文根据临床收集的痰、尿液标本及当班的医生和护士咽部分泌物进行细菌学检验,其结果提示当前的临床常见的细菌种群,并讨论了若采样不正规可造成细菌污染,带来错误的使用抗生素而产生耐药菌株,以致影响到医院感染的发生。

新生儿败血症细菌药敏与临床分析

目的 :为了解新生儿败血症细菌分布、耐药情况 ,以减少临床应用抗生素的盲目性 ,降低耐药菌的产生 ,提高治愈率 ,降低新生儿的死亡率。方法 :收集新生儿败血症 85例患儿 ,共培养出细菌 85株 ,用法国生物梅里埃微生物鉴定及药物敏感分析仪 ,作细菌鉴定及药敏分析。结果 :凝固酶阴性葡萄球菌 48例 ,金黄色葡萄球菌 2 1例 ,为主要致病菌。对于青霉素、苯唑西林耐药率超过75 %,对万古霉素、左旋氧氟沙星高度敏感。凝固酶阴性葡萄球菌有 2株对万古霉素耐药 ,几株革蓝阴性菌对奈替米星及头孢噻肟高度敏感。结论 :新生儿呼吸道感染 ,应及时做血培养 ,早期检测有无新生儿败血症 ,以便及时有效治疗。

稻田土壤细菌对圣女果种子促萌发研究

圣女果种子的萌发除了受水分、光照、温度、氧气等重要因素影响之外,还会受土壤微生物、土壤盐分、矿质元素等的影响。为探究稻田土壤与稻田土壤微生物对圣女果种子萌发的影响,为圣女果种植提供实验数据与参考。从稻田取得土样,采用微生物学分离筛选方法获得土壤优势细菌菌株,对稻田土壤与土壤优势细菌对圣女果种子的发芽率、发芽势和发芽指数进行比较研究。结果表明:稻田土壤对圣女果种子的发芽率、发芽势和发芽指数分别为95.00%,79.00%与32.95。从稻田土壤分离到三株优势细菌菌株T,B与H。菌株T对圣女果种子的发芽率,发芽势和发芽指数分别为90.67%、68.00%和30.88;菌株B对圣女果种子的发芽率、发芽势和发芽指数分别为92.00%、65.33%和31.04;菌株H对圣女果种子的发芽率、发芽势和发芽指数分别为92.00%,74.00%和30.68。

草莓枯萎病菌拮抗细菌JX-13的鉴定及生防效果评价

为明确生防菌株JX-13的分类地位,评价其对草莓枯萎病的生防效果,依据JX-13菌株形态、生理生化特性、16S rRNA和gyrB基因碱基序列同源性对其进行分析鉴定,采用菌丝生长速率法和田间试验评价其对草莓的促生作用和枯萎病生防效果。结果表明,JX-13菌株的形态特征和生理生化特性均与芽孢杆菌很接近,16S rRNA和gyrB基因碱基序列分析发现,JX-13菌株在系统发育树中与Paenibacillus polymyxa strain IIF5SW-B3属于一个类群,相似性高达99.00%。发酵加工的1×10^10 CFU/g JX-13可湿性粉剂(WP)和1×10^10 CFU/g枯草芽孢杆菌WP对草莓枯萎病菌菌丝生长的抑制中质量浓度(EC50)分别为19.977μg/ml和41.409μg/ml。对草莓繁苗田进行2次灌根处理,JX-13 WP 500倍液处理对草莓植株有明显促生作用,对草莓枯萎病的防治效果达96.03%。定植当天和第7 d对定植田进行2次灌根处理,药后50 d、80 d分别进行田间调查,JX-13 WP 500倍液对草莓枯萎病防治效果分别为100.00%和68.94%。菌株JX-13被鉴定为多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa,其发酵液加工的1×10^10 CFU/g WP在草莓繁苗田和定植田中具有防治枯萎病和促生的作用。

分离自慢性肝病患者的62株泛耐药鲍曼不动杆菌耐药基因检测及菌株鉴定分型

目的对分离自慢性肝病患者的泛耐药鲍曼不动杆菌(XDRAB)进行耐药基因、菌株分型。方法来自于慢性肝病患者的XDRAB菌株62株,PCR法检测菌株耐药基因(OXA-51、OXA-23、GIM、OXA-58、IMP-R、VIM-2、OXA-24、VIM-1及SPMI基因),多位点序列分型(MLST)法对XDRAB菌株进行分型。结果62株XDRAB菌株中均表达OXA-51、OXA-23、GIM基因。62株菌株中表达OXA-58、IMP-R、VIM-2、OXA-24、VIM-1及SPMI基因的分别为51、35、22、17、15、14株,未见表达SIM-1基因的菌株。62株菌株中ST381型、ST425型、ST492型、ST464型、ST191型、ST208型、ST218型分别为15、12、11、7、6、4、1株,有6株菌株出现未知ST型(STx1~STx4),其中STx1型、STx2型、STx3型、STx4型分别为3、1、1、1株。结论XDRAB菌株中表达OXA-23和GIM、OXA-58、IMP-R耐药基因。XDRAB主要ST分型为ST381、ST425和ST492。

海洋多黏类芽孢杆菌L_1-9菌株生产抑菌物质发酵条件及其抑菌谱的研究

以植物病原真菌小麦赤霉病菌为指示菌,研究海洋细菌L1-9菌株产生抑菌物质的发酵条件。采用以不同的培养基配方和不同的发酵条件进行液体发酵,并用琼脂糖扩散法测定发酵液的抑菌活性。结果表明:海洋细菌L1-9菌株产生抑菌物质的最佳培养基(g/100mL)为豆饼粉1、玉米粉1.5、麦麸1、大米粉0.5、KH2PO40.07、MgSO40.03、CaCO30.1,采用海水配制,自然pH值;发酵条件为培养基pH9.0、接种量7%、培养温度28℃、装瓶量110mL(500mL摇瓶)、摇床转速180r/min、培养时间33h。抑菌谱实验结果表明:L1-9菌株发酵液对供试的16种植物病原真菌具有较强的抑制作用,抑菌带宽度均达到7mm以上,对5种细菌具有一定的抑制作用。