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细菌核酸提取方法对荧光定量PCR检测差异分析
被引量:
12
1
作者
闻子钰
梁昊
+4 位作者
顾一心
鞠长燕
马艳萍
段永翔
张茂俊
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2019年第6期621-624,共4页
目的观察和分析常见食源性病原菌及粪便中病原菌DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果的影响。方法以弯曲菌、副溶血弧菌和沙门菌为模型菌株,分别采用水煮法、细胞裂解法、试剂盒法(过滤法和磁珠法)提取病原菌DNA并进行荧光定量PCR检测并...
目的观察和分析常见食源性病原菌及粪便中病原菌DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果的影响。方法以弯曲菌、副溶血弧菌和沙门菌为模型菌株,分别采用水煮法、细胞裂解法、试剂盒法(过滤法和磁珠法)提取病原菌DNA并进行荧光定量PCR检测并对试验结果作差异比较分析;应用细胞裂解法和过滤法分别提取24份随机抽样的粪便标本DNA,针对细菌16SrDNA特异序列进行荧光定量PCR检测,比较2种DNA提取方法对于病原菌检测结果的差异性。结果在不同菌种、不同浓度的条件下,细胞裂解法提取细菌纯培养物DNA的Ct值均低于其他三种方法(P<0.05),水煮法、过滤法、磁珠法的Ct值之间的比较结果呈现多样性。细胞裂解法提取粪便标本的病原DNA为模板进行细菌16S rDNA特异序列的荧光定量PCR检测结果阳性18份,阴性6份,试剂盒过滤法提取24份粪便标本检测结果皆为阳性。结论在对纯培养的3种食源性病原菌进行荧光定量PCR鉴定时,为节省时间和成本可应用细胞裂解法或水煮法提取模板DNA,与2种商业试剂盒(过滤法和磁珠法)相比效果较好;对粪便标本病原菌进行荧光定量PCR检测时,试剂盒提取粪便标本病原DNA的扩增效果优于细胞裂解法。
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关键词
细菌核酸提取
水煮法
细胞裂解法
试剂盒法
荧光定量PCR
原文传递
题名
细菌核酸提取方法对荧光定量PCR检测差异分析
被引量:
12
1
作者
闻子钰
梁昊
顾一心
鞠长燕
马艳萍
段永翔
张茂俊
机构
中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
深圳市南山区疾病预防控制中心
中山大学公共卫生学院
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2019年第6期621-624,共4页
基金
国家重点研发计划项目(No.2018YFC1603800)
深圳三名工程项目(No.SZSM201803081)
文摘
目的观察和分析常见食源性病原菌及粪便中病原菌DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果的影响。方法以弯曲菌、副溶血弧菌和沙门菌为模型菌株,分别采用水煮法、细胞裂解法、试剂盒法(过滤法和磁珠法)提取病原菌DNA并进行荧光定量PCR检测并对试验结果作差异比较分析;应用细胞裂解法和过滤法分别提取24份随机抽样的粪便标本DNA,针对细菌16SrDNA特异序列进行荧光定量PCR检测,比较2种DNA提取方法对于病原菌检测结果的差异性。结果在不同菌种、不同浓度的条件下,细胞裂解法提取细菌纯培养物DNA的Ct值均低于其他三种方法(P<0.05),水煮法、过滤法、磁珠法的Ct值之间的比较结果呈现多样性。细胞裂解法提取粪便标本的病原DNA为模板进行细菌16S rDNA特异序列的荧光定量PCR检测结果阳性18份,阴性6份,试剂盒过滤法提取24份粪便标本检测结果皆为阳性。结论在对纯培养的3种食源性病原菌进行荧光定量PCR鉴定时,为节省时间和成本可应用细胞裂解法或水煮法提取模板DNA,与2种商业试剂盒(过滤法和磁珠法)相比效果较好;对粪便标本病原菌进行荧光定量PCR检测时,试剂盒提取粪便标本病原DNA的扩增效果优于细胞裂解法。
关键词
细菌核酸提取
水煮法
细胞裂解法
试剂盒法
荧光定量PCR
Keywords
DNA extraction
direct boiling
cell lysis
commercial kit
real-time PCR
分类号
R378.3 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细菌核酸提取方法对荧光定量PCR检测差异分析
闻子钰
梁昊
顾一心
鞠长燕
马艳萍
段永翔
张茂俊
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2019
12
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参考文献
引证文献
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