微生物检测技术在动物细菌性疫病诊断中的研究进展

动物细菌性疾病一直是困扰我国兽医临床和畜禽健康养殖的一大难题,细菌性疾病的传播能力及耐药性变异能力使临床用药举步维艰,而不合理用药导致的药物残留问题,不仅危害动物和人类健康,也给养殖户造成巨大经济损失。动物细菌性疫病的快速诊断是阻断细菌传播的先决条件之一,也是制定合理用药方案的基础。微生物检测方法是动物细菌性疫病快速诊断的主要技术手段。传统的微生物检测技术仍是现阶段的主流方法。然而,随着细菌不断变异,生存环境不断变化,传统方法不足以应对细菌变异多样、抗菌药物匮乏的当下。不断革新的微生物检测技术也随科技发展产生了许多满足临床需求的新兴技术,不仅可以快速诊断动物细菌性疾病,区分活死细菌数量,也能直观的反应细菌与药物的相互作用。本文从传统的检测手段到基于核酸、蛋白质、细菌光谱特性等更加快速、精确的检测技术进行了系统总结,同时也拓展并提出了宿主导向用药方案的临床微生物检测需求,对于微生物检测技术的综述为临床诊断动物细菌性疫病提供了方法,为兽医临床精准用药提供最佳方案。

一株菜豆普通细菌性疫病拮抗细菌的分离鉴定及其生防效果

菜豆普通细菌性疫病是黑龙江省近年来发生面积较广的菜豆病害之一,严重时可导致菜豆大面积减产,并影响籽粒品质。为发掘菜豆普通细菌性疫病的生防菌资源,本研究从健康菜豆根际土壤中分离筛选到一株对菜豆普通细菌性疫病菌具有显著抑制效果的拮抗菌株B2。经菌落形态观察、生理生化测试、16SrDNA和gyr B基因序列分析,将其鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillusvelezensis,该菌株在平板试验中对菜豆普通细菌性疫病病原菌Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli(Xap)和Xanthomonas fuscans subsp.fuscans(Xff)的抑菌圈直径分别为19.3和21.8mm。在室内盆栽试验中,菌株B2对Xap和Xff的防效分别为55.42%和67.77%。通过菜豆叶片防御酶活性及丙二醛含量测定显示,菌株B2能显著提高菜豆叶片中SOD、POD、CAT、PPO酶活性,降低丙二醛含量,表明菌株B2能诱导植物防御反应起到抵抗病原菌的作用。综上,菌株B2在由Xap和Xff两种病原菌引起的菜豆普通细菌性疫病生物防治中具有良好的开发应用潜力。

细菌性疫病对菜豆光合特性和生理指标的影响

为研究菜豆侵染细菌性疫病后的一系列生理变化,以不同菜豆细菌性疫病抗性品种‘双丰3号’(SF,抗病品种)和‘猫眼’(MY,感病品种)为试验材料,测定接种后不同时段菜豆细菌性疫病对光合作用参数、光合色素含量、POD、SOD活性及超氧阴离子含量积累的影响。结果显示:(1)不同抗性品种间,除胞间CO_(2)浓度增加外,2个品种的净光合速率、气孔导度、气孔限制值和水分利用效率均呈现下降状态,且增幅和降幅表现为MY>SF。(2)菜豆细菌性疫病侵染导致2个品种的叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素和类胡萝卜素含量均有所下降,且总体含量表现为SF>MY。说明SF的光合作用和光合色素含量受菜豆细菌性疫病胁迫的影响小于MY。(3)MY的POD活性总体高出SF 3倍,SOD活性表现为SF>MY,且在超氧阴离子含量积累方面,SF的释放量比MY早2 d变少,其防御机制出现时间早于MY。说明维持较高的光合性能是对菜豆细菌性疫病具有较强抗性的生理基础,且POD和SOD活性都可以作为菜豆细菌性疫病的抗性鉴定生理指标。

芸豆普通细菌性疫病绿色防控措施建立

为筛选出一种简便、成本低且环保的方法提高芸豆普通细菌性疫病防治效果,提高籽粒产量和品质,以芸豆品种垦芸15为试验材料,采取裂区试验设计,主因素为种植密度(M),副因素为防控次数(T),在芸豆花期喷施混合杀菌剂(丙环唑乳油20 g·L^(-1)+35%喹啉铜40 g·L^(-1)+四霉素悬浮剂40 g·L^(-1)+30%吡唑醚菌酯悬浮剂30 g·L^(-1)+30%苯甲20 g·L^(-1))处理,通过调查病情指数、防治效果、产量、株高等指标,明确不同种植密度下绿色防控措施对芸豆普通细菌性疫病的防治效果。结果表明,在不进行防控措施时,芸豆普通细菌性疫病的发病指数随种植密度的增加而升高。不同种植密度下,芸豆普通细菌性疫病的发病率随防控次数的增加而显著下降,各种植密度下均以T3处理下的防效最高,其中M1T3、M2T3和M3T3的防效分别达到75.05%、73.97%和84.11%。同时,各种植密度下,与不防控相比较,T3处理下芸豆产量的上升幅度分别达到11.52%、9.03%和8.68%。通过比较效益分析,建议在芸豆低种植密度时进行2次防控,而中、高种植密度时则需防控3次。

芸豆细菌性疫病的发生与综合防治

细菌性疫病是芸豆生产上的一种常见病害,在各种植地区均可发生。病害发生后,侵染植株叶片、茎蔓、豆荚和种子,造成芸豆产量的降低,减少农户的经济收入。本文根据生产经验,从芸豆细菌性疫病的发生症状、传播途径、发生规律进行分析,提出了切实可行的综合防治措施。

红掌细菌性疫病的病原菌初步鉴定

在云南西双版纳的红掌上发现一种由细菌侵染引起的病害,从叶片的病组织上分离到具有致病性的杆状细菌,将分离的病原菌接种于健康的红掌上,表现出与田间一致的症状。感病初期在叶缘或叶脉间出现水渍状小点,后期病斑多呈棕褐色至黑色坏死,病健交界处多呈黄色。从接种发病的病斑与田间标样上分离的病原菌菌落形态完全相同。通过菌株的培养性状、常规生理生化特性及透射电镜下菌体形态观察结果,将病原菌初步鉴定为黄单胞菌属(Xanthomonas)。BIOLOG鉴定和致病性测定结果进一步鉴定病原菌为地毯草黄单胞菌花叶万年青致病变种Xanthomonas axonopodis pv.dieffenba-chiae(Xad)(McCulloch＆Pirone)Vauterin et al.

菜豆普通细菌性疫病病原菌鉴定

【目的】明确中国北方地区菜豆普通细菌性疫病病原菌。【方法】应用菌落特征、油菜黄单胞菌菜豆变种诊断试剂检测、致病性测定、16S rDNA和16S-23S rDNA ITS序列分析、特异PCR检测、脂肪酸分析及生理生化反应特征对病原菌分离物进行鉴定。【结果】从病害样品和菜豆种子样品中均分离到类似黄单胞杆菌的细菌分离物,选取25个代表分离物进行致病性测定,有24个分离物在菜豆品种"英国红"上导致典型菜豆普通细菌性疫病症状。结合16S rDNA及16S-23S rDNA ITS序列比对分析、特异性PCR检测及生理生化反应的结果,24个分离物中7株被鉴定为地毯草黄单胞菌菜豆变种,17株为褐色黄单胞菌褐色亚种。【结论】中国北方地区发生的菜豆普通细菌性疫病由地毯草黄单胞菌菜豆变种或(和)褐色黄单胞菌褐色亚种引起;褐色黄单胞菌褐色亚种在中国属首次报道。

桑断柄型细菌性疫病的研究

近年来发现桑细菌性疫病除黑枯型、缩叶型外 ,还有一种新的症状类型———断柄型。本文对桑断柄型细菌性疫病病原菌的血清学反应、生理生化性状进行了详细的研究 ,并与以前发现的黑枯型菌、缩叶型菌作了比较试验。断柄型菌属桑疫病菌 (Pseudomonussyringaepv.mori)的同类菌 ;大多数菌株的血清学类型为Ⅴ型 ;最适生长温度 2 8～ 30℃。桑断柄型细菌性疫病在自然情况下于 4月上旬到 5月上旬发病 ,4月中下旬发生最多 ,表现为嫩叶叶柄的中间某点呈缢缩发黑 。

不同抗性的大豆品种接种大豆细菌性疫病菌后可溶性蛋白、总糖含量变化的研究

通过对两个感病品种 (绥农 8、东农 4 2 ) ,两个抗病品种 (黑农 3 7、黑农 3 8)在一片复叶期分别接种小种 1和小种 4两个菌株 ,测定了叶片的可溶性蛋白和总糖含量变化。结果表明 :接种后感病品种可溶性蛋白含量先升高 ,后降低 ,可溶性总糖含量明显降低 ;而抗病品种的可溶性蛋白含量先降低 ,后升高 ,可溶性总糖含量也明显增加。未接种健株中 。

山东省桑树细菌性疫病的发生与防治研究

山东省已调查的 16个市 (县 )均有桑树细菌性疫病发生 ,病害主要有黑枯、枝裂、缩叶和叶斑 4种症状。每年 5月底至 6月初开始表现症状 ,7～ 8月份为发病盛期 ,发病率一般为 5 %～ 10 % ,重者可达 4 0 %以上。对病害症状、培养性状、致病性测定、生理生化特性的鉴定结果表明 ,山东省的桑树细菌性疫病病原菌绝大多数属丁香假单胞杆菌桑树致病变种 (Pseudomonassyringaepv .mori)生物型Ⅴ。疫病病原菌可随病残体在自然表土、灭菌土壤、自然土层 10cm深处以及桑树上越冬 ,存活到翌年 5～ 6月份。室内药效测定表明 ,70 %百菌清、卡那霉素和农用链霉素对桑树细菌性疫病病原菌具有较好的抑制作用。田间防治试验以 30 %琥胶肥酸铜悬浮剂的效果最好 ,达85 0 % ,其次为农用链霉素 ,防治效果达 4 5 %以上。

基于16S-rDNA序列的核桃细菌性疫病病原菌遗传多态性分析

核桃细菌性疫病(Xanthomonas arboricola pv.juglandis)是世界范围内核桃产区最主要的细菌病害,对其病原菌16S-rDNA的序列进行分析,为阐明其遗传多样性提供参考。本研究从湖北省保康县和丹江口市多个核桃园采集病样,对不同核桃病组织样进行分离纯化,得到77个病原菌类似菌株,对部分菌株进行了接种和分子鉴定。用通用引物27F和1492R对其中有代表性的22株进行16S-rDNA的PCR扩增和测序。用软件MEGA7.0对所有测序结果进行遗传发育树分析,菌株之间平均遗传距离为0.244。用3种限制性内切酶MspI、AfeI和HinfI对16S-rDNA的PCR产物进行酶切,酶切结果用软件NTSYSpc2.1进行聚类分析。所有菌株之间相似系数大于52%,在76%的相似水平,可以将22个菌株划分为6个类群。用软件ApE对所有序列进行同样的3个酶切,RFLP分析结果与试验酶切结果相似。不同方法构建的聚类和发育树分析结果表明,湖北省不同地理来源和病组织的菌株存在一定的遗传多态性。

一种一品红细菌性疫病病原菌的鉴定

采用一系列指标对一种一品红细菌性疫病病原菌进行了鉴定研究。描述了近年来海南省儋州市某花圃一品红植株上发生的一种细菌性疫病的症状,测定了病原菌的形态、染色反应、培养性状、生理生化特性以及寄主范围,将病原菌鉴定为野油菜黄单胞菌一品红致病变种[Xanthomonascampestrispv.poinsettiicola(PatelBhattetKulkarni1951)Dye1978]。猩猩草(Euphoraheterophylla)、铁海棠(Euphorbiamillii)和木薯(Manihotesculenta)为国内新报道的接种寄主,橡胶(Heveabrasiliensis)和蓖麻(Ricinuscommunis)为国内外新报道的接种寄主。

不同抗性的大豆品种感染细菌性疫病后POD、PPO变化的研究

供试的 4个不同抗性的大豆品种未接种健株中过氧化物酶 (POD)和多酚氧化酶 (PPO)活性和PPO同功酶谱带数没有差异 ,但抗病品种POD同工酶谱带比感病品种多两条 (A2 和B2 )。感染大豆细菌性疫病后 ,不同品种的POD活性均升高 ,其中 ,抗病品种POD活性始终处于较高水平 ;PPO活性在抗病品种中升高 ,而在感病品种中降低。POD同功酶谱带在所有供试品种中C1带均增强而C2 和B4带减弱 ,其中抗病品种B1和B2 带也减弱 ;PPO同功酶谱带中 ,感病品种B1带减弱 。

黑龙江省大豆细菌性疫病病原鉴定

通过对供试的１５个菌株致病性、形态、染色及生理生化特征的测定，确定黑龙江省大豆主要产区的细菌性病害是由丁香假单胞杆菌大豆致病变种Ｐｓｅｕ－ｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ｇｌｙｃｉｎｅａ（Ｃｏｅｒｐｅｒ１９１９）Ｙｏｎｇ，Ｄｙｓ＆Ｗｉｌｋｉｅ，１９７８引起的大豆细菌性疫病。

红掌细菌性疫病病原菌生物学特性研究

红掌细菌性疫病由地毯草黄单胞菌花叶万年青致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.dieffenbachiae)引起。测定了病原菌在PDA、NA、SX、KB、TTC培养基上的生长状况,并初步研究该病的发生规律。试验表明,病菌典型菌株的胞外纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶都具水解活性,但活性大小有所差异;在8种抗生素的筛选中,菌株在链霉素、利福平、氨苄青霉素及新露霉素上能生长,而在格丹霉素、卡那霉素、四环素和壮观霉素上不能生长。

瓜尔豆细菌性疫病种子带菌检测及寄主范围测定

瓜尔豆细菌性疫病是新疆新发现的一种病害,本文对4份瓜尔豆种子根据症状分为无症状型(占总调查种子数36.55%)、中间型(占总调查种子数51.94%)和严重变色型(占总调查种子数11.51%)三类,不同类型种子的室内发芽率、带菌率和出苗率存在明显差异,严重变色型种子发芽率最低,为31.11%;中间型和无症状型种子的发芽率相对较高,分别为87.78%和63.33%;在室内培养基上进行种子带菌率检测,结果表明,严重变色型种子的带菌率最高,为51.11%,中间型和无症状型的带菌率为31.11%和24.44%。在水琼脂上严重变色型种子的出苗率为42.00%;无症状种子和中间型的出苗率分别为71.67%和90.00%。盆栽幼苗出苗和发病实验结果显示,无症状种子的出苗率为83.33%,而严重变色种子的出苗率仅为40.00%;不同类型种子的带菌率存在明显差异,无症状种子的带菌率为59.18%,而严重变色种子的带菌率为84.38%,远高出无症状种子的发病率;表明种子严重变色(或带菌率较高)都会严重影响种子的质量,继而造成种子发芽率和田间出苗率的降低。人工接种寄主范围测定结果显示,瓜尔豆细菌性疫病还可以感染、大豆(Glycine max)、豇豆(Vigna unguiculata)、绿豆(Vigna radiata)和芸豆(Phaseolus coccineus L.var.albonanus Baile)等豆科作物。

新疆瓜尔豆细菌性疫病病原鉴定

【目的】明确新疆克拉玛依种植的瓜尔豆(Cyamopsis tetragonoloba L.)新爆发的细菌性病害的病原,以防止该病害在新疆瓜尔豆上进一步扩散和蔓延,保证该地区瓜尔豆产业的可持续发展。【方法】从新疆瓜尔豆产区采集发病叶片、茎干及豆荚等组织进行病菌分离,对分离后的菌株采用喷雾法和针刺法进行致病性测定,并根据采集地点、田间发病症状和发病组织的不同,选取9个代表菌株观测其培养特性和生理生化特征;同时选取3个代表菌株进行16SrDNA测序。【结果】该病害在整个瓜尔豆生长季均可以发生,危害叶片、茎干、叶柄、荚柄、豆荚和种子,造成叶枯、落叶、茎干爆裂、顶枯、豆荚和种子不能成熟或变黑坏死。从发病植株上共获得21个具有致病性的细菌菌株,菌株的致病性表现与田间症状基本一致。9个代表性菌株在YEPG培养基上培养72h后形成淡黄色奶油状的圆形菌落,在KB培养基上无黄绿色荧光反应;均为革兰氏阴性、杆状、严格的好氧型细菌;烟草过敏性坏死反应均为阳性;接触酶阳性,氧化酶阴性,耐盐性表现为耐20~30g/L NaCl。选取的3个代表菌株的16SrDNA序列与Xanthomonas axonopodis菌株XV 938的同源性达99.95%。【结论】将引起该病害的病原确定为地毯草黄单胞菌瓜尔豆致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.cyamopsidis),该病害确定为瓜尔豆细菌性疫病。

山东桑树细菌性疫病的研究

桑树细菌性疫病在山东已调查的12个县、市均有发生。主要有黑顶、茎裂、缩叶和叶斑4种症状。5月底至6月初症状开始出现,7～8月份为发病盛期。发病率一般为5～10％,重者可达40％以上。对病原菌的鉴定结果表明,病原菌为丁香假单胞杆菌,桑树致病变种(Pseudomonas syringae P.V.mori)。测试的四个菌株(Pm_1、Pm_5、Pm_(31)、Pm_(35)除对个别的糖、醇利用能力有分化外,其生理生化性状基本一致。