重组Lv-SWD蛋白的表达、纯化与细菌结合试验

通过重组Lv-SWD蛋白的表达与纯化,进行多克隆抗体的制备与细菌结合试验,研究凡纳对虾(Litopenaeus vannamei)重组SWD蛋白在先天免疫系统中的功能。结果表明,Lv-SWD的预测分子质量为12.9 ku,实际大小与理论值相符合。重组Lv-SWD蛋白作为抗原制备的多克隆抗体,可以较好地识别蛋白质本身,且可以直接结合巨大芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)以及弧菌(Vibrio)4种细菌。

大菱鲆CD55负调控补体激活及其广谱细菌结合能力

CD55蛋白在哺乳动物中是一种补体调控因子,但其在鱼类中的功能未知。本研究探索了大菱鲆(Scophthalmus maximus)CD55(SmCD55)蛋白的功能。结果表明,SmCD55蛋白由344个氨基酸残基构成,含有一个N端信号肽和3个补体调控蛋白(CCP)功能域。SmCD55基因在大菱鲆多种组织中均有表达,其中,在肌肉中表达量最低,在脑组织的表达量最高。通过原核表达获得了重组的SmCD55(rSmCD55)蛋白,发现rSmCD55蛋白能够抑制大菱鲆血清的溶血活性和杀菌活性,表明其负调控补体系统的激活。此外,本研究还发现rSmCD55蛋白可以结合包括重要水产病原菌迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)在内的多种细菌,其中与哈维氏弧菌的结合能力最强。以上这些研究结果丰富了鱼类补体系统的理论知识,加深了对鱼类补体激活调控的了解。

中西医结合治疗慢性细菌性前列腺炎64例疗效观察

目的观察中西医结合治疗慢性细菌性前列腺炎的疗效。方法:采用随机开放,平行对照法,以前列腺灌注疗法加中药内服为治疗组,单纯前列腺灌注为对照组,进行对比疗效观察。结果:治疗组治愈率和总有效率优于对照组(P<0.01)。观察期间未见严重不良反应。结论:中西医结合治疗慢性细菌性前列腺炎,安全有效。

预过滤孔径大小显著影响浮游细菌群落分析结果

为探究预过滤孔径对浮游细菌群落结构的影响,通过高通量测序技术,比较了100μm(PF100)、10μm(PF10)和2μm(PF2)3种不同孔径的预过滤处理后对虾养殖水体浮游细菌群落结构。结果显示,PF100、PF10与PF2处理下的浮游细菌群落结构和多样性存在显著差异(P<0.05),且PF100的细菌群落多样性最高,但PF10和PF2的细菌群落结构和多样性差异不显著(P>0.05)。PF100的绿弯菌门(Chloroflexi)、浮霉菌门(Planctomycetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)和蓝细菌门(Cyanobacteria)的相对丰度显著高于PF10和PF2(P<0.05),相反,α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)、GN02和OD1在PF10和PF2中的相对丰度较高。相似性百分比分析(SIMPER)结果表明,腐螺旋菌科(Saprospiraceae)和黄杆菌科(Flavobacteriaceae)等12个细菌科是造成3种预过滤处理细菌群落差异的主要类群。综上所述,预过滤孔径大小会导致浮游细菌群落结构的差异,该结果对浮游细菌过滤方法的选择具有一定指导意义。

疏风清热方配合西药治疗急性细菌性结膜炎80眼

目的:观察疏风清热方配合西药治疗急性细菌性结膜炎的临床疗效。方法:两组均采用妥布霉素滴眼液与左氧氟沙星滴眼液交替点眼治疗。治疗组加中药疏风清热方(龙胆草、防风、白芷、车前子、羌活、木贼、川芎、知母、黄芩、金银花、生地黄等)治疗。结果:治疗组总有效率100%,平均治疗时间为6d;对照组总有效率80%,平均治疗时间为11d。2组总有效率和治愈时间比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组优于对照组。结论:中西医结合疗法能积极控制感染,增强全身及局部抵抗力,促进愈合,减少患者痛苦。

中药外洗联合甲硝唑治疗细菌性阴道病60例

目的:观察清热燥湿类中药外洗与甲硝唑联合治疗细菌性阴道病的疗效。方法:对120例细菌性阴道病病人随机分为两组,对照组60例,阴道内放置甲硝唑泡腾片,治疗组60例,中药蛇床子、苦参、龙胆草、明矾等外洗后,阴道内放置甲硝唑泡腾片。分别计算两组的治疗总有效率,所得数据进行卡方检验。结果:对照组总有效率为75.0%,治疗组总有效率为98.3%。两组总有效率比较χ2=4.23,P<0.05,差异有统计学意义。结论:中药外洗与甲硝唑联合治疗细菌性阴道病效果好于单独使用甲硝唑泡腾片治疗效果。

皱纹盘鲍肽聚糖识别蛋白的表达及免疫功能特性

为研究皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肽聚糖识别蛋白HdhPGRP-SC2-like的免疫功能特性,利用RACE技术克隆了HdhPGRP-SC2-like基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析了HdhPGRP-SC2-like基因的组织分布特征,通过原核表达获得了重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,并对其酰胺酶活性及免疫特性进行了验证。结果表明:HdhPGRP-SC2-like基因的cDNA全长为938 bp,开放阅读框为780 bp,编码260个氨基酸,包含保守的PGRP结构域和Ami_2结构域;HdhPGRP-SC2-like属于短型PGRP,与软体动物近缘物种PGRP具有高度相似性;qPCR分析显示,HdhPGRP-SC2-like mRNA在皱纹盘鲍各组织中均有表达,其中,鳃中表达量最高,外套膜、消化腺中表达量次之,腹足和血细胞中表达量较低;进一步构建原核表达载体pET-28a(+)-HdhPGRP-SC2-like,经诱导表达、分离纯化获得重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,该蛋白具有肽聚糖结合活性,且在Zn2+存在的情况下显示出酰胺酶活性。研究表明,HdhPGRP-SC2-like能够结合细菌肽聚糖成分,在机体抵御入侵细菌等免疫防御中发挥重要作用。

重组凡纳对虾PEN-2分子的抗菌相关功能研究

对虾素属于先天免疫系统中抗菌肽分子的一种,是对虾类水生动物防御细菌入侵的重要免疫效应分子。试验以凡纳对虾对虾素2(penaeidin-2,PEN-2)分子作为研究对象,通过系统研究抗菌活性相关的细菌结合功能、蛋白酶活性抑制作用及抑菌作用,来探索PEN-2分子的抗菌功能。结果显示,凡纳对虾PEN-2分子具有较强的体外结合细菌的功能,能够抑制枯草芽孢杆菌生长过程中分泌的蛋白酶的活性,但抑菌活性较弱。

重组Lv-PEN-3蛋白先天免疫相关功能的研究

以凡纳对虾PEN-3对虾素分子作为研究对象,分别进行了细菌结合功能、蛋白酶活性抑制功能与抑菌作用等研究。结果显示:重组Lv-PEN-3分子可以较强地结合细菌,可以有效抑制分泌型蛋白酶的活性,但是其抑制细菌生长的作用较弱,三者之间的关联需要进一步探索。

清肺化痰汤治疗重症肺部感染临床疗效及对免疫因子水平的影响

目的:探讨清肺化痰汤治疗重症肺部感染的临床疗效及对免疫因子的影响。方法:选取重症肺部感染患者86例为研究对象,采用随机数字表分为对照组和观察组各43例,对照组给予注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠治疗,观察组在对照组基础上给予自拟清肺化痰汤治疗,比较两组临床疗效及治疗前后免疫因子变化情况。结果:治疗后两组患者中医症状积分均明显下降,且观察组比对照组下降更明显(P<0.05)。两组治疗后WBC、CRP、肺炎指数和APACHEII评分均明显下降,且观察组比对照组更明显(P<0.05)。观察组治疗后治愈率及总有效率均明显高于对照组(P<0.05);两组治疗后CD_3^+T水平均无明显变化(P>0.05),CD_4^+T及CD_4^+T/CD_8^+T水平均显著升高,CD_8^+T水平显著降低,且观察组优于对照组(P<0.05)。对照组治疗后IgM、IgG、IgA无明显变化(P>0.05),观察组治疗后IgM、IgG、IgA水平明显高于治疗前和对照组(P<0.05)。两组患者治疗期间均未出现明显的药物不良反应,两组之间无明显统计学差异(P>0.05)。结论:自拟清肺化痰汤可改善重症肺部感染患者机体免疫功能,临床疗效满意。

白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白可黏附大肠杆菌并抑制其生长

目的:探讨重组的白纹伊蚊唾液特异性34k2蛋白(rAlb-34k2)黏附大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌的可能,及其对大肠杆菌OD600值的影响。方法:利用细菌结合实验,通过Western blot方法检测rAlb-34k2蛋白与大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的黏附效应,用分光光度计法检测不同浓度的rAlb-34k2蛋白对24 h内大肠杆菌OD600值的影响。结果:可在7%SDS处理后的大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌的细菌上清液、菌体沉淀和7%SDS处理的铜绿假单胞菌上清液中检测到rAlb-34k2蛋白,而在处理的乙型溶血性链球菌上清液及其菌体沉淀中未检测到相应的蛋白条带。不同浓度的rAlb-34k2蛋白(16~137 ng/μl)处理后大肠杆菌在12 h的OD600显著低于细菌对照组(P<0.05),其中以高浓度(137 ng/μl、112 ng/μl)的蛋白处理组细菌OD600值下降最为显著,且该现象与Ca^2+无关。此外,同源的rAalb-CTL2蛋白(重组白纹伊蚊唾液CTL2蛋白)在Ca^2+依赖下具有诱导大肠杆菌OD600增高的现象。结论:白纹伊蚊雌蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白可与多种细菌黏附,且可能具有抑制大肠杆菌的作用。

猪链球菌7型强弱毒株SBP_bac_5差异表达蛋白的鉴定

前期研究表明细菌胞外溶质结合蛋白家族5(SBP_bac_5)基因在猪链球菌7型(S.suis 7)型强毒株WC0711中表达量高于弱毒株M13中,推测SBP_bac_5为S.suis 7型强弱毒株差异性表达蛋白。为进一步证实该结果,本研究采用real-time RT-PCR技术在基因水平检测S.suis 7型强弱毒株中SBP_bac_5 mRNA的表达量差异,结果显示,强毒株WC0711中SBP_bac_5的mRNA表达量为在弱毒株M13中的4.59倍。将SBP_bac_5的PCR产物克隆于pET-30a中,通过E.coli BL21诱导表达,纯化后的蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清检测S.suis强弱病毒株中SBP_bac_5的表达量差异。结果显示,重组蛋白获得高效表达,S.suis 7型强毒株WC0711中SBP_bac_5表达量是弱毒株M13的3.8倍。