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气液色谱法测定细菌脂肪酸
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作者 成宏 《现代医学仪器与应用》 1994年第1期19-20,共2页
色谱法(Chromatography)是1906年由俄国学者Tswett首先提出的,其实质是利用不同物质在由两相(固定相和流动相)构成的体系中,具有不同的分配系数,经反复多次分配,从而使分配系数只有微小差别的物质,在移动速度上产生很大差别,使混合物中... 色谱法(Chromatography)是1906年由俄国学者Tswett首先提出的,其实质是利用不同物质在由两相(固定相和流动相)构成的体系中,具有不同的分配系数,经反复多次分配,从而使分配系数只有微小差别的物质,在移动速度上产生很大差别,使混合物中各组分达到完全分离. 展开更多
关键词 气液色谱法 细菌脂肪酸
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细菌聚羟基脂肪酸酯检测方法研究进展 被引量:3
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作者 洪葵 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期80-84,59,共6页
细菌聚羟基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoates,PHAs)是存在于许多细菌细胞内的聚合物,是一种新型的生物材料,在生态研究中可作为营养指标。回顾有关PHAs的研究方法的同时介绍用PT-IR技术从细胞水平快速定性和定量分析细菌PHAs。
关键词 研究进展 细菌聚羟基脂肪酸 检测方法 傅立叶变换红外光谱 PHA
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细菌聚羟基脂肪酸酯转基因植物研究进展 被引量:4
3
作者 郑军荣 洪葵 周鹏 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第1期103-107,共5页
本文综述了短链、中链及含短链与中链两类单体的细菌聚羟基脂肪酸酯 (Polyhydroxyalkanoates ,PHAs)的合成途径及关键酶基因。本研究所获得的短链与中链PHA合成酶基因的特征 ,以及向拟兰芥、油菜等植物中转化这些基因时 ,启动子和表达... 本文综述了短链、中链及含短链与中链两类单体的细菌聚羟基脂肪酸酯 (Polyhydroxyalkanoates ,PHAs)的合成途径及关键酶基因。本研究所获得的短链与中链PHA合成酶基因的特征 ,以及向拟兰芥、油菜等植物中转化这些基因时 ,启动子和表达载体的构建 ,代谢流的控制 ,转基因烟草生产PHA的优势及其存在的问题。 展开更多
关键词 细菌聚羟基脂肪酸 转基因植物 生物合成 关键酶基因 PHAS 生物可降解塑料 聚-β-羟基脂肪酸 生物反应器
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大肠杆菌(Escherichia coli)体外脂肪酸合成反应的重建 被引量:4
4
作者 冯赛祥 朱磊 +2 位作者 罗彪 孙益嵘 王海洪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期954-963,共10页
PCR扩增大肠杆菌参与脂肪酸合成的7个主要酶基因:fabD、fabG、fabH、fabA、fabZ、fabB和fabI,并构建相应的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中分别诱导表达酶蛋白,并使用Ni-NTA琼脂糖纯化到7种酶蛋白.体外添加所需酶蛋白和辅因子,在不使用[... PCR扩增大肠杆菌参与脂肪酸合成的7个主要酶基因:fabD、fabG、fabH、fabA、fabZ、fabB和fabI,并构建相应的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中分别诱导表达酶蛋白,并使用Ni-NTA琼脂糖纯化到7种酶蛋白.体外添加所需酶蛋白和辅因子,在不使用[2-14C]丙二酸单酰CoA的条件下,成功地实现了脂肪酸合成反应的重建,另外还建立了数个鉴定有关酶蛋白功能的标准反应,并用其鉴定了丙酮丁醇梭菌FabZ的功能. 展开更多
关键词 细菌脂肪酸合成 脂酰ACP 非变性聚丙烯酰胺凝胶
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苜蓿中华根瘤菌desA基因功能的鉴定 被引量:4
5
作者 马金成 周俊超 +2 位作者 吴楚云 胡喆 王海洪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第8期740-749,共10页
为研究苜蓿中华根瘤菌脂肪酸脱饱和酶desA基因在不饱和脂肪酸合成、共生结瘤固氮以及应对逆境胁迫中的功能,为高效利用苜蓿中华根瘤菌提供理论依据,本文通过异体遗传互补和脂肪酸组成薄层层析,分析SmdesA编码蛋白是否具有脱饱和酶的活... 为研究苜蓿中华根瘤菌脂肪酸脱饱和酶desA基因在不饱和脂肪酸合成、共生结瘤固氮以及应对逆境胁迫中的功能,为高效利用苜蓿中华根瘤菌提供理论依据,本文通过异体遗传互补和脂肪酸组成薄层层析,分析SmdesA编码蛋白是否具有脱饱和酶的活性并参与不饱和脂肪酸的合成,构建SmdesA的缺失突变株和互补菌株,比较各菌株在不同逆境胁迫条件下的生长速率以及回接宿主植物后与紫花苜蓿共生结瘤的能力.结果表明SmdesA不能互补大肠杆菌CY57中EcfabA的突变,但具有将饱和脂肪酸脱饱和形成不饱和的棕榈油酸和十八碳烯酸的能力.另外,SmdesA缺失突变对苜蓿中华根瘤菌的脂肪酸组成影响不大,但会显著影响低温和高盐条件下菌株的生长速率以及与紫花苜蓿共生结瘤的能力.我们推测,SmdesA参与的脱饱和途径可能是苜蓿中华根瘤菌不饱和脂肪酸合成的补偿途径,其编码的蛋白DesA不是不饱和脂肪酸合成的关键酶,但在应对逆境胁迫和共生结瘤中具有重要的生物学功能. 展开更多
关键词 苜蓿中华根瘤菌 细菌脂肪酸合成 脂肪酸脱饱和酶 DesA
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五个3-酮脂酰ACP合成酶同源蛋白的功能鉴定 被引量:4
6
作者 马金成 邓丽婷 +2 位作者 童文华 朱磊 王海洪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第9期887-895,共9页
大肠杆菌的FabB和FabF均具有长链3-酮基脂酰ACP合成酶活性.除参与长链饱和脂酰链的延伸外,FabB还是合成不饱和脂肪酸的关键酶之一,参与不饱和脂酰ACP的从头合成,最终生成顺-9-十六烯脂酰ACP.而FabF只能将顺-9-十六烯脂酰ACP延伸为顺-11... 大肠杆菌的FabB和FabF均具有长链3-酮基脂酰ACP合成酶活性.除参与长链饱和脂酰链的延伸外,FabB还是合成不饱和脂肪酸的关键酶之一,参与不饱和脂酰ACP的从头合成,最终生成顺-9-十六烯脂酰ACP.而FabF只能将顺-9-十六烯脂酰ACP延伸为顺-11-十八烯脂酰ACP,不参与不饱和脂酰ACP的从头合成.有研究表明,粪肠球菌、乳酸乳球菌、丙酮丁醇梭菌和茄科雷尔氏菌等细菌的FabF同源蛋白,具有类似大肠杆菌FabB和FabF的双功能.为证实该现象是否普遍存在,本研究选取了枯草芽孢杆菌BsfabF、中华苜蓿根瘤菌SmfabF、霍乱弧菌VcfabF、铜绿假单胞菌PafabF1和PafabF2 5个同源基因进行功能鉴定,体外酶学分析表明,5个FabF同源蛋白均具有长链3-酮基脂酰ACP合成酶活性,异体互补大肠杆菌CL28的脂肪酸组分分析显示,SmfabF、VcfabF、PafabF1和PafabF2具有3-酮脂酰ACP合成酶Ⅱ(FabF)活性,遗传互补大肠杆菌温度敏感突变株CY242和CY244的研究显示,仅有PafabF2编码的蛋白拥有3-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB)活性,能互补大肠杆菌fabB的突变.这表明不是所有的FabF同源蛋白均具有3-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ和Ⅱ的双重活性. 展开更多
关键词 细菌脂肪酸合成 3-酮基脂酰ACP合成酶Ⅰ 3-酮脂酰ACP合成酶Ⅱ 遗传互补
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苜蓿中华根瘤菌fabA和fabB基因功能的鉴定 被引量:5
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作者 胡喆 马金成 +1 位作者 蒋晶晶 王海洪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1148-1159,共12页
在大肠杆菌(Escherichia coli)脂肪酸合成酶体系中,fabA基因编码有双功能的3-羟基脂酰ACP脱水异构酶,其异构产物能被fabB基因编码的3-酮基脂酰ACP合成酶Ⅰ延伸,合成不饱和脂肪酸,该FabA-FabB途径被认为是缺氧条件下不饱和脂肪酸合成的... 在大肠杆菌(Escherichia coli)脂肪酸合成酶体系中,fabA基因编码有双功能的3-羟基脂酰ACP脱水异构酶,其异构产物能被fabB基因编码的3-酮基脂酰ACP合成酶Ⅰ延伸,合成不饱和脂肪酸,该FabA-FabB途径被认为是缺氧条件下不饱和脂肪酸合成的经典途径.生物信息学分析发现,苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)的SmFabA与EcFabA相似性达到60.6%,具有相同的保守活性位点和两个保守的α螺旋结构;SmFabB与EcFabB相似性达到61.1%,具有相同的Cys-His-His活性中心.用携带SmfabA和SmfabB的质粒载体遗传互补大肠杆菌温度敏感突变株CY57和CY242,在添加三氯森(TCL)抑制烯脂酰ACP还原酶活性的条件下,转化子能在42℃恢复生长,且放射性薄层层析能检测到转化子中不饱和脂肪酸棕榈油酸(Δ9C16:1)和十八碳烯酸(Δ11C18:1)的合成.体外重建脂肪酸合成反应表明,SmFabA能催化羟脂酰ACP的脱水反应且能够使反-2-癸烯酰ACP异构化,SmFabB能催化不同链长的脂酰ACP和丙二酸单酰ACP的聚合反应.另外,未得到SmFabA和SmFabB的突变株,表明SmFabA和SmFabB可能是苜蓿中华根瘤菌脂肪酸合成酶系中必不可少的关键蛋白.上述结果证实了苜蓿中华根瘤菌fabA和fabB两个基因在不饱和脂肪酸合成中的功能. 展开更多
关键词 苜蓿中华根瘤菌 细菌脂肪酸合成 3-羟基脂酰ACP脱水异构酶 3-酮基脂酰ACP合成酶Ⅰ
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乳酸乳球菌fabZ1和fabZ2基因功能的鉴定 被引量:2
8
作者 马金成 罗彪 +1 位作者 胡喆 王海洪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第8期777-786,共10页
大肠杆菌(Escherichia coli)是Ⅱ型脂肪酸合成系统的模式生物,3-羟基脂酰ACP脱水异构酶(FabA)是不饱和脂肪酸合成中的关键酶.生物信息学分析表明,乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)的基因组中没有标注为3-羟基脂酰ACP脱水异构酶的基因,但... 大肠杆菌(Escherichia coli)是Ⅱ型脂肪酸合成系统的模式生物,3-羟基脂酰ACP脱水异构酶(FabA)是不饱和脂肪酸合成中的关键酶.生物信息学分析表明,乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)的基因组中没有标注为3-羟基脂酰ACP脱水异构酶的基因,但有两个标注为3-羟基脂酰ACP脱水酶基因LlfabZ1和LlfabZ2,其编码的蛋白质与EcFabZ的相似性分别为41%和45.1%,且都具有3-羟基脂酰ACP脱水酶两个保守的α螺旋结构.用携带LlfabZ1和LlfabZ2的质粒载体遗传互补大肠杆菌fabA温度敏感突变株CY57,在42℃下不能恢复生长,但无细胞抽提物的结果显示LlFabZ1能够使反-2-癸烯酰ACP异构成顺-3-癸烯酰ACP,而LlFabZ2则不能.互补大肠杆菌fabZ突变株HW7显示,在诱导的条件下,含有LlfabZ2的转化子能够恢复生长,而LlfabZ1则不能.体外重建脂肪酸合成反应及蛋白质活性测定表明,LlFabZ1具有3-羟基脂酰ACP脱水异构酶功能,而LlFabZ2只具有3-羟基脂酰ACP脱水酶功能.另外,未得到LlfabZ1和LlfabZ2的突变株,表明LlFabZ1和LlFabZ2可能是乳酸乳球菌脂肪酸合成酶系中的必不可少的关键蛋白.上述结果证实了乳酸乳球菌fabZ1和fabZ2两个基因在脂肪酸合成中的功能. 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 细菌脂肪酸合成 3-羟基脂酰ACP脱水异构酶 3-羟基脂酰ACP脱水酶
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应用GC-MS技术测定细菌结构脂肪酸鉴定脂环酸芽孢杆菌的研究 被引量:1
9
作者 李儒 张雅珩 张宇霞 《食品工业》 北大核心 2013年第5期222-224,共3页
脂环酸芽孢杆菌菌体细胞膜的主要脂肪酸成分是含6个或7个ω环状脂肪酸,将其转化为脂肪酸甲酯,通过皂化、甲基化后提取脂肪酸甲基酯,用气相色谱质谱仪测定脂肪酸的类型及含量,试验结果与笔者利用PCR方法和Ribroprinter核糖体基因分型结... 脂环酸芽孢杆菌菌体细胞膜的主要脂肪酸成分是含6个或7个ω环状脂肪酸,将其转化为脂肪酸甲酯,通过皂化、甲基化后提取脂肪酸甲基酯,用气相色谱质谱仪测定脂肪酸的类型及含量,试验结果与笔者利用PCR方法和Ribroprinter核糖体基因分型结果相一致,可在实践中应用脂肪酸测定法鉴定脂环酸芽孢杆菌。 展开更多
关键词 细菌结构脂肪酸 气相色谱质谱仪 细菌鉴定
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流产布氏杆菌烯脂酰ACP还原酶的鉴定 被引量:5
10
作者 雷鸣 马金成 王海洪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第5期464-471,共8页
烯脂酰ACP还原酶是细菌脂肪酸合成的关键酶之一.流产布氏杆菌基因组有2个注释为烯脂酰ACP还原酶基因fabI的同源基因:fabI1和fabI2.由这2个fabI同源基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌FabI有50%和51%的同源性,且都拥有与大肠杆菌FabI一样的... 烯脂酰ACP还原酶是细菌脂肪酸合成的关键酶之一.流产布氏杆菌基因组有2个注释为烯脂酰ACP还原酶基因fabI的同源基因:fabI1和fabI2.由这2个fabI同源基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌FabI有50%和51%的同源性,且都拥有与大肠杆菌FabI一样的催化中心Tyr-(Xaa)6-Lys序列.分别用携带这2个同源基因的质粒载体转化大肠杆菌fabI温度敏感突变菌株JP1111.转化子能在42℃生长,表明这2个基因均能遗传互补大肠杆菌fabI突变,并使此菌株恢复脂肪酸的合成.另外,体外酶学分析显示,由这2个同源基因编码的蛋白质都拥有烯脂酰ACP还原酶活性,均能参与细菌脂肪酸合成.上述结果证实,流产布氏杆菌同时拥有2个同种类型的烯脂酰ACP还原酶,是一种新的烯脂酰ACP多样性的表现. 展开更多
关键词 流产布氏杆菌 细菌脂肪酸合成 烯脂酰ACP还原酶
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Microbial Community Structure of Casing Soil During Mushroom Growth 被引量:11
11
作者 CAI Wei-Ming YAO Huai-Ying +4 位作者 FENG Wei-Lin JIN Qun-Li LIU Yue-Yan LI Nan-Yi ZHENG Zhong 《Pedosphere》 SCIE CAS CSCD 2009年第4期446-452,共7页
The culturable bacterial population and phospholipid fatty acid (PLFA) profile of casing soil were investigated at different mushroom (Agaricus bisporus) cropping stages. The change in soil bacterial PLFAs was alw... The culturable bacterial population and phospholipid fatty acid (PLFA) profile of casing soil were investigated at different mushroom (Agaricus bisporus) cropping stages. The change in soil bacterial PLFAs was always accompanied by a change in the soil eulturable bacterial population in the first flush. Comparatively higher culturable bacterial population and bacterial PLFAs were found in the casing soil at the primordia formation stage of the first flush. There was a significant increase in the ratio of fungal to bacterial PLFAs during mushroom growth. Multivariate analysis of PLFA data demonstrated that the mushroom cropping stage could considerably affect the microbial community structure of the casing soil. The bacterial population increased significantly from casing soil application to the primordia formation stage of the first flush. Casing soil application resulted in an increase in the ratio of gram-negative bacterial PLFAs to gram-positive bacterial PLFAs, suggesting that some gram-negative bacteria might play an important role in mushroom sporophore initiation. 展开更多
关键词 cropping stage culturable bacterial population phospholipid fatty acid
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Response of Soil Microbial Community to a High Dose of Fresh Olive Mill Wastewater 被引量:1
12
作者 J.L.MORENO F.BASTIDA +2 位作者 M.A.S NCHEZ-MONEDERO T.HERNNDEZ C.GARCíA 《Pedosphere》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期281-289,共9页
An incubation experiment was designed in order to determine the further microbiological response to an addition (500 m3 ha-1) of fresh olive mill wastewater (FOMWW) in a soil that has been frequently amended with ... An incubation experiment was designed in order to determine the further microbiological response to an addition (500 m3 ha-1) of fresh olive mill wastewater (FOMWW) in a soil that has been frequently amended with uncontrolled doses of OMWW since the 1990s in an active disposal site (ADS soil). To achieve this aim, the phospholipid fatty acid (PLFA) profiles, microbial biomass C (Cmic), and dehydrogenase (DHA) and urease activities (URA) were monitored at the beginning (To), 3 h (T1) and 97 d (Tf, i.e., the end) of incubation after FOMWW addition. After the FOMWW addition, an increase in the ratio of fungal to bacterial PLFAs was observed in ADS soil. Moreover, a relative increase of monounsaturated fatty acids (MUFAs) with respect to saturated fatty acids (SATFA) was found in the ADS soil. An increase of the Gram-positive to Gram-negative ratio was observed in this soil at the end of the incubation. While DHA and Cmic increased in the ADS soil after FOMWW addition, URA showed a decrease. Fungi and Gram-positive bacterial biomass experienced an increase after addition of a high dose of FOMWW in laboratory conditions. 展开更多
关键词 enzyme activity microbial activity microbial biomass phospholipid fatty acid (PLFA) biomarker
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Impact of Land-Use Change on Soil Microbial Community Composition and Organic Carbon Content in the Dry Tropics 被引量:5
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作者 Chandra Mohan KUMAR Nandita GHOSHAL 《Pedosphere》 SCIE CAS CSCD 2017年第5期974-977,共4页
Restoration of forests poses a major challenge globally, particularly in the tropics, as the forests in these regions are more vulnerable to land-use change. We studied land-use change from natural forest(NF) to degra... Restoration of forests poses a major challenge globally, particularly in the tropics, as the forests in these regions are more vulnerable to land-use change. We studied land-use change from natural forest(NF) to degraded forest(DF), and subsequently to either Jatropha curcas plantation(JP) or agroecosystem(AG), in the dry tropics of Uttar Pradesh, India, with respect to its impacts on soil microbial community composition as indicated by phospholipid fatty acid(PLFA) biomarkers and soil organic carbon(SOC) content. The trend of bacterial PLFAs across all land-use types was in the order: NF > JP > DF> AG. In NF, there was dominance of gram-negative bacterial(G^-) PLFAs over the corresponding gram-positive bacterial(G^+) PLFAs. The levels of G^- PLFAs in AG and JP differed significantly from those in DF, whereas those of G^+ PLFAs were relatively similar in these three land-use types. Fungal PLFAs,however, followed a different trend: NF > JP > DF = AG. Total PLFAs, fungal/bacterial(F/B) PLFA ratio, and SOC content followed trends similar to that of bacterial PLFAs. Across all land-use types, there were strong positive relationships between SOC content and G-, bacterial, fungal, and total microbial PLFAs and F/B PLFA ratio. Compared with bacterial PLFAs, fungal PLFAs appeared to be more responsive to land-use change. The F/B PLFA ratio, fungal PLFAs, and bacterial PLFAs explained 91%, 94%,and 73% of the variability in SOC content, respectively. The higher F/B PLFA ratio in JP favored more soil C storage, leading to faster ecosystem recovery compared to either AG or DF. The F/B PLFA ratio could be used as an early indicator of ecosystem recovery in response to disturbance, particularly in relation to land-use change. 展开更多
关键词 ecosystem recovery fungal/bacterial ratio natural forest phospholipid fatty acid (PLFA) PLANTATION
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