固相细胞计数法——一种快速检测单细胞细菌的食品微生物新检测方法

固相细胞计数 (SPC)是一项新技术 ,可在单细胞水平快速检测细菌而不需要生长相。滤过样品后 ,存留的微生物在滤膜上进行荧光标记 ,采用激光扫描设备自动计数。每个荧光点可直观地由通过计算机驱动的流动台连接到ChemScan上的落射荧光显微镜来检测。根据所使用的荧光标记 ,在几小时内可获得有关微生物特性及生理状态的信息。尽管SPC最初建议用于测定水中及其他液体样品中活细菌总数 ,但如果可以从不能滤过的基质中分离出细菌 ,它将是检测及计数食物样品中细菌的有效技术。尤其对于生长缓慢的微生物 ,检测用时短使该方法明显优于传统平板计数法。本文讨论了SPC的基本原理以及检测副结核分枝杆菌 (My cobacteriumparatuberculosis)的可能性 ,后者是牛奶中生长缓慢的细菌的代表菌。

超高倍直接镜检法检测男性加德纳菌感染的诊断价值

目的:探讨超高倍显微镜直接镜检法检测男性阴道加德纳菌(GV)感染的诊断价值。方法:采用超高倍显微镜直接镜检法和免疫荧光法分别对122例男性尿道分泌物进行GV的平行检测。结果:超高倍显微镜直接镜检法与免疫荧光法结果比较,符合率89.3%,敏感度98.7%,特异度73.3%。结论:超高倍显微镜直接镜检法可作为检测男性GV感染的筛查实验,且具有方便快捷,敏感度高,不易漏诊的特点,有临床实用价值。

深圳陆地环境细菌遗传多样性研究

用荧光显微镜法和变性梯度凝胶电泳法(DGGE)研究深圳陆地环境空气和土壤中细菌的数量和遗传多样性,结果显示:土壤细菌为108-109个/g;空气细菌为10~4-10~6个/L;从DGGE分析获得的土壤和空气细菌OTUs和序列得出:序列同Genebank已登陆序列相似性高。生物群落遗传结构分析显示,土壤除羊台山和莲花山的细菌群落结构较相似外,其他测站均存在明显地理分布差异性;空气中南山、莲花山和杨梅坑测站的细菌样品不能聚成一支,呈明显的群落遗传结构差异。

人Bcl-2基因重组腺病毒的构建及其在螺旋神经节细胞中的表达

目的构建表达人Bcl2基因的重组腺病毒,并研究其在原代培养螺旋神经节细胞(spiralganglioncells,SGC)的表达特性。方法采用细菌内同源重组法,从pUCCAGGS/Bcl2质粒中获得人Bcl2cDNA,克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV上,后者和腺病毒骨架质粒pAdEasy1在细菌内同源重组,在HEK293细胞中包装成为重组Ad增强型绿色荧光蛋白/Bcl2腺病毒,电镜观察病毒颗粒,用病毒感染原代培养的大鼠螺旋神经节细胞,在荧光显微镜下观察感染效率,用逆转录聚合酶链反应方法检测Bcl2基因在螺旋神经节细胞的转录表达,用WesternBlot检测其蛋白的表达。结果经酶切鉴定证实重组腺病毒质粒构建成功,电镜显示包装细胞中有大量病毒颗粒存在,呈规则六边形。荧光显微镜下观测到感染病毒的SGC细胞发出明亮的绿色荧光。分别在mRNA水平及蛋白水平证实有外源性Bcl2基因的表达。结论细菌内同源重组法是一种简便、高效的制备方法。构建的重组Ad增强型绿色荧光蛋白/Bcl2腺病毒能有效的感染SGC,并可在SGC中正确地转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的Bcl2基因对螺旋神经节损伤的保护作用奠定基础。