再生蛋白质组学研究进展的力作——介绍《动物组织器官再生的比较蛋白组学研究》

由郑州大学出版社出版发行的《动物组织器官再生的比较蛋白质组学研究》一书是国家新闻出版广电总局“十三五”规划重点项目,获得国家出版基金资助。全书以大鼠肝再生以及分布于我国的蝾螈(Orientalis)断肢再生、三角涡虫(Japonica)头尾再生为研究对象,检测和分析了再生相关蛋白在动物组织器官中再生的生理、生化作用,包括细胞生长、细胞发育、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、细胞的物质运输、细胞迁移、糖类代谢、脂类代谢、氨基酸代谢、蛋白质代谢、核酸代谢、有机酸代谢、维生素、辅助因子代谢、激素代谢、一氧化碳代谢、生物氧化及活性氧代谢,论述了细胞内环境的稳定、对刺激的反应、免疫反应、凝血反应、炎症反应、自噬反应等,以及调节这些生理生化活动的信号通路活性。

问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定

目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。

中耳细菌感染诱导的急性期HSP-70相关反应的免疫组织化学研究

探讨中耳细菌感染急性期时 ,哺乳动物中、内耳热休克反应的部位 ,以及中耳细菌感染诱生的热休克蛋白是否可能引发内耳自身免疫损伤。运用中耳注射肺炎克雷伯杆菌制成豚鼠中耳急性感染动物模型 ,分别于接种后第 1、3、5、7天处死动物取材。应用免疫组化技术 ,研究了中耳粘膜和耳蜗表达热休克蛋白 70 (HSP- 70 )的部位。结果表明 :正常状态下 ,中耳粘膜表层的上皮细胞和内耳膜迷路血管纹、螺旋韧带、Corti氏器均有弱的阳性反应 ,感染应激后 ,上述同样部位均有强的阳性显色。不同取材时段显示的阳性位置无差异。说明在中耳急性细菌感染期 ,中耳粘膜和内耳组织均表达了同源 HSP- 70蛋白分子 ,这些同源 HSP- 70为引发内耳自身免疫损伤提供了物质基础。

从免疫学角度看麻风分类

人们都说麻风的病型是根据受感染者的个体免疫程度来分的,但决定病型的却主要是依靠病理学的所见。即使现在免疫学已有了很大的进步,要据以说明麻风的病型还是相当困难的。麻风专家们都知道有易患麻风的人和不易患麻风的人,其原因何在,目前还不清楚。当进行麻风研究时,对其免疫与发病的关系这样一个复杂的问题,没有某种统一的理论,便会自相矛盾,走向错误的方向,或者发生意想不到的曲折。将麻风分为LLp、LLsp、BL、BB、BT、TTsp和TTp时,LLp就是在胎儿期从母亲那儿感染了麻风菌,带着麻风菌长大起来的人对麻风菌就变得有完全的耐受性了。

结核分枝杆菌三种蛋白在结核病血清学诊断中的评价研究

目的对结核分枝杆菌相对分子质量为38000（以下采用38kD表示）、线粒体通透性转换蛋白64（mitochondrial permeability transition64，MPT-64）和肝素结合血凝素（heparin-binding haemaggIutinin，HBHA）蛋白在外周血中抗体的表达水平进行检测和比较，并对它们在结核病血清学方面的诊断价值进行评估。方法选取2012年7月至2013年10月北京胸科医院收治的肺结核患者作为活动性肺结核（ATB）组，共78例；选取同期36例潜伏结核感染（LTBI）患者作为LTBI组；同期在北京胸科医院进行体检的31名健康人群（HC）作为HC组。将本实验室前期纯化的38kD、MPT64和HBHA作为抗原应用于免疫学的检测，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中三种蛋白抗体的表达水平，经过统计学处理后，分别比较ATB、LTBI和HC三组之间的差异，并结合受试者工作特征曲线计算各蛋白抗原的敏感度和特异度，评价三种蛋白血清抗体的临床诊断价值。结果ELISA检测ATB组38kD蛋白抗体的吸光度（A）450cm处的A值（0．343±0．120）高于LTBI组（0．221±0．102）和HC组（0．143±0．097），差异有统计学意义（t=3．07，P〈0．05）；MPT64抗体的A450值（0．234±0．102）高于LTBI组（0．198±0．087）和HC组（0．123±0．075），差异有统计学意义（t=3．79，P〈0．05）；HBHA抗体的A450值（0．263±0．113）高于LTBI组（0．188±0．091）和HC组（0．148±0．078），差异有统计学意义（t=2．70，P〈0．05）。以38kD、MPT64和HBHA蛋白抗体表达水平从LTBI组鉴别ATB组时的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）分别为0．78、0．61和0．62，敏感度分别为71．79％、62．82％和52．56％，特异度为72．22％、58．33％和69．44％；从HC组鉴别ATB组时的AUC分别为0．91、0．81和0．79，敏感度分别为87．17％、69．23％和73．08％，特异度为80．65％、74．19％和74．19％；从HC组鉴别LTBI组AUC分别为0.63、0．75和0．69，敏感度分别为58．33％、77．78％和63．89％，特异度为64．52％、51．61％和74．19％。结论MTB38kD、MPT64和HBHA蛋白都有较好的免疫反应性，3种蛋白抗体在不同患者人群血清中的表达水平有差异，对肺结核诊断价值的评估结果表明采用ELISA对外周血中MTB蛋白抗体进行检测可作为结核病临床检测诊断的辅助方法。

结核分枝杆菌重组Mtb81蛋白抗原血清学诊断价值的研究

目的研究重组Mtb81(rMtb81)蛋白的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法应用基因工程技术表达、纯化rMtb81蛋白,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测192名健康者和210例肺结核患者血清中抗结核抗体。结果 rMtb81蛋白在大肠埃希菌细胞内以包涵体形式高效表达,表达量占菌体总蛋白的30%左右,相对分子量约80.7kD,具有良好的抗原特异性。在210例结核病患者血清中,103例菌阳患者和107例菌阴患者抗rMtb81抗体的阳性率分别为37.9%和41.1%,总的灵敏度为39.5%。在192例正常人血清中,95例PPD阴性者和97例PPD阳性者抗Mtb81抗体的阳性率分别为1.1%和6.2%。结论 rMtb81蛋白可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。

基因修饰的组织工程骨修复节段性骨缺损及相关免疫学研究

目的观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因修饰的组织工程骨修复节段性骨缺损效果及异种骨支架体内应用的安全性。方法①制备去抗原牛松质骨块(BCB),植入小鼠股四头肌袋内,术后行淋巴细胞转化试验和组织学观察。②在腺病毒载体介导下将BMP-2基因导入兔骨髓间质干细胞后,种植到BCB支架中,构建基因修饰的组织工程骨。于兔双侧桡骨中段造成15mm骨缺损,采用5种方法进行处理BMP-2基因转染细胞+BCB(A组);未转染细胞+重组BMP-2+BCB(B组);对照基因转染细胞+BCB(C组);未转染细胞+BCB(D组);单纯BCB(E组)。术后4、8、12周行X线、组织学和生物力学检测。结果①BCB具有较低的抗原性和良好的组织相容性;②A组术后4周诱导生成软骨组织并向编织骨转化,12周骨缺损修复,髓腔再通,新骨强度明显优于其他各组(P<0.01)。结论BMP-2基因修饰的组织工程骨是修复节段性骨缺损的好方法。

衔接分子胱天蛋白酶募集域蛋白9与抗结核免疫的相关性

结核病是一种慢性传染病,全球每年有170万例患者死于结核病。我国结核病患者例数居世界第二位,也是耐药结核病流行严重的国家之一,因结核病死亡的人数超过其他传染病死亡人数的总和。因此,研制有效的抗结核药物和新型疫苗迫在眉睫。这需要对宿主与Mtb相互作用机制、抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)内部信号传导机制及其关键分子进行深入理解。宿主感染Mtb后,通过模式识别受体(pattern recognitionreceptors,PRRs)识别Mtb表面病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),并将信号传递给衔接分子,后者启动下游的信号级联反应,诱导固有免疫细胞合成细胞因子,活化宿主免疫机制。本综述对一种重要的衔接分子胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containing protein 9,CARD9)及其与抗结核免疫的相关性进行简要阐述,为结核病的治疗和疫苗的研制提供参考。

54例轻链型单克隆免疫球蛋白血症的蛋白水平分析

目的研究分析54例轻链型单克隆免疫球蛋白血症的体液蛋白特征。方法利用免疫固定技术从2 765例单克隆免疫球蛋白血症中筛查出275例轻链型患者,对其中54例患者进行血清蛋白电泳、尿液本-周蛋白、尿液蛋白定性、尿液蛋白定量以及尿液中轻链含量等检测。结果 54例轻链型单克隆免疫球蛋白血症中,属κ轻链型的有24例,占44%,尿液中κ轻链含量为(1.86±1.77)g/L,κ/λ值为(277.22±253.56);属λ轻链型的有30例,占56%,尿液中λ轻链含量为(0.70±0.58)g/L,κ/λ值为(0.03±0.02);54例患者血清蛋白电泳中仅有12例在α2～γ区间有淡染的M带出现;患者的尿液均呈本-周蛋白阳性,其中30例尿蛋白定性呈阴性或弱阳性,其余24例尿蛋白定性呈+～2+,尿蛋白定量为0.2～8.6g/L之间。结论轻链型单克隆免疫球蛋白血症患者血清蛋白电泳结果的M蛋白检出率低,尿液中蛋白多为低浓度,因此利用高灵敏度的免疫固定技术检测患者的血清及尿液中的游离轻链,能够提高该病患者M蛋白的检出率。

过敏性哮喘诱导痰中高迁移率族蛋白B1、晚期糖基化终产物受体表达与血清总免疫球蛋白E水平的相关性

目的检测过敏性哮喘病儿诱导痰中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达及血清中免疫球蛋白E(IgE)水平,并探讨过敏性哮喘病儿诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平的相关性。方法选取2015年4月至2018年9月因过敏性哮喘于聊城市第二人民医院免疫专科门诊及病房接受治疗的148例病儿(哮喘组);同期选取136例健康体检儿童作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组诱导痰中HMGB1、RAGE表达及血清总IgE水平;检测两组肺功能指标、粒细胞水平;分析哮喘组HMGB1、RAGE、IgE与肺功能指标、粒细胞水平相关性;分析哮喘组诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平相关性;分析影响过敏性哮喘的因素。结果哮喘组诱导痰中HMGB1(273.23±86.39)ng/L、RAGE表达(469.54±121.35)ng/L、血清总IgE水平(557.73±156.87)IU/mL、中性粒细胞(33.46±8.73)%、嗜酸粒细胞(7.48±2.64)%均显著高于对照组[(164.83±49.36)ng/L、(309.43±93.68)ng/L、(271.70±89.43)IU/mL、(25.47±6.14)%、(3.46±1.05)%](P<0.05),第一秒用力呼气量(FEV1)(63.19±8.27)%、用力肺活量(FVC)(65.42±6.93)%、最大呼气峰流速(PEF)(63.54±8.42)%水平均显著低于对照组[(89.38±13.21)%、(94.86±13.47)%、(103.24±14.17)%](P<0.05);过敏性哮喘病儿HMGB1、RAGE、IgE与FEV1、FVC、PEF水平均呈现负相关,与中性粒细胞、嗜酸粒细胞水平均呈现正相关(P<0.05);过敏性哮喘病儿诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平均呈现正相关(r=0.454、0.522,均P<0.05);HMGB1、RAGE、IgE、嗜酸性粒细胞是影响过敏性哮喘发生的危险因素。结论过敏性哮喘病儿诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平均呈现正相关,三者与过敏性哮喘病情密切相关。HMGB1、RAGE、IgE结合肺功能指标、粒细胞水平对评价过敏性哮喘的早期危险性有重要意义。

肿瘤诊断与免疫治疗的新靶标精子蛋白17

精子蛋白17(spermprotein17,Sp17)是一种高度保守的哺乳动物蛋白,主要在睾丸中表达。在睾丸外的某些正常组织中也可检测到低水平Sp17mRNA和少量表达该蛋白的细胞。文献报道一些多发性骨髓瘤,原发性卵巢癌患者的肿瘤组织表达Sp17,新近我们应用免疫组化技术发现子宫内膜癌细胞Sp17也呈阳性。在正常组织的局限性表达和在肿瘤中的异常表达,使Sp17有望成为肿瘤诊断的标志物。Sp17既有B细胞表位又有细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicTlympytes,CTL)表位,可以从正常供体、MM患者和卵巢癌患者制备出能杀伤HLA相配的Sp17+的肿瘤细胞的CTL,提示Sp17可能为免疫治疗的理想疫苗。

附睾蛋白酶抑制蛋白及其在免疫避孕中应用的研究进展

针对精子特异性抗原的免疫避孕,为控制生育展示了诱人的前景。Eppin是其中的研究热点。Eppin的基因和结构特点决定了其对精子功能的重要作用,也是其作为免疫避孕有效靶点的基础。

结核分枝杆菌三种蛋白在结核病血清学诊断中的评价研究

目的对结核分枝杆菌相对分子质量为38000（以下采用38kD表示）、线粒体通透性转换蛋白64 （ mitochondrial permeabilitytransition 64, MPT-64 ）和肝素结合血凝素（ heparin-binding haemagglutinin, HBHA ）蛋白在外周血中抗体的表达水平进行检测和比较，并对它们在结核病血清学方面的诊断价值进行评估。方法选取2012年7月至2013年10月北京胸科医院收治的肺结核患者作为活动性肺结核（ATB）组，共78例；选取同期36例潜伏结核感染（LTBI）患者作为LTBI组；同期在北京胸科医院进行体检的31名健康人群（HC）作为HC组。将本实验室前期纯化的38kD、MPT64和HBHA作为抗原应用于免疫学的检测，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中三种蛋白抗体的表达水平，经过统计学处理后，分别比较ATB、LTBI和HC三组之间的差异，并结合受试者工作特征曲线计算各蛋白抗原的敏感度和特异度，评价三种蛋白血清抗体的临床诊断价值。结果ELISA检测ATB组38kD蛋白抗体的吸光度（A）450nm处的A值（0．343±0．120）高于LTBI组（0.221±0．102）和HC组（0．143±0．097），差异有统计学意义（t=3．07，P〈0．05）；MPT64抗体的A450值（0．234±0．102）高于LTBI组（0．198±0．087）和HC组（0．123±0．075），差异有统计学意义（t=-3．79，P〈0．05）；HBHA抗体的A450值（0．263±0．113）高于LTBI组（0．188±0．091）和HC组（0．148±0．078），差异有统计学意义（t=2．70，P〈0．05）.以38kD、MPT64和HBHA蛋白抗体表达水平从LTBI组鉴别ATB组时的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）分别为0．78、0．61和0．62，敏感度分别为71．79％、62．82％和52．56％，特异度为72．22％、58．33％和69．44％；从HC组鉴别ATB组时的AUC分别为0．91、0．81和0．79，敏感度分别为87．17％、69．23％和7308％，特异度为80．65％、74．19％和74．19％；从HC组鉴别LTBI组AUC分别为0．63、0．75和0．69，敏感度分别为58．33％、77．78％和63．89％，特异度为64．52％、51．61％和74．19％。结论MTB38kD、MPT64和HBHA蛋白都有较好的免疫反应性，3种蛋白抗体在不同患者人群血清中的表达水平有差异，对肺结核诊断价值的评估结果表明采用ELISA对外周血中MTB蛋白抗体进行检测可作为结核病临床检测诊断的辅助方法。

细菌外膜囊泡纳米载体的制备及其免疫调节作用

目的:以细菌外膜囊泡(OMV)结合三嵌段聚合物普朗尼克F127(PEO_(100)-PPO_(65)-PEO_(100)),构建能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子的纳米载药体系OMV-F127。方法:培养减毒沙门菌,用超滤离心法与超声破碎法提取OMV,机械挤压法制得OMV-F127;蛋白质定量试剂盒和SDS-PAGE法检测OMV的蛋白含量和成分;荧光显微镜、透射电镜、动态光散射法检测OMV-F127形态学特征、粒径、电位及其稳定性;以小鼠巨噬细胞RAW246.7为细胞模型,ELISA检测OMV-F127对抗肿瘤细胞因子的分泌作用。结果:两种方法成功提取到减毒沙门菌的OMV,其蛋白质总量分别为2.8 mg/mL和2.7 mg/mL。成功制备OMV-F127且含有OMV的标志蛋白OmpF/C。OMV为纳米级囊泡结构,F127以及OMV-F127为球形纳米颗粒。OMV、F127、OMV-F127颗粒平均直径分别为(72±2)nm、(90±3)nm、(92±2)nm。OMV-F127能促进抗肿瘤细胞因子IL-12、α-TNF、γ干扰素的分泌。结论:基于细菌OMV的纳米载体OMV-F127能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子,具有免疫调节作用。

结核分枝杆菌重组蛋白Rv0222的表达及血清学鉴定

目的构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值。方法通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签(His-tag)亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者(痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者),28例非结核病患者(8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿)和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和最佳阳性判定值。结果成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95%以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合。酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,最佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5%(57/82),非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0%(54/60),结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义(t=25.78,P<0.0001)。结论成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一。

复苏促生长因子结构域及其突变体重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究

目的评价复苏促生长因子结构域蛋白(Rpfd)及其突变体蛋白(Rpfd1、Rpfd2)等3种重组蛋白的免疫效能。方法2011年11月至2012年2月间,分别以本实验前期制备的重组蛋白Rpfd(A组)、Rpfd1(A1组)、Rpfd2(A2组)分别于0、2、4周免疫无特定病原体(SPF)级BALB/c小鼠,每组14只,并分别以BCG(B组)和生理盐水(C组)同期免疫同种小鼠各14只作为对照。第5周,每组取7只小鼠摘眼球取血,ELISA法检测血清特异性抗体、血清IFN-γ和IL-2表达水平;第8周,每组剩余7只小鼠用1×105 CFU结核分枝杆菌标准株H37Rv感染小鼠,第9周检测感染后小鼠血清细胞因子IFN-γ和IL-2水平。结果 (1)抗体水平:①Rpfd抗原包被。A1组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(0.990±0.272)高于B组(0.631±0.180)(t=4.635,P<0.05);A2组(1.470±0.455)高于B组(t=6.634,P<0.05)。②Rpfd1抗原包被。A组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(1.030±0.304)高于B组(0.573±0.004)(t=5.276,P<0.05);A1组(1.368±0.171)高于B组(t=17.20,P<0.05);A2组(2.766±0.245)高于B组(t=31.643,P<0.05);③Rpfd2抗原包被。A1组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(1.055±0.202)高于B组(0.538±0.100)(t=8.009,P<0.05);A2组(1.605±0.544)高于B组(t=8.192,P<0.05)。(2)IFN-γ水平:①感染前。A组刺激小鼠产生IFN-γ水平[(553.47±132.00)pg/ml]高于B组[(385.28±129.07)pg/ml](t=3.150,P<0.05);②感染后。A1蛋白组刺激小鼠产生IFN-γ水平[(492.41±211.74)pg/ml]高于B组[(335.36±207.72)pg/ml](t=2.874,P<0.05);A2组[(543.09±223.07)pg/ml]高于B组(t=3.15,P<0.05)。(3)IL-2水平:①感染前。A组刺激小鼠产生IL-2水平[(1490.05±215.35)pg/ml]高于B组[(718.70±269.29)pg/ml](t=7.763,P<0.05);A1组[(1738.91±358.40)pg/ml]高于B组(t=7.903,P<0.05);A2组[(2270.74±193.40)pg/ml]高于B组(t=16.308,P<0.05);②感染后。A组刺激小鼠产生IL-2水平[(806.81±306.39)pg/ml]高于B组[(335.26±176.81)pg/ml](t=4.627,P<0.05);A1组[(1373.22±143.75)pg/ml]高于B组(t=15.90,P<0.05)。结论Rpfd、Rpfd1、Rpfd2蛋白具有启动宿主体液免疫功能及增强宿主细胞免疫功能的双重作用,可能成为预防及治疗Mtb感染的免疫新策略。

免疫蛋白质组学技术筛选布鲁菌高免疫原性膜蛋白

目的建立布鲁菌免疫蛋白质组学方法,从羊布鲁菌膜蛋白中筛选免疫候选抗原。方法提取羊布鲁菌16M膜蛋白,进行双向电泳(2-DE)分离,分别用牛、羊布鲁菌感染的阳性血清进行Westernblot分析,筛选出的免疫显性蛋白点进行LC-MS/MS质谱鉴定,并进行生物信息学分析。结果筛选出56个免疫显性蛋白点,鉴定成功35个,其中有12个蛋白是能够被牛、羊2种血清共同识别的抗原。数据检索显示,这些蛋白主要涉及布鲁菌的能量代谢,蛋白质、氨基酸合成,脂肪酸代谢及糖和辅酶的合成等生物过程。结论利用免疫蛋白质组学技术成功筛选出羊布鲁菌高免疫原性膜蛋白,为布鲁菌亚单位疫苗的研制提供了大量的候选抗原。

一组免疫学名词辨析

外毒素是活细菌在代谢过程中合成的，并扩散到环境中，形成的对机体有毒害作用的蛋白质类物质，易被热、酸及碱所灭活，60℃以上能迅速被破坏，抗原性强，可刺激机体产生高效价的抗毒素；毒性极强，极微量就可使实验动物死亡。最强的肉毒毒素lmg纯品能杀死2亿只小鼠，其毒性比化学毒剂氰化钾还要大1万倍。可经0．3％～0．4％的甲醛液处理，脱毒成为类毒素。

问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位

目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR／PatocI抗血清为一抗的Westernblot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL2ls的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果：改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8．5％和46．5％。两种rLipL21均能与TR／PatocI抗血清发生免疫结合反应，免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近，均为1：80～1：320。LipL21位于钩体外膜表面。结论：LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量，其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性，其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。

我国类鼻疽研究的历史与现状

类鼻疽是Whitmore于 1 91 1年在缅甸仰光发现的。本病为类鼻疽杆菌所致的以东南亚为主的热带和亚热带地方性传染病。我国类鼻疽杆菌主要分布于海南、广东和广西。 1 995年 ,发现福建蒲田的稻田也存在类鼻疽杆菌。本文对 2 0多年来我国类鼻疽流行病学。