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题名植物细菌诱导型表达载体的构建
被引量:1
- 1
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作者
曾骥
黄真池
刘媛
黄永莲
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机构
湛江师范学院自然科学与技术研究中心
湛江师范学院生命科学与技术学院
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出处
《湛江师范学院学报》
2006年第6期71-74,103,共5页
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基金
广东省科技攻关项目(2002A2070402
2006B20101011)
广东省自然科学基金资助项目(5011730)
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文摘
根据GenBank中细菌诱导型启动子的碱基序列设计一对引物,通过PCR扩增出启动子PPP3(AF469483,220bp).经分子操作将启动子和质粒pUC18连接后转化E.coliDH5α,经蓝白筛选和PCR检测筛选阳性菌落,测序结果与Genebank中的碱基序列完全相同.对扩增到的PPP3片段和含目的基因(hrap或pflp)的pBI121质粒进行双酶切,分别回收PPP3片段和含目的基因的pBI121大片段,连接后转化E.coliDH5α,通过卡那霉素抗性筛选和PCR检测,表明细菌诱导型启动子和目的基因已正确连接.用重组质粒转化农杆菌,经卡那霉素抗性筛选和PCR检测,证明植物细菌诱导型表达载体构建成功.
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关键词
细菌诱导型启动子
hrap
pflp
植物细菌诱导型表达载体
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Keywords
bacteria-inducible promoter
hrap
pflp
plant bacteria-inducible expressing vector
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分类号
Q946
[生物学—植物学]
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题名大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达
被引量:3
- 2
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作者
张倩
廖玉才
陈方方
董璇
李和平
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机构
华中农业大学生命科学技术学院
华中农业大学植物科学技术学院
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出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期461-464,共4页
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基金
国家自然科学基金(304709291
30530510)
+1 种基金
转基因植物专项(JY04-A-01)
教育部博士点基金资助
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文摘
通过PCR克隆了大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因manA,分别构建了含manA基因的原核和真核生物表达载体。在大肠杆菌中经IPTG诱导表达的GST-PMI融合蛋白,经亲和层析纯化和PreScission蛋白酶酶切,SDS-PAGE分析证实PMI蛋白为42 ku。对转manA基因的拟南芥进行PCR分析表明,manA基因已稳定整合到拟南芥基因组中。氯酚红显色反应证实,整合到拟南芥基因组中的manA基因能表达具有6-磷酸甘露糖异构酶活性的PMI蛋白。这些结果说明,克隆的manA基因可在细菌和高等植物中高效表达。
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关键词
manA基因
6-磷酸甘露糖异构酶活性
细菌诱导表达
拟南芥转化
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Keywords
manA gene
6-phosphomannose isomerase activity
induced expression in bacterium
Arabidopsis transformation
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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