应用细菌重组系统构建小鼠Flt3配体的重组腺病毒及其在肝癌细胞中的表达

目的 构建携带小鼠Flt3配体 (murineflt3ligand ,mFL)的重组腺病毒载体并检测它在感染后的小鼠肝癌细胞中的表达 ,为肝癌基因治疗提供实验基础。方法 PCR扩增含有mFL的质粒 ,应用高效细菌内同源重组系统构建携带mFL的重组腺病毒 ,感染小鼠肝癌细胞株Hepa1 6 ,一步法提取细胞总RNA ,RT PCR检测mFL的表达。结果 构建了携带mFL的重组腺病毒 ,并在感染后的Hepa1 6细胞中检测到了mFL的mRNA。结论 应用该细菌重组系统成功地构建了携带mFL的重组腺病毒载体 。

小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的 :构建小鼠趋化因子 MIP1-α(m MIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达 ,为肝癌基因治疗提供实验基础。 方法 :PCR扩增含有 m MIP1-α的质粒 ,将腺病毒骨架质粒 p Ad Easy- 1以及线性化的重组穿梭质粒 p Track- CMV-m MIP1-α共转化 BJ5 183受体菌并在其中发生同源重组 ,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子 ,重组腺病毒质粒经过 2 93细胞的包装、扩增和纯化后 ,感染小鼠肝癌细胞株 Hepa1- 6 ,一步法提取细胞总 RNA,RT- PCR检测 m MIP1-α的 m RNA。琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中 m MIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性。 结果 :得到了携带 m MIP1-α的重组腺病毒 ,纯化后滴度为 4× 10 1 1 efu/ ml,在感染后的 Hepa1- 6细胞中检测到 m MIP1-α的表达 ,上清中 m MIP1-α的趋化指数为 6 .3。结论 :成功地构建了携带 m MIP1-α的重组腺病毒载体 ,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础。