细辛多糖的提取工艺优化及细胞衰老保护作用

目的:优化细辛多糖的提取工艺,研究细辛多糖对血管平滑肌细胞衰老的保护作用。方法:Box-Behnken响应面法优化多糖提取参数,AKTA explorer 100层析系统分级纯化多糖,利用形态学观察、MTT法、衰老β-半乳糖苷酶染色法评估细辛多糖对依托泊苷诱导大鼠主动脉平滑肌细胞衰老的保护作用。结果:细辛多糖的最佳提取条件为:提取温度90℃,提取时间2.37 h,液料比40∶1 mL/g,最大多糖得率为10.20%。细胞实验中,细辛多糖预处理明显减轻依托泊苷诱导所致的细胞衰老形态变化,提高细胞活力,下调衰老β-半乳糖苷酶活性水平。结论:细辛多糖的最佳提取工艺被确定,细辛多糖可明显抑制依托泊苷诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞衰老和凋亡,对心血管疾病有保护作用。

细辛多糖的超声提取工艺优化及其结构与活性研究

目的优化细辛多糖超声辅助提取工艺,对细辛多糖的结构进行简单的表征,研究细辛多糖抗氧化与免疫活性。方法采用响应面分析法优化细辛多糖的超声辅助提取工艺,设置与细辛多糖超声辅助提取直接相关的4个因素:超声功率、提取时间、提取温度以及液料比进行单因素试验,依据单因素试验结果,根据Box-Behnken中心模型试验设计多糖响应面因素水平表,运用Design Expert11软件进行响应面优化分析,最终得到超声波辅助提取法提取细辛多糖的最佳提取工艺,利用此工艺提取得到细辛多糖ASP。通过紫外光谱、红外光谱、离子色谱对ASP进行简单表征,通过研究ASP对DPPH、羟基自由基、超氧自由基的清除率以及对小鼠巨嗜细胞RAW264.7的增殖与吞噬的影响来探究ASP的抗氧化与免疫活性。结果超声波辅助提取法提取细辛多糖的最佳提取工艺为:超声时间54 min、超声温度62℃、液料比27 mL·g^(-1)、超声功率425 W,在此条件下多糖的平均提取率为17.812%。ASP蛋白质与核酸含量很低,具有一般多糖的红外吸收峰。离子色谱结果表明,ASP由阿拉伯糖、半乳糖以及葡萄糖组成。在活性方面ASP对于DPPH、羟基自由基、超氧自由基都有着较强的清除作用,并且对RAW264.7的增殖与吞噬有着显著的增强作用。结论该研究得到的一种新的细辛多糖的提取工艺,并对其产物ASP进行了简单的结构表征,同时ASP也表现出了良好的抗氧化与免疫增强活性,这为细辛多糖的进一步的分离纯化以及研究开发奠定了实验基础。

细辛多糖对流感病毒H1N1型感染的保护作用及对炎症因子表达水平的影响

提取细辛多糖,分析其组成,研究其体外抗H1N1流感病毒活性及对肾阳虚外感证小鼠的干预作用。水提醇沉法制备细辛多糖,测定多糖含量并分析其单糖组成。体外采用细胞实时监测系统及Reed-Muench法评价其抗病毒活性。体内建立肾阳虚外感小鼠模型,比较麻黄细辛附子汤(以下简称"MXF组")和细辛多糖的药效。MXF组和细辛多糖组分别以1.8 g·kg^(-1)·d^(-1)和0.077 g·kg^(-1)·d^(-1)的临床等效剂量进行给药干预,每日1次,连续6 d。Real-time PCR法检测肺组织中H1N1流感病毒M基因及多个细胞因子的相对表达量。细辛中细辛多糖的质量分数为25.22%,多糖中蛋白质量分数为0.8%,其单糖组成为L-鼠李糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖。达菲、MXF和细辛多糖的治疗指数(TI)分别为30.00,8.06,10.33。细辛多糖3个给药浓度均可显著降低上清液中病毒含量(P<0.05)。与模型组相比,MXF组、细辛多糖组小鼠的肺指数显著降低(P<0.05),H1N1流感病毒的M基因相对表达量显著降低(P<0.05)。IL-10和IFN-γ的基因相对表达量出现不同程度上调,IL-1β,IL-6,MCP-1的基因相对表达量均出现不同程度的下调,细辛多糖可显著增强TNF-α的表达(P<0.01)。细辛多糖具有较好的体外抗流感病毒活性,并可通过降低肺组织中病毒载量及减轻肺组织的炎症损伤、调节炎症细胞因子表达起到对肾阳虚外感证小鼠的保护作用。相较于全方,细辛多糖有较好的抗病毒活性。