细胞-细胞间作用力调控肝脏类器官的构筑与功能

目的肝脏类器官是一种干细胞来源经自组织形成的三维细胞结构,可在体外重现肝脏的发生过程、模拟肝脏的组织结构、生理功能及病理状态,具有重要的基础意义和广阔的应用前景。目前尚不清楚在肝脏类器官形成过程中干细胞在相同的生化条件下可分化为不同种类终末细胞的原因,推测在类器官形成过程中细胞间作用力分布不均匀可能导致干细胞命运的不同。本研究旨在探讨细胞-细胞间作用力调节肝脏类器官结构和功能的生物力学机制。方法将人肝祖细胞(Hepa RG细胞系)包埋在基质胶中进行特定阶段诱导分化获得肝脏类器官。通过免疫荧光检测肝细胞和胆管细胞标志物的表达以确定它们在肝类器官中的分布,并构建DNA分子力学探针用于细胞间作用力大小和分布的原位观察。结果Hepa RG来源肝脏类器官经生长分化后可检测到肝细胞标志物ALB和CK18及胆管细胞标志物CK19的表达增加,干细胞标志物SOX9表达减少。CK18分布在肝类器官内部而CK19分布在边缘位置。使用3种类型的细胞间作用力探针(4.7、9.8和16.3 p N)检测类器官内部的细胞间力,发现类器官核心区域的细胞间力显著高于边缘区域。结论肝脏类器官形成过程中,肝祖细胞向肝细胞与胆管细胞的双向分化能力与细胞间力大小不同有关,较强的胞间力更有利于向肝细胞分化。

人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

为了研究人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞(以下简称"MG-63细胞")形态与超微结构及终末分化指标的影响,鉴定其对MG-63细胞的诱导分化作用,以50μg/mL人参皂甙Rg1处理MG-63细胞,光学显微镜与电子显微镜观察MG-63细胞形态、超微结构变化,免疫细胞化学方法检测成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化,并同步以HMBA处理MG-63细胞作为阳性对照.光学显微镜与电子显微镜观察结果显示细胞形态与超微结构产生了细胞形态规则、大小一致、细胞铺展体积增大,核质比例减小、核内核仁数目减少、细胞器丰富发达等与正常细胞相似的恢复性变化.观察到MG-63细胞终末分化指标I型胶原、骨粘素、骨钙蛋白的阳性表达及钙化糖原颗粒的增多与典型骨节结的形成,其变化结果与HMBA处理细胞类似.本研究证实人参皂甙Rg1能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并增强成骨细胞相关的终末分化指标的表达,从而对MG-63细胞的终末分化具有一定的诱导作用.

人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞特异性病毒检测

目的对人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞进行外源性特异性病毒检测。方法运用实时荧光PCR法检测人二倍体细胞(2BS株)的生产终末细胞的细胞样本—细胞裂解上清液的人鼻咽癌病毒、人巨细胞病毒、人逆转录病毒(H IV)、人乙型肝炎病毒、人丙型肝炎病毒、人乳头瘤病毒、腺病毒及人单纯疱疹病毒核酸。结果人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞的细胞样本中未检测到8种外源性特异性病毒核酸。结论人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞的细胞样本的外源性特异性病毒检测项目合格。

Notch信号通路促进小鼠胸骨软骨细胞终末期成熟分化的实验研究

目的研究Notch信号通路对小鼠胸骨软骨细胞终末期成熟分化的促进作用及其成软骨分化的抑制作用。方法用鼠龄4 d昆明新生小鼠,分离和培养新生小鼠胸骨软骨细胞;NICD1慢病毒转染,提高细胞内Notch信号通路活性。实时聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内终末期成熟分化因子和成软骨因子基因的表达;用碱性磷酸酶(ALP)染色和Alcian蓝染色方法检测软骨细胞内ALP和蛋白多糖的分泌。将细胞分为2组:对照组和NICD1组,比较两组细胞内各因子基因和蛋白的表达不同。结果新生小鼠的胸骨软骨细胞具有自发性终末期成熟分化的特点;经NICD1慢病毒转染后,软骨细胞内NICD1的蛋白表达显著提高。与对照组相比,NICD1组细胞内终末期成熟分化因子的基因表达和ALP分泌明显增加(P<0.05);而成软骨分化因子的基因表达和蛋白多糖分泌明显降低(P<0.05)。结论 Notch信号通路可促进小鼠胸骨软骨细胞终末期成熟分化,并抑制其向成软骨分化。

细胞终末分化过程中三维基因组结构与功能调控的分子机制

真核细胞中的染色质DNA高度折叠形成复杂的三维结构,其空间组织方式对精准调控基因的表达和细胞发挥正常功能都起着重要的作用。细胞终末分化成熟过程中形态及基因表达谱常发生显著改变,同时伴随着明显的基因组三维结构变化。本文在简单介绍三维基因组多层次组织结构(染色质领域、A/B区室、拓扑相关结构域和成环构象等)基础上,重点综述了细胞终末分化过程中三维基因组结构变化与功能调控方面的研究进展,并探讨了当前三维基因组研究在解析细胞分化成熟过程时存在的问题和前景。

利用生物信息学方法解析自噬相关基因在人体红细胞终末分化各阶段的动态表达

为了探究自噬相关基因在人体红细胞终末分化各阶段的表达概况,利用生物信息学方法对人体终末分化各阶段红细胞转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)数据中自噬相关基因的表达进行提取并分析。结果表明,自噬相关基因在红细胞终末分化各阶段呈现不同的表达模式;在红细胞终末分化的早期,超过50%的自噬相关基因呈现高表达状态;原始红细胞及早幼红细胞中高表达的自噬相关基因富集的生物学过程主要包括细胞自噬及其调节、蛋白质的磷酸化及囊泡的运输,而线粒体自噬相关基因主要在中幼红细胞及晚幼红细胞阶段高表达。研究发现,自噬相关基因在人体红细胞终末分化各阶段的表达呈现动态变化;不同阶段的红细胞中高表达的自噬相关基因及其富集的生物学过程均不同。

病患关节软骨中肥大软骨细胞的生物学特性的研究

利用原位杂交、Northernblot及免疫组化等方法检测了X型胶原、胰岛素样生长因子 (IGF -Ⅰ )及转换生长因子 (TGF - β1)mRNA在病损关节软骨 (骨关节炎、类风湿性关节炎、大骨节病和关节鼠 )及无血清培养的人的关节软骨细胞和生长板的肥大软骨细胞的表达 ,结果证明各病损的关节软骨中其细胞除簇聚的细胞外 ,单个的椭圆而大的细胞也能表达X型胶原 ,也是肥大软骨细胞 ;无血清培养的肥大软骨细胞有分化及反分化能力 ,不都是终末细胞。对肥大软骨细胞的生物学及病理生物学特性进行了讨论。

血液透析患者T细胞功能异常研究进展

终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者各种感染的发生率高,是影响患者生存的主要并发症之一。其原因归结于ESRD患者存在免疫功能即细胞免疫和体液免疫缺陷。T细胞功能异常如不能正常识别抗原、激活受阻、分化不平衡及效应能力下降是维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者免疫功能缺陷的主要机制。本文就MHD患者T细胞在适应性免疫应答过程即识别、激活、效应三个阶段中的异常作用及并发症、干预措施对T细胞功能的影响作一综述。

维甲酸诱发人食管癌细胞分化与凋亡的分子基础探讨

利用10^(-5_mol/L全反式维甲酸处理人食管癌细胞系EC109与EC8712细胞,以探讨维甲酸诱发人食管癌细胞终末分化与凋亡过程中的分子事件。经North-ern分析发现在凋亡过程中c-myc基因表达降低,被膜素(involucrin)与TGF-β基因表达增加。分离到的维甲酸特异激活的eDNA——RA538被激活并开始表达,p53基因表达没有明显改变。对这些基因表达的变化在细胞终末分化与凋亡过程中的作用以及维甲酸作用的分子机制进行了分析。

细胞分裂与癌发生机制研究进展

基于肿瘤病理及流行病学的长期观察,结合细胞生物学新成就,发现常见肿瘤发生与细胞分裂潜能关系密切。细胞分裂是个体生长发育及组织损伤后再生修复时必不可少的生物学行为,由于细胞分裂潜能是有限的,频繁分裂将使局部细胞的分裂潜能提前耗竭,籍此发生的细胞重新选择为细胞永生化、恶性变创造了条件。

骨巨细胞瘤中多核巨细胞的来源与功能研究

目的：探讨骨巨细胞瘤中多核巨细胞的来源与作用。方法：应用免疫组织化学方法检测50例骨巨细胞瘤中多核巨细胞的PCNA、p53、p21、c-erbB2、CD68、vimentin、AACT、ACT以及lysozyme的表达和分布状况。结果：多核巨细胞主要表达CD68、AACT、ACT以及lyxozyme，但无一表达PCNA、p53及c-erbB2。结论：研究结果表明多核巨细胞是破骨细胞，属于终末细胞而不是肿瘤细胞。

经典细胞衰老指标在心肌细胞衰老中应用的再评价

细胞衰老是连续分裂的细胞不可逆地丧失增殖能力的过程。近年来终末分化细胞——心肌细胞能否启动衰老程序以及表现衰老的特征受到越来越多的关注。本文概括四项经典的细胞衰老的评价指标在心肌细胞衰老的应用,即β-半乳糖苷酶活性、脂褐素、基因表达谱变化、端粒长度及端粒酶活性,并进一步对上述指标在心肌细胞衰老检测与评价的优缺点以及应用范围等方面进行分析总结。

小剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣对角质形成细胞的干细胞性及分化影响

目的研究小剂量环磷酰胺(CTX)治疗尖锐湿疣(CA)对表皮角质形成细胞(KCs)的干细胞性及分化的影响。方法20例初发CA患者作为对照组(CA组);8例小剂量CTX治疗CA患者为治疗组(CTX组),10例正常包皮环切患者为空白对照组(NS组)。采用免疫组化方法,对比研究表皮干细胞标志物P63和整合素α6(ITGA6)以及成熟KCs标志物K10在3组之间的表达差异。结果P63及ITGA6表达:NS组中主要表达于基底层;CA组表达量较NS组增多(P<0.01),而且表达部位不仅局限于基底层,在靠近基底层的棘层中也存在较多阳性表达;CTX组表达较CA组明显减少(P<0.01),阳性表达位置主要在基底层,而靠近基底层的棘层中仅有少量表达。K10表达:NS组表达于基底层以上的表皮结构中,基底层表达为阴性;CA组表达量较NS组明显减少(P<0.01),基底层不表达;CTX组中表达量较CA组明显增加(P<0.01)。结论小剂量CTX疗法治疗后能使CA疣体中KCs的干细胞性减弱,而细胞终末分化能力增强。

基于红细胞分布宽度和中性粒细胞/淋巴细胞比值建立慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者短期预后预测模型价值研究

目的基于红细胞分布宽度(RDW)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)建立乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期预后预测模型,即RNM。方法回顾性分析HBV-ACLF患者102例,随访患者90 d内生存情况。采用单因素和多因素分析,筛选出对预后有影响的因素,构建短期预后预测模型,即RNM。绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算ROC曲线下面积(AUC),评价各指标预测预后的价值。结果本组90 d生存48例,死亡54例(52.9%);单因素分析显示,死亡组并发感染、RDW、WBC、NEU、NLR、TBIL、INR、Cr和MELD评分显著高于生存组(P<0.05),而淋巴细胞(LY)、ALB、Na+和PTA显著低于生存组(P<0.05);多因素分析显示,RDW(OR=1.410,95%CI,1.149~1.730)、NLR(OR=1.155,95%CI,1.001~1.333)和MELD评分(OR=1.128,95%CI,1.001~1.271)为影响患者死亡的独立危险因素;ROC曲线分析得出,RDW(AUC=0.826)、NLR(AUC=0.819)、MELD评分(AUC=0.791)和RNM模型(AUC=0.888)具有预测肝衰竭预后的应用价值,其中RNM模型的预测价值最优。结论我们基于RDW和NLR建立的RNM模型预测CHB-ACLF患者90 d预后有良好的预测效能。

肺组织修复中肺内外干细胞的作用、功能及问题

背景:干细胞局部修复受损组织的能力为细胞治疗包括慢性肺病在内的大多数不可逆疾病提供了可能性。目的:阐述肺内外干细胞对肺组织的修复作用。方法:第一作者用计算机检索中国期刊全文数据库和Medline数据库,检索词分别为"干细胞,肺组织干细胞,气管-支气管上皮细胞,移植,细支气管-终末细支气管上皮细胞,肺泡上皮细胞,肺间质细胞"和"lung stem cells,tracheal and bronchial epithelial stem cells;transplantation;stem cells in the bronchial and terminal bronchial epithelium;stem cells at the bronchoalveolar junction;alveolar epithelial stem cells,interstitial lung stem cells",共计500余篇论文,语言分别设定为中文和英文,最终纳入47篇文献。结果与结论:肺内外干细胞是肺脏损伤、修复、重塑的基础,机体内肺干细胞多处于静息状态,当肺组织损伤或在体外培养的情况下,肺内外干细胞分裂、增殖。此外,在肺组织修复过程中甚至在生理条件下,是否由于其他因素的影响而发生细胞凋亡、迁移和分化,目前仍未知。因此,肺内外干细胞在慢性肺疾病中的作用仍有很多问题尚待解决。