大鼠脊髓损伤后运动终板内乙酰胆碱酯酶和降钙素基因相关肽的变化

目的观察大鼠不同类型脊髓损伤后降钙素基因相关肽(CGRP)与乙酰胆碱酯酶(AChE)在后肢腓肠肌运动终板内的变化,以探讨不同类型脊髓损伤后CGRP和AChE与运动终板退变的关系。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、切割型脊髓损伤组(B组)和撞击型脊髓损伤组(C组),术后1、2、4、10周分别用Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE、免疫组化法检测CGRP的变化。结果两损伤组大鼠术后运动终板中CGRP和AChE浓度均下降,但C组10周时有了明显恢复,而B组一直处于较低水平;CGRP的改变早于AChE。结论在大鼠不同类型脊髓损伤后,CGRP和AChE的活性和浓度与运动终板退变的程度不同。

不同死后时间骨骼肌运动终板乙酰胆碱酯酶(AChE)降解变化的研究——酶组织化学定量分析(英文)

为进一步了解骨骼肌的死后变化特点和规律及其与死后时间 (PMI)的关系 ,本文选用成年实验大鼠 ,系列观察了死后 0 - 96小时 (0 - 96 hpm)骨骼肌运动终板和肌纤维在不同温度条件下 ACh E(乙酰胆碱酯酶 ) ,SDH(琥珀酸脱氢酶 ) ,L DH(乳酸脱氢酶 ) ,Ca2 + - ATPase(钙激活三磷腺苷酶 )的酶组织化学变化 ,并使用图象处理系统对上述酶反应结果进行了定量分析和比较。结果发现 ,上述改变与 PMI有明显的相关关系 ,其中运动终板 Ach E因位于突触间隙的特殊位置以及自身的耐活性质 ,故反应明确 ,稳定性高 ,降解缓慢显示更清晰和持久的降解曲线 ,可作为藉肌肉组织降解变化用于推断死亡时间的标志酶。

去神经支配后运动终板区域超微结构及乙酰胆碱酯酶含量变化与面肌功能恢复:神经损伤不同程度及损伤后不同时间的差异

目的:探讨不同程度面神经去神经支配后眼轮匝肌(简称眼肌)和口轮匝肌(简称口肌)运动终板形态结构的变化,以及反映运动终板退变和再生情况的乙酰胆碱酯酶在运动终板区含量的变化与面肌功能恢复的关系。方法:实验于2004-04/12在中国医科大学实验动物部,基础医学院组织胚胎学教研室,第二电镜室进行。取白色瞬目反射正常豚鼠30只,随机分为压榨右侧面神经总干15s组10只,30s组10只,切断组10只,每组又依术后观察时间分为1周和1个月两个亚组,每个亚组5只。从30只豚鼠中随机选取5只豚鼠的左侧面神经作为对照组。通过乙酰胆碱酯酶染色进行组织化学分析及光镜和电镜下眼肌和口肌的运动终板形态观察。结果:参加实验豚鼠30只,均进入结果分析。①术后1周时乙酰胆碱酯酶活性灰度值:压榨15s组,压榨30s组和切断组与对照组基本一致[眼肌:68.13±6.68,65.75±7.75,67.56±4.86,66.41±5.89,P>0.05;口肌:67.41±4.85,66.25±6.03,65.86±5.91,64.52±5.12,P>0.05]。②术后1个月时乙酰胆碱酯酶活性灰度值:术后1个月时各组豚鼠口肌乙酰胆碱酯酶活性灰度值仍没有明显变化(64.21±7.23,68.41±7.86,67.58±5.75,64.52±5.12,P>0.05),而压榨30s组和切断组高于对照组(76.12±4.51,85.21±5.12,66.41±5.89,P<0.05)。③透射电镜下运动终板超微结构的变化:去神经支配后1周,突触后膜和神经末梢萎缩,初级和次级皱褶均变浅,眼肌与口肌运动终板结构相似。去神经支配后1个月,切断组口肌,初级和次级皱褶继续变浅;压榨15s和30s组,口肌初级突触间隙接近正常。去神经支配后1个月,压榨30s组和切断组眼肌初级和次级皱褶继续变浅,有些次级皱褶消失。结论:①不同程度神经损伤后1周和1个月时,口肌运动终板处的乙酰胆碱酯酶含量没有明显变化,提示去神经支配后运动终板处的乙酰胆碱酯酶含量保持一定时间的稳定。②不同程度神经损伤>1个月时,眼肌运动终板处的乙酰胆碱酯酶含量下降较明显,提示对去神经支配的敏感性与肌肉种属和肌纤维类型不同有关。

铜缺乏乳牛脑脊液乙酰胆碱酯酶同工酶谱变化特征

选择铜缺乏症高发区具有明显摇摆症状的乳牛 6头 ,用PAGE电泳法分离脑脊液乙酰胆碱酯酶 (ACHE) ,经特异性酶化学染色后以双波长扫描法测定ACHE同工酶的活性 ,同时采集 6头健康乳牛的脑脊液样品作为对照。结果表明 ,90mL/L聚丙烯酰胺凝胶可将脑脊液胆碱酯酶分成 4条区带 ;发病组乳牛脑脊液ACHE同工酶ACHEⅡ、ACHEⅢ、ACHEⅣ活性显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,其ACHEⅠ及ACHEⅢ /ACHEⅠ活性显著低于对照组 (P <0 .0 5 )。表明乳牛脑脊液ACHE同工酶活性的改变与体内铜缺乏有关 。

甲基强的松龙对脊髓半横断大鼠腓肠肌乙酰胆碱酯酶表达的影响

目的探讨注射甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓半横断后运动终板乙酰胆碱酯酶(AChE)表达的影响。方法 Wistar雄性大鼠96只,包括假手术组(A组,n=16)、脊髓半横断组(B组,n=40)和脊髓半横断后MP治疗组(C组,n=40),B、C组分别作右侧脊髓半横断术,C组术后MP干预;术后1 d、3 d、1周、2周、4周分别取右下肢腓肠肌制作冰冻切片,铜-铁氰化物改良染色法检测AChE的表达,比较各组标本阳性表达区的平均光密度值。结果 3组大鼠腓肠肌冰冻切片中均有表达AChE的棕色染色区;脊髓半横断术后1 d,3组大鼠腓肠肌切片中AChE染色区的平均光密度值无统计学差异(P>0.05);术后3 d,B、C组AChE染色区平均光密度值均低于A组,差异有统计学意义(P<0.05),但B、C组之间无统计学差异(P>0.05);术后1周、2周,B组AChE染色区平均光密度值低于C组,B、C组均低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);术后4周,C组AChE染色区平均光密度值明显恢复,与A组比较无统计学差异(P>0.05),B组仍维持低水平,平均光密度值低于A、C组(P<0.05)。结论脊髓半横断后运动终板AChE水平下降,MP早期干预有助于骨骼肌运动终板AChE表达水平的恢复。

肝细胞生长因子对面神经损伤后运动终板及肌纤维修复作用的研究

目的 探讨面神经损伤后 ,肝细胞生长因子 (Hepatocytegrowthfactor,HGF)对其运动终板及肌纤维修复的作用。方法 2 1只新西兰家兔 ,离断双侧面神经颊支 ,用硅胶管桥接 ,形成硅胶再生室 ,左侧注入重组人类HGF为实验侧 ,右侧注入生理盐水为对照侧。手术后 6、1 2周分批取面神经颊支所支配的肌组织 ,行乙酰胆碱酯酶染色和HE染色以显示运动终板及肌纤维。进行组织形态学观察和形态定量分析。结果 术后 6周实验侧终板形态比对照侧规则 ,着色更深 ,具有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,肌纤维横截面积无显著性差异 (P >0 .0 5 )。术后 1 2周实验侧终板形态接近正常 ,对照侧终板结构不成熟 ,染色深浅具有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,实验侧肌纤维比对照侧粗 ,其横截面积具有显著性差异 (P <0 .0 1 )。结论 当周围神经损伤后 ,局部应用HGF可促进运动终板和肌纤维的修复 。

大鼠完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后运动终板变化

目的研究完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后损伤平面以下乙酰胆碱酯酶(AChE)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在骨骼肌运动终板中的变化。方法选取57只雌性大鼠,30只制作成完全性脊髓损伤及修复模型,24只制作成坐骨神经损伤模型,通过AchE组化染色、镀银染色和CGRP免疫组织化学法观察脊髓损伤和坐骨神经损伤后AChE、CGRP在运动终板分别1w、1、3、6、12个月的改变。结果脊髓损伤后1w、1个月AChE组织化学显示与正常运动终板相比无明显变化(P>0.05)。至3、6、12个月与正常相比有统计学差异(P<0.05);但12个月与6个月相比无统计学差异。脊髓损伤后3个月时,CGRP免疫染色阳性部分与正常组相比有明显统计学差异(P<0.01)。至6、12个月CGRP免疫阳性染色部位与正常相比有统计学意义(P<0.05)。而坐骨神经损伤后AChE含量下降,终板退变,CGRP含量明显降低甚至消失,镀银染色未发现改变。结论脊髓损伤后功能相关蛋白含量下降,终板发生退变,退变程度明显较周围神经损伤后轻,这对于改善损伤脊髓功能后恢复运动功能提供了可能。

犬甲杓肌肌纤维型及其运动终板分布的研究

目的 :探讨甲杓肌肌纤维型及其运动终板分布情况。方法 :取犬喉双侧甲杓肌 ,经琥珀酸脱氢酶染色及其与乙酰胆碱酯酶联合染色 ,光镜下观察 ,并用显微图像分析仪对肌纤维直径进行分析。结果 :甲杓肌的横断面上可清晰分出红肌、白肌及中间肌 3种类型肌纤维 ,它们的构成比分别为 5 3 .3 %、17.8%、2 8.9% ;运动终板沿肌纤维走行呈弥漫性分布 ,中间肌纤维含有多个运动终板。结论 :甲杓肌肌纤维型构成比及其运动终板分布特点与其特定的发音功能有关。

重症肌无力大鼠膈肌运动终板的形态学研究

目的:探讨重症肌无力大鼠膈肌运动终板的光镜 及电镜结构变化.方法:被动转移乙酰胆碱受体单抗mAb35 建立SD大鼠获得性自身免疫性重症肌无力模型,用乙酰胆碱 酯酶法显示膈肌运动终板,并行超微结构观察.结果:实验组 大鼠注射mAb35后出现明显肌无力症状,其膈肌运动终板数 量基本不变,但出现与重症肌无力患者相似的超微结构变化, 对照组则无明显变化.结论:膈肌出现运动终板超微结构的 改变,是重症肌无力被动转移模型大鼠呼吸衰竭的可能原因.

消瘿强肌汤对甲亢肌病骨骼肌运动终板的影响

目的观察消瘿强肌汤对甲亢肌病大鼠骨骼肌运动终板超微结构的影响和乙酰胆碱酯酶活性的变化。方法36只健康雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=6)和模型组、中药治疗组、生理盐水对照组(均n=10),后3组腹腔注射甲状腺激素钠盐制作甲亢肌病模型,中药治疗组注射甲状腺激素后再灌服中药方剂消瘿强肌汤。光、电镜观察运动终板乙酰胆碱酯酶活性变化及运动终板超微结构的变化。结果模型组各型骨骼肌纤维运动终板乙酰胆碱脂酶活性均较正常对照组明显减弱,酶反应产物减少,分布不均,超微结构显示突触间隙电子密度高低不等,接头褶减少、变短,轴突终末内线粒体空泡化。中药治疗组运动终板乙酰胆碱酯酶活性明显恢复,接头褶结构、轴突终末内部分线粒体结构恢复正常。结论消瘿强肌汤可恢复甲亢肌病骨骼肌运动终板乙酰胆碱酯酶活性,改善骨骼肌运动终板超微结构。

骨骼肌运动终板和神经纤维的酶组织化学及镀银双重显示

本文用Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ－Ｒｏｏｔ的方法显示骨骼肌（如股肌等）运动终板的胆碱酯酶（ＣｈＥ），然后进行镀银。结果发现未经镀银的运动终板胆碱酯酶呈棕红色，加硝酸银浸染的运动终板呈棕褐色与神经纤维连接。此方法简便、易行，且运动终板及神经纤维显示清晰。材料和...

初步探究通咽喷雾剂对大鼠舌下神经损伤后AChE与运动终板的影响关系

目的初步探讨通咽喷雾剂对大鼠舌下神经损伤后乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)与运动终板的影响关系。方法成年Wistar雄性大鼠45只随机分为3组,即空白组、模型组、药物组各15只。空白组仅暴露神经,模型组和药物组暴露舌下神经后给予钳夹损伤造模,药物组于口咽部给通咽喷雾剂1 ml,空白组和模型组给等量的生理盐水。各组分别于造模前(0 min)、干预处理后第1 min及第10 min3个时间点测试阈强度、单收缩幅度、潜伏期作为电生理观察指标。后处死大鼠取双侧舌肌组织分别制作氯化金压片观察神经纤维和冰冻切片并经乙酰胆碱酯酶染液染色后测AChE的含量。结果 (1)舌肌收缩能力:阈强度空白组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且模型组阈强度较空白组增大;干预10 min后,单收缩幅度空白组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01),且模型组单收缩幅度小于空白组;且各时间点药物组与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组的潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。(2)光学显微镜下观察运动终板与模型组比较,各组的运动终板形态和数量差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)AChE光密度值:与模型组比较,镜下空白组AChE阳性分布区域分布多,着色深;空白组的光密度值与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);药物组与模型组比较差别不大。结论 (1)通咽喷雾剂在舌下神经损伤初期可能通过增大组织阈强度,降低单收缩幅度,降低AChE含量从而影响舌肌细胞兴奋性。(2)对潜伏期及运动终板影响不大。(3)通咽喷雾剂对舌下神经损伤模型大鼠初期的舌肌收缩能力及AChE和运动终板形态影响不大,提示该药对舌下神经损伤早期运动传出途径作用不明显。通咽喷雾剂可能通过感觉传入途径或其他机制发挥作用。

铜缺乏奶牛神经递质酶的组化特征

为探讨钥缺乏对奶牛大脑、小脑及脊健乙酰胆碱醋酶（A CHEase）组化特征（分布特点氛及活性）的影响，本实验选择铜缺乏症高发区自然发病的奶犊牛6头，剖杀后采集大脑、小脑、脊髓作冰冻切片及酶组化染色，以6头同年生健康扔犊牛为对照。实验结果表明，发病奶牛大脑、小脑及脊髓中ACHEase计数值均显著低于对照组奶牛（P< 0．05）；除大脑外，铜缺乏奶牛奋健上小脑中ACHEase的扫描值也显著低于对照组（P< 0 ．05）；发病奶牛组织中ACHEase酶颖粒的分布也发生特征性的变化。结论：神经递质酶活性的改变是导致奶牛铜缺乏症病理过程的重要原因。

雪旺细胞对脊髓损伤后运动终板保护作用的实验研究

目的 观察脊髓损伤后雪旺细胞移植对运动终板的保护作用。方法 培养纯化并S100鉴定雪旺细胞。70只Wistar大鼠分别分为对照组、单纯损伤组、损伤加移植细胞组,移植细胞时间分别为伤后1小时、4小时、8小时、12小时、24小时,每组分别伤后1周、4周及8周取材。评定细胞移植后存活率及测定脊髓组织LDH值,并对腓肠肌运动终板行ACh E和CGRP免疫组化染色,测定表达量。结果 雪旺细胞第4代时纯度为95.3%,移植不同时间存活率无统计学差异（P〉0.05）,早期移植雪旺细胞LDH值有明显下降并且伤后8~12小时为早期时间窗,损伤加移植细胞组相比单纯损伤组在伤后1周、4周及8周ACh E及CGSP组织化学显示运动终板染色较深（P〈0.05）。结论 雪旺细胞早期移植可以保护脊髓损伤后运动终板,可能通过减少LDH的释放起作用。

重症肌无力被动转移小鼠腓肠肌运动终板的形态学研究

目的:观察重症肌无力(MG)小鼠腓肠肌运动终板的形态学变化,并改良运动终板处光镜及电镜下的制作方法。方法:采用AChR单克隆抗体mAb35腹腔注射C57BL/6幼年小鼠,建立MG被动转移模型。采用Karnovsky-Roots法行乙酰胆碱酯酶组织化学染色,并在电镜下观察小鼠腓肠肌运动终板超微结构处形态学改变。结果:小鼠注射mAb35后出现肌无力症状与MG患者表现相似;Karnovsky-Roots法染色后可见沿神经末梢分布的运动终板;实验组腓肠肌运动终板处超微结构发生病理改变,此种改变符合MG神经肌接头处运动终板的病理改变。结论:Karnovsky-Roots法显示乙酰胆碱酯酶简便、经济;而电镜检查是确定PTMG模型运动终板超微结构有无病理改变的最佳方法。二者结合可为今后有关MG运动终板的病理研究提供一种可靠的方法。

铜缺乏奶牛神经递质酶的组化特征

为探讨铜缺乏对奶牛大脑、小脑及脊髓乙酰胆碱酯酶(ACHEase)组化特征(分布特点及活性)的影响,本实验选择铜缺乏症高发区自然发病的奶犊牛6头,剖杀后采集大脑、小脑、脊髓作冰冻切片及酶组化染色,以6头同年生健康奶犊牛为对照。实验结果表明,发病奶牛大脑、小脑及脊髓中ACHEase 计数值均显著低于对照组奶牛(P<0.05);除大脑外,铜缺乏奶牛脊髓上小脑中ACHEase的扫描值也显著低于对照组(P<0.05);发病奶牛组织中 ACHEase 酶颗粒的分布也发生特征性的变化。结论:神经递质酶活性的改变是导致奶牛铜缺乏症病理过程的重要原因。

脊髓重建管对T8损伤大鼠后肢运动终板的调节与维持

目的观察大鼠脊髓损伤后及脊髓重建管诱导脊髓再生修复过程中后肢骨骼肌运动终板形态结构与不同类型肌纤维终板区乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化情况。方法43只成年Wistar大鼠随机分为脊髓T8单纯损伤组(Cx组)、脊髓T8损伤+脊髓重建管移植修复组(CxTp组)和正常对照组(Co组),术后2周、4周、3个月、6个月、12个月经灌注固定后取出大鼠双下肢腓肠肌、比目鱼肌和趾长伸肌,分别用氯化金染色(压片法)观察运动终板结构形态和Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE的变化。结果Cx组和CxTp组大鼠术后运动终板结构形态与AChE活性均发生改变。Cx组终板自术后3个月起发生明显的退行性改变,AChE活性亦呈线性下降;CxTp组终板结构与形态相对稳定,没有退变迹象,术后3个月起AChE活性显著高于同时间点Cx组。结论大鼠脊髓损伤后,运动终板发生进行性退变,脊髓重建管移植修复可以阻止终板的退行性变,使其向着利于神经康复的方向发生着AChE的复活与结构形态的可塑性变化。