经典H-2分子mRNA探针的制备及在C57小鼠中枢神经系统原位杂交中的应用

目的:研究经典H-2基因在C57小鼠中枢神经系统中的表达谱,设计合成地高辛标记的经典H-2mRNA探针。方法:利用PCR扩增出针对经典H-2分子的特异性保守片段,然后将PCR产物纯化后与pGEM-T Easy载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中。测序后获得目的基因的单克隆,扩增并提取质粒,采用体外转录的方法合成地高辛标记的经典H-2 mRNA的正、反义RNA探针。运用原位杂交方法分析经典H-2基因在C57小鼠中枢神经系统中的表达情况。结果:成功构建了321 bp经典H-2 mRNA的正、反义探针,原位杂交方法检测到经典H-2 mRNA在出生后15 d小鼠中枢神经系统中反义探针有杂交信号,正义探针无杂交信号。结论:正义探针无杂交信号表明合成的321 bp经典H-2 mRNA反义探针具有特异性。