黄芪甲苷对高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响。【方法】将HTR-8/SVneo细胞分为4组:对照组(未处理)、高糖组(高糖刺激)及黄芪甲苷50、100μmol/L组(高糖刺激+黄芪甲苷)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,分别采用Transwell实验和划痕实验测定细胞侵袭、迁移能力,Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)双荧光染色评估细胞焦亡情况,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶剪切体(cleaved-Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-NT)、白细胞介素18(IL-18)蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞活力显著降低,细胞迁移率显著降低,侵袭细胞数显著减少,PI阳性细胞比例显著增加,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);与高糖组比较,黄芪甲苷处理组细胞活力显著升高,细胞迁移率显著增加,侵袭细胞数显著增加,PI阳性细胞比例显著下降,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著下降(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的HTR-8/SVneo细胞焦亡,改善细胞侵袭及迁移能力。

单增李斯特菌感染人绒毛膜滋养层细胞比较蛋白质组学研究

目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的探讨Src同源物2磷酸酶2(SHP-2)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SHP-2在子痫前期(PE)组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞(HTR-8/SVneo)增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点。

miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响

目的探讨miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响。方法人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白组(HTR-8/SVneo细胞正常培养)、低氧组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养)、miR-30c-5p mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p mimics)、NC-mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-mimics)、miR-30c-5p inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p inhibitor)、NC-inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞miR-30c-5p表达;Transwell小室检测细胞侵袭数目;划痕试剂盒检测细胞划痕愈合率;相关试剂盒检测ROS水平;免疫印记检测PEG10、Parkin、PINK1蛋白水平。结果空白组、低氧组、miR-30c-5p mimics组、NC-mimics组、miR-30c-5p inhibitor组及NC-inhibitor组的miR-30c-5p表达分别为1.00±0.00、1.00±0.00、1.61±0.15、1.03±0.13、0.75±0.08及0.96±0.10,差异有统计学意义(F=45.750,P<0.05);与空白组相比,低氧组HTR-8/SVneo细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧组与NC-mimics组、NC-inhibitor组比较上述指标,差异均无统计学意义(P>0.05);与低氧组相比,miR-30c-5p mimics组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05),miR-30c-5p inhibitor组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1升高,ROS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-30c-5p可加快低氧状态下的人绒毛滋养层细胞侵袭及迁移,并通过促进线粒体自噬降低ROS表达,机制与抑制PEG10水平相关。

CircPVT1在子痫前期中的表达意义及其对胎盘绒毛外滋养层细胞的功能影响和作用机制

目的探究环状RNA PVT1(circPVT1)在子痫前期(preeclampsia,PE)患者胎盘组织中的表达及临床意义,并探究circPVT1对胎盘绒毛外滋养层(extravillous trophoblasts,EVTs)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响以及其可能的分子机制。方法选取子痫前期(PE组)和健康孕妇(Con组)各30例作为研究对象,qRT-PCR检测2组胎盘组织中circPVT1的表达;CCK-8增殖实验、细胞划痕实验和transwell实验检测circPVT1对EVTs细胞功能的影响;利用生物信息学分析、双荧光素酶报告实验和挽救实验等确定circPVT1在EVTs细胞中潜在的作用机制。结果胎盘组织中circPVT1表达与孕妇收缩压、舒张压和尿蛋白呈负相关(r=-0.630、r=-0.608、r=-0.679,均P<0.01),与孕妇分娩孕周和新生儿出生体重呈正相关(r=0.449、r=0.435,均P<0.01);与Con组胎盘组织相比,circPVT1在PE组胎盘组织中表达量显著下降(P<0.05);过表达circPVT1可促进EVTs的增殖、侵袭和迁移,反之,干扰circPVT1表达后EVTs的增殖、侵袭和迁移能力均降低(均P<0.05);circPVT1可直接与miR-145-5p结合,通过Wnt/β-catenin通路促进EVTs细胞增殖和侵袭。结论circPVT1与子痫前期发生及妊娠结局相关,可能通过调控miR-145-5p/Wnt/β-catenin信号通路促进EVTs细胞增殖、迁移和侵袭,参与子痫前期发生。

miR-517在子痫前期患者胎盘外泌体中的表达及其对滋养层细胞侵袭与T细胞增殖的影响

目的 探讨在子痫前期(PE)患者的胎盘组织与胎盘外泌体中微小RNA-517(miR-517)的表达及其对滋养层细胞侵袭与T细胞增殖的影响。方法 收集2020年5月至2021年5月于海南医学院第二附属医院确诊为PE的患者50例(PE组)和50例健康孕产妇(NP组)的胎盘绒毛组织和外周血,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组胎盘绒毛组织中miR-517的表达差异;分离外周血中的胎盘外泌体,采用透射电子显微镜(TEM)与纳米示踪技术(NTA)分析外泌体形态、大小分布及浓度,蛋白质印记法(Western blot)检测外泌体标志性蛋白CD63、肿瘤易感基101(TSG101)和胎盘特异性蛋白胎盘碱性磷酸酶(PLAP)的表达;体外培养人绒毛滋养层细胞HTR-8与人T细胞系Jurkat T细胞,将过表达miR-517的miR-517 mimic与阴性对照序列miR-NC转染至上述细胞中,并按细胞处理方式的不同将HTR-8与Jurkat T细胞各分为5组:对照组、miR-517 mimic组、miR-NC组、NP-外泌体组、PE-外泌体组;qPCR检测各组HTR-8或Jurkat T细胞中miR-517的表达水平,CCK-8检测其增殖能力;Transwell检测各组HTR-8细胞的侵袭能力。结果 与NP组比较,PE组胎盘组织与胎盘外泌体中miR-517的表达均明显降低(P<0.05),且胎盘外泌体具有典型的圆盘状或新月形的双层膜结构,颗粒直径在30~150 nm, CD63、TSG101、PLAP表达升高(P<0.05);与对照组比较,miR-517 mimic组与NP-外泌体组中miR-517表达和HTR-8细胞增殖及侵袭能力均明显升高(P<0.05),Jurkat T细胞的增殖能力却明显降低(P<0.05),miR-NC组均无明显改变(P>0.05),PE-外泌体组中miR-517水平无明显差异(P>0.05),但HTR-8细胞增殖及侵袭能力均降低(P<0.05),而Jurkat T细胞的增殖能力却明显升高(P<0.05)。与NP-外泌体组比较,miR-517 mimic组中miR-517表达和HTR-8细胞增殖、侵袭能力均明显升高(P<0.05),而Jurkat T细胞的增殖能力却降低(P<0.05),PE-外泌体组中miR-517表达和HTR-8细胞增殖、侵袭能力均明显降低(P<0.05),但Jurkat T细胞的增殖能力却升高(P<0.05)。结论 在PE患者胎盘组织与胎盘外泌体中表达下调的miR-517可能通过调控滋养层细胞侵袭与T细胞增殖参与影响PE的发生与发展。

高糖环境下PLGF基因沉默对人绒毛膜外滋养细胞增殖、迁移及侵袭及Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的探究高糖环境下胎盘生长因子(PLGF)基因沉默对人绒毛膜外滋养细胞(EVCT)的影响。方法体外培养HTR-8/SVneo细胞,将细胞分为对照组(不做处理)、空载组(空载质粒转染)及PLGF沉默组(PLGF双切口酶质粒转染)。CCK-8法、划痕实验及Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移、侵袭能力;q RT-PCR及Western blot检测各组细胞PLGF、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达情况。结果对照组与空载组细胞增殖抑制率、划痕愈合率、侵袭细胞数比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PLGF沉默组细胞增殖抑制率升高,划痕愈合率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。对照组与空载组PLGF、Nrf2及HO-1 m RNA及蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PLGF沉默组PLGF、Nrf2及HO-1m RNA及蛋白表达量降低(P<0.05)。结论高糖环境下PLGF基因沉默能够抑制EVCT增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制Nrf2/HO-1信号通路活性有关。

缺氧/复氧经DNA甲基转移酶途径减弱人绒毛外滋养细胞的迁移和侵袭

目的探讨缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)对人绒毛外滋养细胞(extravillous trophoblast,EVT)侵袭能力的调控机制。方法体外培养EVT永生化细胞系HTR-8/SVneo、早孕胎盘绒毛分离的原代EVT细胞和绒毛外植体,1%O2和20%O2浓度转换条件下模拟EVT细胞侵入子宫时的H/R环境,Western blot、免疫荧光技术检测细胞侵袭等关键因子的表达,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。结果经H/R诱导后,HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力减弱,体外培养的绒毛外植体的外延能力和分离的原代EVT细胞迁移、侵袭能力均减弱;H/R条件下,HTR-8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9,整合素integrin-β1和integrin-α5蛋白水平降低(P<0.05),DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)的蛋白表达亦下调(P<0.01);H/R条件下,原代EVT细胞中上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的正调控因子Slug、Snails等被抑制(P<0.05),上皮细胞标志因子E-cadherin表达上升(P<0.01),MMP-2和-9、integrin-β1和-α5蛋白水平下降(P<0.05),细胞侵袭能力下降并伴随DNMT1、DNMT3A的表达下降(P<0.05)。HTR-8/SVneo细胞中过表达DNMT1、DNMT3A和DNMT3B可促进间质型标志因子N-cadherin、MMP-2和-9的蛋白表达上调(P<0.05)。结论H/R通过DNMTs调控MMP-2/9等EMT相关因子的表达从而减弱EVT细胞迁移和侵袭能力。

氯化钴模拟法构建绒毛外滋养细胞缺氧模型

目的:探讨适宜的绒毛外滋养细胞(EVT)化学性缺氧模型。方法:选取2022年4月至2023年1月在广西医科大学第一附属医院妇科选择人工流产的正常孕妇(6~9孕周)的绒毛组织,分离和培养原代EVT,利用免疫细胞化学进行纯度鉴定。利用氯化钴(CoCl_(2))构建细胞缺氧模型,CCK-8实验检测不同浓度(0、50、100、150、300μmol/L和600μmol/L)CoCl_(2)在不同时间(6、12、24h和48h)对原代EVT细胞存活率的影响,实时荧光定量聚合酶链反应实验(RT-qPCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达。结果:成功分离和培养原代EVT。EVT的细胞存活率与CoCl_(2)浓度和缺氧时间有关。相对于对照组(0μmol/L),0~150μmol/L浓度组细胞存活率下降不明显;300μmol/L浓度组作用24h后对细胞生长明显抑制。600μmol/L浓度组的细胞毒性作用出现最早,24h后细胞基本全部死亡。150μmol/L CoCl_(2)缺氧6、12、24、48h各组的HIF-1α mRNA相对表达量分别是对照组(0h)的0.50倍、0.64倍、1.45倍和3.00倍。缺氧时间24h, 50、100、150μmol/L CoCl_(2)各组的HIF-1α mRNA相对表达量分别是对照组(0μmol/L)的1.23倍、1.28倍、1.58倍。结论:CoCl_(2)可用于构建原代EVT的化学性缺氧细胞模型,综合CoCl_(2)的细胞毒性作用及HIF-1α mRNA表达水平,CoCl_(2)的适宜作用浓度是150μmol/L,作用时间是24h。

METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/AKT信号通路蛋白的调控作用

目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达,并分析METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法选择行剖宫产分娩的PE产妇15例、行剖宫产分娩的正常产妇15例。收集PE产妇及正常产妇胎盘组织,采用qRT-PCR法检测METTL3 mRNA表达水平。取人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo,分为空白对照组、空载对照组和过表达METTL3组,空白对照组正常培养,空载对照组感染阴性对照慢病毒,过表达METTL3组感染过表达METTL3慢病毒。采用CCK-8法观察三组细胞增殖能力,Tran⁃swell实验观察细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平。结果与正常产妇胎盘组织相比,PE产妇胎盘组织METTL3 mRNA表达水平升高(P均<0.01)。与空白对照组以及空载对照组相比,过表达METTL3组细胞增殖活力降低,细胞迁移数量、细胞侵袭数量减少,细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平降低(P均<0.01)。空白对照组与空载对照组上述指标比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论PE患者胎盘组织中METTL3表达升高;METTL3可能通过调控PI3K/AKT信号通路影响人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展。

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的:探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法:在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果:与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平下降(P<0.01),细胞Notch1蛋白表达升高(P<0.001),细胞的迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.05)以及细胞的管状形成能力(P<0.01)增强。结论:miR-30c-5p能够通过抑制Notch1的表达降低人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成能力,参与子痫前期的发病。

人早孕期蜕膜和绒毛外滋养层细胞的免疫组织化学研究

侵入蜕膜组织的绒毛外滋养层细胞在HE染色标本上不易辨认。我们用免疫组织化学,ABC法,过氧化物-抗过氧化物酶标记蜕膜组织中的hCG与hPL阳性细胞。结果证明,子宫内膜中只要有一个绒毛外滋养层细胞存在就能被显示出来。这对提高妊娠诊断,防止残留滋养层细胞的增生与恶性病变很有意义。我们在蜕膜组织中还发现3类胎盘激素阳性细胞:hCG阳性细胞,hPL阳性细胞及hCG与hPL均为阳性的细胞。这一发现,证明了蜕膜有内分泌功能。

PEG10对人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞增殖和凋亡影响的初步研究

目的初步研究父系表达印记基因PEG10低表达对人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞增殖和凋亡的影响。方法构建4组PEG10干扰载体[si-898、si-1854、si-1951及对照(si-NC)],然后转染到HTR-8/Svneo细胞株并进体外培养,si-NC组为对照组。流式细胞术检测HTR-8/Svneo细胞的细胞周期和细胞凋亡,qRT-PCR检测Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax及Cyclin D1 mRNA的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力。结果与对照组比较,转染3组siRNA片段均能显著抑制PEG10基因的表达(P<0.05),其中si-898、si-1854抑制作用更显著(P<0.01)。转染si-898或si-1854的HTR-8/Svneo细胞Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax mRNA的表达显著升高(P<0.01),而Cyclin D1 mRNA的表达显著降低(P<0.05),并且细胞凋亡率也显著高于对照组(P<0.05)。MTT法检测细胞增殖活力显示,与对照组相比,干扰PEG10基因后细胞在48 h和72 h的增殖活力也显著降低(P<0.05)。流式细胞术检测显示,干扰PEG10基因后细胞周期阻滞在G1期。结论干扰PEG10基因能诱导人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞凋亡,降低细胞增殖活力,阻止细胞周期从G1期到S期的转化进程,导致细胞周期阻滞。

人绒毛膜滋养层细胞的体外培养

目的 培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法 胰蛋白酶、胶原酶消化绒毛组织 ,进行原代培养 ,胰蛋白酶消化法传代培养 ,光镜、免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果 原代培养滋养层细胞 3h后开始贴壁 ,18h后全部贴壁 ,3天可传代 ,角蛋白、波形蛋白染色细胞纯度达 95 %以上。结论 胰蛋白酶、胶原酶消化法简便易行 ,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞 ,建立了稳定的人类绒毛膜滋养层细胞体外培养体系。

枸杞多糖对BaP诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响

目的 研究枸杞多糖对苯并芘(BaP)诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响和机制。方法 用BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞,以枸杞多糖干预,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测细胞中MMP-9、Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。用p65激活剂处理人绒毛膜滋养层细胞,探讨p65激活剂对枸杞多糖影响人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的作用。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率升高,细胞侵袭能力下降,细胞中Bax、p65蛋白表达升高(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,枸杞多糖各剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭能力增强(P<0.05),Bax、p65蛋白表达降低(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),并呈剂量依赖性。p65激活剂可以逆转枸杞多糖对BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的影响。结论 枸杞多糖具有拮抗BaP诱导的人绒毛膜滋养层细胞凋亡,促进细胞侵袭的作用,其机制可能与p65有关。

绒毛外滋养层细胞的功能及其内分泌调节机制

妊娠是一个复杂而精细的过程。在妊娠早期囊胚着床之后，胎盘绒毛外滋养层细胞（extravillous trophoblast，EVT）向子宫蜕膜层和肌层血管进一步侵袭、迁移、分化，启动并完成血管重塑，是建立母．胎循环的关键环节。因此EVT细胞的迁移和侵袭功能是保证血管重塑和妊娠顺利完成的基本要素。而EVT细胞的增值、迁移和侵袭功能受到体内微环境因素，如胎盘细胞分泌的人绒毛膜促性腺激素、孕酮、雌二醇和瘦素等的精细调节。EVT细胞侵袭性迁移不足，可导致子宫螺旋动脉重塑不足，与流产、先兆子痫等妊娠相关疾病密切相关。因此，明确EVT细胞侵袭性迁移的调节机制将为预防与治疗上述疾病提供莺要依据。本文就EVT细胞的功能及其内分泌调节机制加以综林。

PLAC8对早期胎盘绒毛外植体滋养层细胞侵润和迁移的影响

目的:探讨胎盘特异蛋白8(placenta special gene 8,PLAC8)拮抗早期胎盘绒毛外植体滋养层细胞的黏附和迁移能力。方法:培养早期胎盘绒毛外植体滋养层细胞HTR8/SVneo,传至第3代采用表面抗原鉴定,采用Transwell体外黏附和迁移实验检测早期胎盘绒毛外植体滋养层细胞HTR8/SVneo体外黏附和迁移能力,并运用PLAC8、胞内信号传导趋化因子[基质细胞衍生因子-1(SDF-1α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)]及其特异性阻断剂(AMD3100、SB203580)干预HTR8/SVneo,以明确HTR8/SVneo体外黏附和迁移的相关机制。结果:Transwell结果显示,与0.000 mg/m L PLAC8相比,0.001、0.010、0.050、0.100 mg/m L PLAC8干预不同时间早期胎盘绒毛外植体滋养层细胞体外迁移率加强(P<0.05)。SDF-1α、MCP-1的最佳浓度为0.100 mg/m L,第7 d,与模型组、对照组比较,HTR8/SVneo在SDF-1α、MCP-1诱导下表现出较强的黏附和迁移能力(P=0.028);第14 d、第21 d干预组与模型组和对照组比较,黏附和迁移能力差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PLAC8具有拮抗早期胎盘绒毛外植体滋养层细胞的黏附和迁移的能力,拮抗早期胎盘绒毛外植体滋养层细胞黏附和迁移过程中存在不同时相的特征。

枸杞多糖对体外培养的人绒毛膜滋养层细胞影响的免疫细胞化学研究

枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)是从枸杞子中提取的有效成分。近年来的研究表明 LBP 能提高机体免疫力,可有效地抗氧自由基、防止胸腺细胞凋亡、保护睾丸细胞免受较高温度的损伤等作用。临床中枸杞子也常被用于与其他药物配伍辨证治疗男女不孕症等。本研究将 LBP 引入绒毛膜滋养层细胞培养,旨在观察 LBP 对早期绒毛膜滋养层细胞的生长及对人绒毛膜促性腺激素(hCG)分泌的影响,为 LBP 的临床及实验室应用提供有参考价值的实验依据。材料与方法1 材料绒毛组织取自正常妊娠6～8周人工流产材料,由南京医科大学附属医院门诊提供。LBP 购自宁夏中药厂。

microRNA125a-3p对滋养层细胞功能的调控作用及机制

目的观察microRNA125a-3p(miR-125a-3p)在滋养层细胞中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖、侵袭和凋亡的调控及机制。方法荧光实时定量PCR检测人滋养层细胞系HTR-8/SVneo、绒癌细胞系JAR和JEG-3中miR-125a-3p的表达情况。以HTR-8/SVneo和JEG-3细胞为实验对象,分为3组:空白对照组(CK组),未做任何处理;阴性对照组(NC组),转染NC-inhibitor;实验组(inhibitor组),转染miR-125a-3p inhibitor。以Transwell、流式细胞仪、CCK8法分别检测细胞的侵袭、凋亡及增殖能力。Western blot检测Fyn蛋白表达情况及ERK1/2、STAT3磷酸化水平。荧光实时定量PCR检测Fyn mRNA水平,免疫共沉淀法检测Fyn活性水平。结果miR-125a-3p mRNA表达水平在HTR-8/SVneo、JAR和JEG-3细胞中依次降低,两两比较均有统计学差异(P<0.01)。抑制HTR-8/SVneo和JEG-3中miR-125a-3p后,细胞的凋亡水平明显降低,侵袭和增殖能力均明显升高(P<0.05);Fyn mRNA和蛋白的表达及活性水平均明显升高(P<0.05);ERK1/2及STAT3的磷酸化水平均不同程度增加(P<0.05)。结论本研究首次在滋养层细胞中检测到miR-125a-3p的表达。miR-125a-3p通过作用于Fyn和ERK1/2-STAT3信号通路可抑制滋养层细胞的增殖、侵袭,促进其凋亡。

枸杞多糖对体外培养人绒毛膜滋养层细胞的影响

枸杞多糖对体外培养人绒毛膜滋养层细胞的影响王燕蓉卢小东徐晶芬（宁夏医学院组胚教研室）（南京医科大学组胚教研室）枸杞多糖（ＬＢＰ）具有抗衰老，增强机体ＳＯＤ活性，防止细胞膜损伤，增强免疫功能的作用。我们利用体外培养方法观察了ＬＢＰ对人早期绒毛细胞生长及...