雷帕霉素对绒癌JEG-3细胞株的影响

用雷帕霉素对人绒癌层细胞株JEG-3进行处理,探讨其对JEG-3的作用。分别采用MTT法、流式细胞术、Transwell技术检测雷帕霉素处理前后JEG-3细胞在增殖、凋亡和侵袭能力的改变。结果显示雷帕霉素对绒癌细胞的增殖、侵袭能力起着抑制作用,并对凋亡起促进作用。

TGF-β_1对绒毛膜癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基质金属蛋白酶抑制剂-1蛋白表达的影响

目的:观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对绒毛膜癌JEG-3细胞系基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinases,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达的影响。方法:体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同浓度及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,Western Blotting法检测MMP-9、TIMP-1蛋白的表达变化。结果:与对照组相比,100、200μg/L TGF-β1作用后,检测各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加(P<0.01);与0h比较,12、24、48、72h各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加(P<0.05),且各组MMP-9/TIMP-1大于1。结论:绒癌的浸润转移与MMP-9及TIMP-1的表达变化密切相关。

RNA干扰技术抑制EMMPRIN表达对人绒癌细胞JEG-3侵袭性的实验研究

目的研究RNA干扰技术抑制人绒癌JEG-3细胞EMMPRIN的表达,探讨EMMPRIN在滋养细胞侵袭行为中的作用。方法设计、体外化学合成靶向EMMPRIN的短发夹状双链RNA(shRNA),分别与脂质体LipofectamineTM2000结合后转染体外培养的人绒癌细胞系JEG-3。分为A实验组:每组中加入1μg重组质粒和5μl阳离子脂质体Metafectene;B阴性对照组:只加5μl脂质体转染试剂;C无关对照组(无关dsRNA对照组,载体试剂盒自带)。三组细胞孵育48h后,Western blot和RT-PCR技术检测EMMPRIN蛋白和mRNA的表达,明胶酶谱测定MMP2,9的表达。结果RNA干扰技术可以显著的靶向抑制EMMPRIN基因在人绒癌细胞中的表达,与B组和C组相比,A组细胞EMMPRIN蛋白和EMMPRINmRNA表达分别减少了75.2%和62.3%(P<0.01);B、C组EMMPRIN蛋白和EMMPRIN mRNA表达分别减少了3.3%、2.4%和3.2%、1.8%(P>0.05);A组细胞在转染后的12,24,36,48小时MMP2的分泌分别下降了13.5%,29.6%,58.3%和66.6%;MMP9的分泌分别下降了10.7%,33.8%,47.5%和62.6%,相邻组间比较差异显著(P<0.05)。结论EMMPRIN与滋养细胞的侵袭功能密切相关,抑制滋养细胞中EMMPRIN的表达可以抑制滋养细胞的侵袭。