冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3(CRTC3)及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性。方法选取2021年6月—2023年6月本院收治的154例冠心病患者为研究组,根据颈动脉粥样硬化程度分为轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组;另选取154例同期健康体检者为对照组。采用Pearson法分析血清CRTC3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化指标的相关性。结果研究组血清CRTC3、丙二醛(MDA)、颈动脉斑块面积和中层内膜厚度(IMT)高于或大于对照组,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组血清CRTC3、MDA、颈动脉斑块面积和IMT依次升高或增大,SOD、GSH-Px水平依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清CRTC3、MDA水平与颈动脉斑块面积、IMT呈正相关(P<0.05),SOD、GSH-Px与颈动脉斑块面积、IMT呈负相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,CRTC3、SOD、MDA和GSH-Px联合诊断重度颈动脉粥样硬化的曲线下面积(AUC)为0.990(95%CI:0.982~0.998),灵敏度为96.27%,特异度为76.28%。4项指标联合诊断的价值高于各指标单独诊断,差异有统计学意义(Z_(联合-CRTC3)=2.723,Z_(联合-SOD)=2.698,Z_(联合-MDA)=2.673,Z_(联合-GSH-Px)=2.803,P均<0.05)。结论冠心病患者血清CRTC3、MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px水平显著降低;血清CRTC3、氧化应激水平均与颈动脉粥样硬化密切相关。

灯盏花素通过转录因子cAMP反应元件结合蛋白磷酸化促进细胞自噬保护心肌细胞缺血-再灌注损伤的机制研究

背景心肌缺血-再灌注(ischemia-reperfusion injury,I/R)损伤是心肌梗死血流再灌注后出现的常见临床问题,自噬在心肌I/R损伤过程中的作用机制尚不完全明确。目的研究灯盏花素在保护心肌缺血再灌注损伤过程中通过转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)促进自噬减轻细胞损伤的机制。方法在50μmol/L灯盏花素为最佳应答浓度的基础上进行实验。实验分为正常对照(Vehicle)组、I/R组、灯盏花素处理(Scu+I/R)组和CREB抑制并灯盏花素处理(KG501+Scu+I/R)组。通过糖氧剥夺培养方式建立小鼠心肌细胞I/R损伤模型,MTT法测定细胞活力;生化法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平;RT-PCR测定线粒体内膜融合蛋白1(optic atrophy 1,Opa1)和线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)表达;Western blot测定LC3、CREB和磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP response element binding protein,p-CREB)表达。结果MTT测定发现:相比于其他浓度,50μmol/L灯盏花素可显著增加细胞活力,使I/R损伤心肌细胞SOD表达增加(P<0.01),MDA表达减少(P<0.01),LDH表达减少(P<0.01),ATP表达增加(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.05),Drp1 mRNA表达减少(P<0.01),Opa1 mRNA表达增加(P<0.01),p-CREB/CREB比值增加(P<0.01)。CREB抑制剂(KG-501)可显著降低灯盏花素处理组的ATP、Opa1 mRNA表达(P均<0.01),使LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低(P<0.05),细胞活力降低(P<0.01)。结论灯盏花素能够促进缺血心肌细胞自噬,缓解氧化损伤,提高心肌细胞活力。在保护心肌缺血-再灌注损伤过程中,灯盏花素可能通过CREB通路调节自噬作用。

奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调控耐药性癫痫大鼠海马内脑源性神经营养因子的表达

背景:耐药性癫痫的形成机制尚不清楚,其中环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB)及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在耐药性癫痫形成过程中的作用已被广泛研究。目的:使用慢病毒转染法调控正常大鼠海马CREB表达水平,探究其对耐药性癫痫形成过程及海马内BDNF表达的影响。方法:使用过表达慢病毒或干扰慢病毒调控大鼠海马中CREB表达水平,检测病毒转染结果;大鼠注射病毒7 d后构建氯化锂-匹罗卡品癫痫模型,随后使用苯妥英钠和苯巴比妥进行耐药性筛选,筛选出耐药性癫痫大鼠,分为过表达组、过表达对照组、干扰组、干扰对照组,观察筛药过程中大鼠癫痫发作次数变化,使用蛋白质免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测大鼠海马中CREB及BDNF表达水平。结果与结论:①病毒转染后14 d,大鼠海马区满布绿色荧光,病毒转染水平较好;②药筛前过表达组大鼠癫痫发作次数多于过表达对照组,干扰组大鼠癫痫发作次数少于干扰对照组;药筛后过表达组大鼠癫痫发作次数多于过表达对照组,干扰组大鼠癫痫发作次数少于干扰对照组;③过表达组大鼠CREB、BDNF表达水平高于过表达对照组,同样干扰组大鼠CREB、BDNF水平低于干扰对照组;④结果表明,调控大鼠海马内CREB表达水平会影响大鼠癫痫发作及耐药性癫痫的形成,通过调控CREB表达可能会对耐药性颞叶癫痫大鼠海马内BDNF表达水平产生影响。

微RNA-196a-1-3p靶向Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系RBE细胞增殖的关键微RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为2020年1月至2022年1月。磷酸盐缓冲液(PBS)处理为对照组,TGF-β处理为TGF-β组,TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组RBE细胞的增殖水平。miRNA高通量测序检测三组RBE细胞的miRNA调控变化,并进行miRNA模拟物过表达筛选鉴定受TGF-β调控的影响RBE细胞增殖水平的关键miRNA。miRNA数据库(miRDB)在线分析miRNA的潜在底物,并通过小干扰RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组,TGF-β组RBE细胞的增殖水平上升(1.62±0.07比2.35±0.09,P<0.05),抗体组RBE细胞的增殖水平下降(1.62±0.07比1.11±0.08,P<0.05)。过表达微RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。敲低Ras响应元件结合蛋白(RREB1)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。过表达miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1的信使RNA(mRNA)和蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1与SMAD家族蛋白3(SMAD3)的相互作用增加。敲低SMAD3后,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。与仅敲低SMAD3相比,敲低SMAD3的同时过表达RREB1的RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低SMAD3和miR-196a-1-3p的RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论TGF-β能够通过miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进RBE细胞增殖;miR-196a-1-3p和RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。

环腺苷酸反应元件结合蛋白1在肿瘤中的作用及研究进展

恶性肿瘤作为严重威胁人类健康的主要疾病之一,其病死率一直居于高位。近年来,环腺苷酸反应元件结合蛋白1(CREB1)作为一种重要的转录因子得到广泛关注。研究表明,CREB1参与多种生物学过程,且与恶性肿瘤的发生发展和不良预后密切相关。CREB1可通过直接作用于下游基因或参与不同的信号通路来调控肿瘤细胞的增殖、凋亡和转移等,可能成为潜在的肿瘤诊断和治疗靶点。本文就CREB1的结构、作用机制及其在肿瘤中的研究进展进行综述。

荧光光谱法研究亚甲基蓝与蛋白质的结合反应

应用荧光光谱法研究了水溶液中亚甲基蓝与牛血清白蛋白分子间的结合反应 ,讨论了亚甲基蓝对蛋白质内源荧光的猝灭机理 ,测定了结合常数 (KA=3 44× 10 5L·mol-1)和结合位点数 (n =1 0 3)。依据F rster非辐射能量转移 ,理论确定了授体 受体间的结合距离 (r=1 6 7nm)和能量转移效率 。

光谱法研究哈巴俄苷与人血清白蛋白的结合反应

在不同温度及模拟血液pH值条件下,采用荧光光谱法和紫外-可见吸收光谱法研究了哈巴俄苷(Harpagoside,HAR)与人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)的结合反应。结果表明,HAR有规律地使HSA内源荧光猝灭,猝灭常数随温度升高而降低,其猝灭机制为两者形成复合物而引起的的静态猝灭;不同条件下两者结合常数K_A均大于10~5L/mol,结合位点数n≈1。由Van't Hoff方程计算获得了不同条件下HAR与HSA相互作用的热力学参数,由ΔG、ΔH和ΔS均小于0可知,两者结合的主要作用力是氢键和范德华力,且两者结合是吉布斯自由能降低的自发过程。根据Frster非辐射转移理论计,计算了不同条件下HAR与HSA的结合距离r在4.01~4.28 nm范围内,表明两者结合过程发生了非辐射能量转移。同步荧光光谱表征结果表明,HAR使HSA的色氨酸和酪氨酸残基所处的微环境极性增强,疏水性减弱,导致HSA构象发生了一定程度的改变。

牛血清白蛋白与金霉素结合反应的机制研究

以光谱技术与微量热技术相结合的方法研究水溶液中金霉素与牛血清白蛋白分子间结合作用的热力学性质 .荧光猝灭法测得该反应的结合常数K =2 .0 9× 10 5L/mol,结合位点数n =1.75 ,微量法测得反应的焓变△rHm=- 17.5 0kJ/mol;依据Forster非辐射能量转移机制 ,得到授体 受体间的结合距离 (r1=1.6 7nm ,r2 =1.4 6nm)和能量转移效率 (E1=0 .4 1,E2 =0 .6 6 ) .金霉素与牛血清白蛋白分子间有较强的结合作用 ,且结合力以疏水作用为主 .

光谱法研究黄曲霉毒素B_1与人血清白蛋白的结合反应

黄曲霉毒素B1（AFB1）是目前发现的致癌能力最强的真菌毒素,严重危害人畜健康。人血清白蛋白（Human serum albumin,HSA）在结合、运输内源性和外源性等小分子物质方面具有重要的生理功能。研究AFB1与HSA的相互作用机理和作用过程,在分子毒理学上具有重要意义。本研究模拟在人体血液pH条件（pH 7.4,离子强度0.1 mol/L）,通过荧光淬灭、3D荧光法和圆二色谱（Circular dichroism,CD）等光谱方法研究AFB1与人血清蛋白的相互作用。结果表明,AFB1与HSA的内源荧光淬灭属于静态淬灭,AFB1-HSA在298,303,308和313 K4个温度条件下,结合常数均为10-4数量级,结合位点都约为1。根据Van＇t Hoff方程AFB1-HSA体系是熵增焓减的自发过程,分子间主要作用力为疏水作用和氢键。基于Forster＇s能量转移,得知AFB1与HSA结合距离为3.31 nm。竞争结合实验表明,AFB1结合在HSA的siteI位点上,靠近色氨酸Trp-214。通过3D荧光分析,AFB1的结合作用导致了HSA氨基酸残基微环境和二级构象发生变化。圆二色谱的分析结果表明,二者的结合使得HSA的α-螺旋含量增加。

埃铬青R与牛血清白蛋白的结合反应

在pH2．4含0.5％NaCl的溶液中，牛血清白蛋白（BSA）与埃铬青R（ECR）发生相互作用而导致溶液颜色发生变化。研究了这一反应体系的吸收光谱，认为BSA与ECR之间的结合力是以静电引力为主的非共价键作用力。测得这一反应的表现结合常数为5．2×105；最大结合数为38；桑德尔灵敏度指数为0．75μg／cm2。

牛血清白蛋白与酸性铬兰K结合反应的研究

本文对在酸性溶液中牛血清白蛋白与酸性铬兰K结合反应进行了研究。在pH 2 87盐酸 乙酸钠缓冲体系中 ,随着BSA浓度的逐渐增大 ,酸性铬兰K在 5 2 3nm的吸光度下降 ,吸收峰向长波方向移动。研究表明牛血清白蛋白与酸性铬兰K在通过静电引力而结合 ,结合反应符合相分配模型 ,并探讨了酸度、试剂浓度、离子强度对结合反应以及表观结合常数Kc、结合数n ,Sandell灵敏指数的影响 ,对反应时间、表面活性剂对体系的影响以及工作曲线进行了研究。

加替沙星与牛血清白蛋白的结合反应研究

应用简化的Hummel-Dreyer区带毛细管电泳方法(capillaryzoneelectrophoresis,CZE)研究了牛血清白蛋白与加替沙星分子间的结合作用机制.在位点结合模型的基础上,得到了实用的非线性模拟计算公式,在优选的实验条件下,根据模拟计算公式计算了蛋白质-药物相互作用的结合参数.

芦氟沙星与牛血清白蛋白结合反应的热力学研究

用荧光光谱和紫外 可见吸收光谱法研究了在模拟人体生理条件下 ,芦氟沙星与牛血清白蛋白的结合反应 ,发现芦氟沙星对牛血清白蛋白有较强的荧光猝灭作用 ,用Stern Volmer和Lineweaver Burk方程处理荧光猝灭数据 ,得到了反应的结合常数。

硫酸头孢匹罗与牛血清白蛋白结合反应的发光机理

在人生理条件下,利用荧光猝灭法、同步荧光法及共振光散射法,分别研究了不同温度下硫酸头孢匹罗(CPS)与牛血清白蛋白(BSA)间的结合反应。结果表明:随着CPS浓度的增加,BSA的荧光、共振散射光依次降低,其荧光猝灭为静态猝灭过程并伴随非辐射能量转移作用。反应的结合常数为104数量级,结合位点数约为1;结合位点位于BSA的亚结构ⅡA中;结合距离r<7 nm。CPS与BSA间作用力主要是静电引力;Hill系数nH<1,表明CPS有弱的负协同作用。同步荧光光谱表明CPS对BSA构象产生影响,使BSA腔内疏水环境的极性增强,疏水性减弱。

二价铜、锌离子对盐酸巴马亭与牛血清白蛋白结合反应光谱的影响研究

血清白蛋白是一种重要的运输蛋白，其与内源化合物及许多药物的相互作用已有比较广泛的研究，但尚未见到生命体中存在的多种微量元素对药物与蛋白结合作用影响的报道。我们研究了在铜、锌离子存在下，盐酸巴马亭与牛血清白蛋白结合反应的光谱特性，这对更全面地阐明小分子...

环丙沙星与牛血清白蛋白的结合反应

以光谱技术与微量热技术相结合研究了水溶液中牛血清白蛋白与环丙沙星分子间结合作用的机制 .荧光猝灭法测得该反应的结合常数 K=8.39× 104 L· mol－ 1,结合位点数 n =1.18;依据 Fō rster非辐射能量转移机制 ,得到授体-受体间的结合距离 (r=2.46 nm)和能量转移效率 (E=0.33).微量热法测得反应的焓变Δ rHm≈ 0;牛血清白蛋白与环丙沙星分子间有较强的结合作用 ,且以疏水作用为主 .

甲基紫与肝素钠结合反应的电化学研究及分析应用

应用电化学分析法研究了在pH1.5的酸性反应条件下肝素钠与甲基紫的结合反应.甲基紫在滴汞电极上有一个不可逆的还原峰,峰电位为-0.58V(vs.SCE),加入肝素钠后峰电位发生正移且峰电流下降,利用电化学方法对电极反应过程进行了研究,结果发现两者结合后生成了一种电化学活性的复合物,导致溶液的电化学参数发生了变化,求解出结合比为1∶3,结合常数为2.47×1014,对结合反应条件和电化学检测条件进行了优化,在最佳条件下峰电流的降低同肝素钠的浓度在0.2～4.0mg/L范围内呈线性关系,线性回归方程为?Ip″(nA)=-724.9+1741.4c(mg/L)(n=11,γ=0.994),检测限为0.072mg/L.将本方法应用于肝素钠样品的测定,结果令人满意.对常见干扰物质的影响进行了考察,表明本方法具有较好的选择性.

牛血清白蛋白与偶氮胂Ⅲ-镱(Ⅲ)结合反应及其应用

研究了在酸性溶液中ＢＳＡ与偶氰胂Ⅲ－镱（Ⅲ）络合物的结合反应。发现加入ＢＳＡ后偶氮胂Ⅲ－镱（Ⅲ）的吸收光谱产生减色效应和红移，探讨了实验条件对结合反应的影响。随着ＢＳＡ量的增加，６５０ｎｍ吸收峰线性下降，基于此建立了蛋白质定量分析方法，并运用于实际样品的测定，结果与紫外分光光度法测得的结果吻合。用分光光度法研究ＢＳＡ与偶氮胂Ⅲ－镱（Ⅲ）之间的结合模型，发现结合反应符合Ｓｃａｔｃｈａｒｄ模型。进一步的研究发现ＢＳＡ与阳离子表面活性剂、偶氮胂Ⅲ－镱（Ⅲ）－镱（Ⅲ）之间的作用机理相类似。

cAMP反应元件结合蛋白:抗抑郁药信号转导通路的交汇点

本文综述了参与抑郁症和抗抑郁药作用的三条信号转导通路:环磷酸腺苷(cAMP)通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、钙调蛋白激酶(CaMK)通路,以及cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)作为上述通路交汇点的研究进展,并探讨了新型抗抑郁药的可能作用靶点。