结合脂蛋白_(136-150)修饰抗原在体内外对4B.14a T细胞克隆的作用

目的 :通过研究结合脂蛋白13 6 150 (PLP13 6 150 )及其修饰抗原在体内外对T细胞克隆 4B .14a的影响 ,进一步探讨修饰抗原防治多发性硬化 (MS)的可行性。方法 :在体内 ,为模拟MS复发的临床过程 ,首先将SJL/J小鼠用X线辐射 4 5 0R ,静脉转移无分裂增殖能力的 4B .14a细胞 (1× 10 7/鼠 ) ,再用 5 0 μg/鼠PLP13 6 150 修饰抗原免疫动物 ,以触发被动实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE )。在体外观察PLP13 6 150 及其修饰抗原刺激4B .14a细胞的增殖作用和分泌细胞因子的作用。结果 :除139A、14 3A、14 4A、14 5A和 14 8A外 ,其他修饰抗原均可在体内触发 4B .14aT细胞引起被动EAE。对PLP13 6 150 和其大多数修饰抗原 ,4B .14a细胞表现为增殖反应 ,分泌炎性细胞因子 ,对 14 3A、14 4A和 14 8A刺激的反应较弱 ;139A可抑制4B .14a细胞增殖。结论 :PLP13 6 150 的某些修饰抗原在体内外对 4B .14aT细胞克隆具有不同的作用 。

血清可溶性白细胞分化抗原14、脂多糖结合蛋白水平变化对ARDS患者疾病转归的影响

目的研究血清可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)、脂多糖结合蛋白(LBP)水平变化与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者疾病转归的相关性。方法选取109例ARDS患者,按患者28 d预后结局分为生存组(n=62)和死亡组(n=47)。比较2组患者临床资料,包括性别、年龄、体重指数、原发病(外科手术、创伤、胰腺炎、肺部感染)情况、既往吸烟史、既往饮酒史、合并症(高血压、冠心病、糖尿病)情况、降钙素原水平等;比较2组入院时、入院7 d后血清sCD14、LBP水平及急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ评分);采用Logistic多因素分析影响ARDS患者疾病转归的影响因素;分析血清sCD14和LBP水平与APACHEⅡ评分的相关性(Pearson相关分析)及对ARDS患者疾病转归的预测效能(ROC曲线)。结果2组合并疾病类型、既往饮酒史对比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。入院时、入院7 d后死亡组血清sCD14、LBP水平及APACHEⅡ评分均高于生存组(均P<0.001)。ARDS患者APACHEⅡ评分与血清sCD14和LBP水平均呈正相关(r=0.575,r=0.721;均P<0.05)。Logistic多因素分析显示,血清sCD14≥42.26μg·L-1(OR=3.936,95%CI:1.482~10.452)、血清LBP≥95.61μg·mL-1(OR=3.028,95%CI:1.457~6.293)是影响ARDS患者疾病转归的独立相关因素(均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清sCD14联合LBP预测ARDS患者疾病转归的效能高于血清sCD14、LBP单独预测效能(均P<0.05)。结论血清sCD14和LBP水平是影响ARDS患者疾病转归的相关因素,血清sCD14联合LBP检测有利于ARDS早期病情诊断和预后评估。

基于16S rRNA测序分析脂多糖结合蛋白基因敲除对小鼠肠道菌群的影响

目的探究脂多糖结合蛋白基因(Lbp)敲除对小鼠肠道菌群结构的影响。方法随机选取8只Lbp^(-/-)小鼠作为Lbp^(-/-)组,8只WT小鼠作为WT组。处死小鼠,解剖后取盲肠并编号,进行16S rRNA测序,采用OTU聚类分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析、门水平和属水平差异分析等方法分别对两组小鼠肠道菌群的丰度、多样性和物种组成进行研究。结果与WT组相比,Lbp^(-/-)组小鼠在门水平上,拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度显著升高,柔膜菌门(Tenericutes)、厚壁菌门(Firmicutes)等相对丰度显著降低;在属水平上,拟杆菌属(Bacteroides)、普氏菌属(Prevotella)等相对丰度显著升高,IV梭菌属(Clostridium IV)、双歧杆菌属(Olsenella)等相对丰度显著降低。结论Lbp敲除后拟杆菌属和普氏菌属丰度显著升高,这两类菌与多种肠道炎症性疾病密切相关,这为临床检测炎症相关疾病发生发展提供参考。

脑脂结合蛋白在胶质母细胞瘤U251细胞自噬中的调节作用

目的:探讨脑脂结合蛋白(brain lipid binding protein,BLBP)在胶质母细胞瘤U251细胞自噬中的调节作用。方法:应用CRISPR/Cas9技术敲除U251细胞中BLBP的表达,检测BLBP敲除后U251细胞的活力变化;Ad-GFP-LC3b腺病毒感染U251细胞后,检测细胞中GFP-LC3b绿色荧光颗粒的数目;Western Blot检测自噬相关分子微管相关蛋白1轻链3βⅠ/Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3 betaⅠ/Ⅱ,LC3bⅠ/Ⅱ)、自噬相关基因5(autophagy-related genes 5,ATG5)、选择性自噬接头蛋白(sequestosome1,SQSTM1)的蛋白表达水平;Real-time PCR检测ATG5、SQSTM1的基因表达变化。结果:BLBP基因敲除后,U251细胞的活力明显下调,GFP-LC3b绿色荧光颗粒数目较对照组明显增多;此外,LC3bⅡ的蛋白表达水平较对照组明显增高,SQSTM1蛋白水平明显下降,而ATG5的基因和蛋白表达水平均明显上调。结论:BLBP基因敲除能提高U251细胞的自噬水平,BLBP具有调节胶质母细胞瘤细胞自噬的能力。

结合脂蛋白肽136-150修饰抗原肽与实验性变态反应脑脊髓炎

目的 观察结合脂蛋白肽 136 15 0 (PLP136 15 0 )修饰抗原肽是否具有引起脑脊髓炎(EAE)的可能性。方法 用 2 0 0 μgPLP136 15 0修饰抗原肽分组免疫SJL/J雌性小鼠 ,诱导主动EAE。对未发生主动EAE组小鼠再用已免疫抗原 5 0 μg重复接种 1次 ,继而建立短期T细胞株。用PLP136 15 0或修饰抗原肽 2 0 μg/ml分别刺激T细胞并将得到的T淋巴母细胞转移给同种小鼠 [(1～ 2 )× 10 7/鼠 ]以诱发被动EAE。结果 在 2 2个一位氨基酸被替换的修饰抗原肽中除 144A、K外 ,2 0个均成功诱发主动EAE ,一位氨基酸变异的 144A、K ,及双位 (143A/ 145A ,145A/ 148K)和三位 (139A/ 144A/ 148A)氨基酸被替换的修饰抗原虽不能引起主动EAE ,但若将这些抗原诱导、建立并刺激的T细胞株转移给同种小鼠可引起被动EAE ,而接受PLP136 15 0刺激的同种T细胞的小鼠不发生被动EAE。

脂多糖结合蛋白的分离、纯化及其多抗的制备

目的 分离纯化大鼠脂多糖结合蛋白 (LBP) ,并制备兔抗大鼠LBP多抗。方法 大鼠血清先通过硫酸铵盐析 ,再依次以Bio Rex70阳离子交换层析和MonoQ阴离子交换层析进行纯化 ,纯化产物采用SDS PAGE鉴定。用提纯的LBP免疫制备兔抗大鼠LBP的抗血清。用饱和硫酸铵盐析纯化后 ,经Westernblot鉴定其纯度。结果 分离纯化到较高纯度的LBP。用纯化的LBP免疫制备的兔抗LBP多抗与LBP具有良好的结合活性。

噬菌体展示短肽模拟脂多糖结合蛋白抗炎功能位点的研究

目的 应用噬菌体随机 12肽库筛选脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)具有抗炎作用的肽序列。方法 以LPS为目标分子 ,对噬菌体十二肽库进行亲合筛选 ,4轮筛选后 ,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性 ,对可与LBP竞争性结合LPS的噬菌体克隆行细胞因子生成抑制实验和LPS内化抑制实验 ,对获得的阳性克隆进行DNA序列测定 ,推导外源肽氨基酸序列 ,并与LBP序列比较 ,确定LBP的抗炎功能位点。结果 随机挑取的 10 0个噬菌体克隆中 16个可与LBP竞争性结合LPS ,其中 7个噬菌体克隆对LBP的增敏LPS刺激PBMC分泌TNF α功能无作用 ,对这 7个克隆进行LPS内化抑制实验 ,其中 3个克隆可以抑制LBP增强LPS内化作用。测序发现这 3个阳性克隆融合多肽的序列均为FHTRWNYWPYLH ,与LBP一级结构氨基酸序列同源性低。结论 该

肝硬化患者的内毒素和脂多糖结合蛋白水平及其与预后的关系

背景脂多糖结合蛋白(LBP)是介导脂多糖(LPS)活化单核/巨噬细胞的关键因子。尽管内毒素在慢性肝病和肝硬化中具有重要作用,但其结合蛋白在肝硬化中的意义尚不清楚。目的了解肝硬化患者的内毒素和LBP水平,并探讨其与预后的关系。方法分别以基质显色法鲎试验和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平;伴腹水患者同时测定腹水内毒素和LBP水平,并进行2个月的短期随访,记录存活情况。结果肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均显著高于健康对照者(P<0.05),其中伴腹水患者的血浆内毒素水平显著高于无腹水患者(P<0.05)。Child鄄PughC级肝硬化伴腹水患者的腹水内毒素水平显著高于B级患者(P<0.05),而B级患者的血浆LBP水平显著高于C级患者(P<0.05)。短期随访显示肝硬化伴腹水死亡患者的腹水内毒素水平显著高于存活者(P<0.05)。结论肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均升高,LBP水平升高可能是对肝硬化肠源性内毒素血症的一种持续的慢性炎症应答。腹水内毒素水平可以作为肝硬化伴腹水患者短期生存的一个预测指标。

重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究

目的 探讨重组日本血吸虫特异性极低密度脂结合蛋白 (SVLBP)的抗原性及其诊断价值。方法 SVLBP基因亚克隆入pQE - 30表达载体 ,克隆菌在IPTG诱导下表达重组蛋白 ;非变性条件下制备克隆菌裂解液 ,用亲和层析法纯化重组蛋白 ;用Westernblot鉴定其抗原性 ;纯化SVLBP重组蛋白免疫家兔获得抗血清 ;以SVLBP重组蛋白为抗原 ,ELISA法检测血吸虫感染者血清及健康人血清。结果 克隆菌在IPTG诱导下高表达SVLBP重组蛋白 ;该重组蛋白诱导家兔产生单特异抗体 ,抗体滴度为 1∶6 4 0 0 ;SVLBP重组蛋白与血吸虫病人血清有较强的反应 ;以该蛋白为抗原检测 36人份血吸虫感染者血清 ,阳性率为 83.3% ,5 0人份健康人血清 ,假阳性率为 2 % (1/5 0 ) ,10人份肺吸虫病人血清 ,1例阳性 ,交叉反应率为 10 % (1/10 )。结论 SVLBP重组蛋白有较好的抗原性 ,以该重组蛋白为抗原检测日本血吸虫病患者血清中特异性抗体 ,敏感性和特异性均较高 ,具有一定的诊断价值。

重症脓毒症患者血清脂多糖结合蛋白及其受体变化的临床研究

目的观察重症脓毒症患者血清脂多糖结合蛋白(LBP)及其受体CD 14(CD 14)的变化,探讨两者与重症脓毒症严重程度及预后的关系。方法采用酶联免疫吸附法(EL ISA)测定41例重症脓毒症患者发病后不同时间血清LBP和可溶性CD 14(sCD 14)浓度以及发病后24 h内血清前降钙素(PCT)和内毒素(LPS)浓度,并且进行相关性分析。结果重症脓毒症患者发病后各时间点血清LBP和sCD 14水平较正常对照均显著升高(P均<0.01);死亡组患者各时间点血清LBP水平与存活组间差异均无显著性(P均>0.05),而sCD 14则均较存活组显著升高(P均<0.05)。血清LBP水平与PCT、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)无显著相关性,与LPS呈显著正相关;而sCD 14与PCT、APACHEⅡ评分呈显著正相关,与LPS无显著相关性。结论重症脓毒症患者血清LBP和sCD 14浓度均显著升高,LBP仅反映机体急性炎症反应,而不能作为判断疾病严重程度及预后的指标;而sCD 14升高程度可提示预后,在一定程度上反映脓毒症的严重程度。

全身炎症反应综合征患儿血内毒素、脂多糖结合蛋白/脂多糖受体水平变化的意义

目的研究血内毒素(LPS)、脂多糖结合蛋白(LBP)/脂多糖受体(mCD14)在全身炎症反应综合征(SIRS)发生发展过程中的作用。方法随机选取SIRS患儿30例,健康对照组21例。测定二组患儿血LPS、LBP、mCD14水平,LPS采用鲎试剂动态比浊定量测定法,LBP采用酶联免疫法,mCD14采用流式细胞分析技术。结果SIRS组血浆LBP水平、外周血单核细胞mCD14平均荧光强度(MFI)、血LPS水平较对照组均显著增高(Pa<0.001),且LBP、mCD14随血LPS水平的升高而增高,二者呈明显正相关(r=0.578 Pa<0.001)。结论LPS、LBP/mCD14参与SIRS的发病过程,LPS可上调LBP/mCD14的表达,LBP/mCD14表达的上调可能是机体增敏LPS作用的分子机制。

脂多糖结合蛋白抑制肽抑制脂多糖与人单核巨噬细胞株的结合

目的:研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对脂多糖(LPS)与人单核巨噬细胞株U937细胞结合的抑制作用,从而探讨LBP抑制肽阻断内毒素信号转导通路的机制。方法:夹心ELISA检测LBP抑制肽与LPS的相对亲和力;流式细胞检测分析(FACS)异硫氰酸荧光素标记的LPS(FITC-LPS)与U937细胞的结合;ELISA检测U937细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:在相同的浓度下,LBP抑制肽与LPS的亲合力比LBP高,约为LBP的1.15倍。LPS组平均荧光强度(MFI)明显高于对照组,LBP显著增强了LPS与U937细胞的结合,促进了LPS的内在化;LBP抑制肽组MFI显著低于LBP组(P<0.01),即P12减弱了FITC-LPS与U937细胞的结合。而且P12抑制了LPS诱导的U937细胞TNF-α的生成。结论:LBP抑制肽与LPS有一定的亲和力,LBP抑制肽与LBP的致炎位点竞争结合FITC-LPS,从而抑制LPS与单核巨噬细胞的结合,阻止了LPS的内在化,并显著降低了LPS诱导的TNF-α释放。

脂多糖结合蛋白／CD14结合位点的初步定位

目的应用噬菌体随机12肽库、DNAStar分析软件、亲和实验及竞争抑制实验初步定位脂多糖结合蛋刍（lipopolysaccharide binding protein，LBP）与CD14的结合位点。方法以CD14为筛选分子，联合应用噬菌体肽库展示技术、噬菌体ELISA鉴定、LBP竞争抑制实验及DNA测序推导LBP／CD14结合位点的展示肽序列，采用DNAStar分析软件：E对所获展示肽序列与LBP一级结构，初步定位LBP／CD14结合位点并人工合成其模拟肽。采用ELISA检测该模拟肽与CD14的亲和力及与LBP的竞争抑制活性。结果DNAStar比对结果表明，经噬菌体肽库筛选获得的8条展示肽氨基酸序列与LBP第252～263位氨基酸有一定相似性。LBP第252～263位氨基酸具有结合位点的特性，即有良好的亲水性、可及性、可塑性及抗原性，该部位可能是LBP／CD14的结合位点。体外活性实验表明，模拟肽FHRNHRsPVTLL可与CD14有臭好的亲和力，有较强的与LBP竞争结合CD14的活性。结论LBP第252—263位氨基酸的模拟肽FHRNHRSPVTLL与CD14有良好的亲和力及有较强的与LBP竞争结合CD14的活性，具有LBP／CD14结合位点的生物学特性，LBP／CD14结合位点初步定位在该区域。

肝硬化并发SBP患者腹水中脂多糖结合蛋白的变化及意义

目的探讨脂多糖结合蛋白(LBP)浓度对肝硬化患者并发自发性细菌性腹膜炎(SBP)的诊断价值。方法 64例肝硬化腹水患者,其中肝硬化合并SBP 28例(A组),非感染性肝硬化36例(B组)。以酶联免疫吸附法(ELISA)法测定两组患者腹水中LBP浓度,同时完成腹水常规、血常规、肝功能、凝血象及腹部B超检查。结果 A组LBP浓度与白细胞计数均明显高于B组(P<0.05),LBP浓度、白细胞计数的试者工作特征(ROC)曲线下面积分别为0.820、0.757,LBP浓度检测和白细胞计数对SBP诊断的灵敏性分别为75.00%和67.90%。结论 LBP浓度检测对肝硬化患者并发SBP有一定的诊断价值。

不同类型认知功能障碍患者的脂蛋白结合磷脂酶A2水平

目的评价各种类型认知功能障碍患者脂蛋白结合磷脂酶A2(Lp-PLA2)的表达水平。方法研究共纳入212例疑似认知功能障碍患者,经筛选及评定后分为轻度认知功能障碍(MCI)组46例、阿尔茨海默病(AD)组58例、血管性痴呆(VD)组84例及对照组24例,测定并比较各组患者的血浆Lp-PLA2浓度,通过Cox比例风险模型分析痴呆与Lp-PLA2水平的关系。结果①MCI组的Lp-PLA2水平为(45±4)μg/L、AD组的Lp-PLA2水平为(83±15)μg/L、VD组的Lp-PLA2水平为(112±22)μg/L,均高于对照组的(34±3)μg/L,差异均有统计学意义,P<0.05。②AD组男性的Lp-PLA2水平为(93±8)μg/L,高于女性(73±13)μg/L;VD组男性的Lp-PLA2水平为(127±21)μg/L,高于女性的(97±10)μg/L,差异均有统计学意义,P<0.05。③Cox比例风险模型分析显示,高水平Lp-PLA2与认知功能障碍高风险相关,VD的相关性最高,AD次之,MCI相关性最低。结论高水平Lp-PLA2与认知功能障碍具有相关性,Lp-PLA2在AD组及VD组中具有性别差异,检测Lp-PLA2水平有助于认知功能障碍的早期诊断。

脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖与内毒素血症小鼠肺泡巨噬细胞结合的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽P12对脂多糖(LPS)与小鼠肺泡巨噬细胞(AMs)结合的抑制作用,探讨LBP抑制肽体内阻断内毒素信号传导通路的机制。方法40只小鼠随机分为5组:对照组、内毒素血症组、低剂量P12组、中剂量P12组和高剂量P12组,每组8只。腹腔内注射LPS复制内毒素血症模型,尾静脉注射P12,流式细胞检测分析(FACS)异硫氰酸荧光素标记的LPS(FITC-LPS)与AMs的结合,以平均荧光强度(MFI)表示;ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果内毒素血症组小鼠AMsMFI明显高于对照组(45.31%比4.61%,P<0.05);低剂量P12组、中剂量P12组和高剂量P12组的MFI分别为40.08%、30.76%和24.45%,低于内毒素血症组(低剂量组P>0.05,中剂量P12组和高剂量组P均<0.05)。内毒素血症组小鼠血清中TNF-α的含量显著高于对照组[(180.17±39.14)pg/mL比(24.88±5.82)pg/mL,P<0.01];低剂量P12组、中剂量P12组和高剂量P12组血清中TNF-α的含量分别为(112.69±19.78)pg/mL、(86.34±9.25)pg/mL和(70.48±8.48)pg/mL,均明显低于内毒素血症组(P均<0.05)。结论LBP抑制肽P12抑制了LPS与内毒素血症小鼠AMs的结合,显著降低了LPS诱导的TNF-α的产生。

大鼠脂多糖结合蛋白的分离纯化及对脂多糖的调节作用

经硫酸铵沉淀、Bio Rex70树脂的阳离子交换层析和MonoQ预装柱的阴离子交换层析 ,从大鼠急性期血清中分离纯化了脂多糖结合蛋白 .SDS PAGE为单一条带 ,分子量 60kD ,所纯化的大鼠脂多糖结合蛋白可明显增强脂多糖与单核巨噬细胞的结合 .脂多糖结合蛋白对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中肿瘤坏死因子α(TNF α)mRNA表达的调节作用具有明显的剂量依赖性 .

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的U937细胞TLR4的影响

目的 研究脂多糖结合蛋白 (LBP)抑制肽对内毒素 (LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞TLR4的影响。方法 佛波脂 (PMA)诱导U937成熟后分为 5组 ,即正常对照组 ;LPS组 ;低剂量抑制肽组 ;中剂量抑制肽组 ;高剂量抑制肽组。用RT-PCR和蛋白定量方法 (Westernblot)测定TLR4mRNA和蛋白的表达 ,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)的含量。结果 LBP抑制肽组TLR4的mRNA ,蛋白的OD值 ,TNF -α的浓度均较LPS组低 ,较正常组高。结论 LBP抑制肽通过抑制由TLR4介导的LPS信号跨膜转导和TNF -α的分泌 ,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。

脂多糖结合蛋白抗体对内毒素诱导的肺Ⅱ型细胞NF-κB活化的影响

目的 观察兔抗人LBP多抗对LPS诱导的肺Ⅱ型细胞NF κB活化的影响。方法 原代培养的肺Ⅱ型细胞随机被分为生理盐水对照组、LPS组、加LPS前 30min加抗体组、LPS与抗体同时加入组、加入LPS后 30min加抗体组和加LPS后 1h加抗体组 ,通过凝胶电泳迁移率改变法 (EMSA)检测肺Ⅱ型细胞NF κB的活性 ,ELISA测定细胞培养上清中TNF α和IL 6的含量。结果 与对照组相比 ,LBP抗体早期应用能显著降低LPS诱导的肺Ⅱ型细胞NF κB活性 ,并显著降低细胞培养上清中TNF α和IL 6的含量。结论 LBP抗体能抑制LPS诱导的肺Ⅱ型细胞NF κB的活化和TNF α和IL 6产生。