不同切制条件对大黄饮片中蒽醌化合物含量的影响

目的 :采用高效液相色谱法比较不同的大黄切制条件对蒽醌类化合物含量的影响。方法 :以大黄素和大黄酚为对照品 ,采用MerckC18色谱柱 (4.6mm× 2 5 0mm ,5 μm) ,甲醇 -水 -磷酸 (体积比 78.7∶2 0 .9∶0 .4 )为流动相 ,检测波长 2 5 4nm ,外标法测定了不同切制条件下得到的 18份饮片样品中游离和结合型大黄素和大黄酚的含量。结果 :从 18份样品测定的平均值来看 ,游离型大黄素和大黄酚的含量为 8.6 9mg/g ,结合型的为 4 .4 5mg/g。从切制条件来看 ,薄片、中片、厚片总蒽醌 (即游离型和结合型大黄素和大黄酚之和 )含量平均分别为 13.4 7、13.33和 12 .6mg/g ;6 0℃干燥 10 .5h、80℃干燥 6 .5h和 10 0℃干燥 4h ,其总蒽醌含量平均分别为 13.73、12 .86和 12 .8mg/g。结论 :大黄类饮片切制的适宜条件为薄片或中片 ,6 0℃干燥 10 .5h。

基于毒理学软件和细菌回复突变试验的大黄素型蒽醌基因突变风险评价

目的使用毒理学软件和细菌回复突变(Ames)试验评价大黄素型蒽醌类化合物的致突变风险,分析不同取代基及所在位置对大黄素型蒽醌致突变风险的影响。方法使用Toxtree、Derek Nexus和Sarah Nexus毒性预测软件对大黄素、羟基大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷的致突变风险进行预测,并使用鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535和TA1537及大肠杆菌WP2 uvrA开展基于6孔板的Ames试验,评价10种大黄素型蒽醌的致突变性。结果基于蒽醌母核结构,Toxtree、Derek Nexus和Sarah Nexus毒性预测软件提示所有大黄素型蒽醌均存在致突变风险。在非S9代谢活化状态下,芦荟大黄素导致TA98和WP2 uvrA Ames菌落数增加,大黄酚、大黄酸导致WP2 uvrA Ames菌落数增加。在大鼠肝S9代谢活化状态下,大黄素和大黄酸导致TA98和TA1537 Ames菌落数增加,羟基大黄素导致TA97、TA98、TA1537和WP2 uvrA Ames菌落数增加,芦荟大黄素导致TA98、TA1537和WP2 uvrA Ames菌落数增加,大黄素甲醚导致TA1537 Ames菌落数增加,大黄酚导致TA1537和WP2 uvrA回复菌落突变数增加,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷可引起TA1537回复突变菌落数增加。结论大黄素型蒽醌类化合物在大黄素母核的基础引入羟基后其诱变能力显著升高,较大葡萄糖苷基团的引入反而使受试物诱变能力降低。

一测多评法同时测定大黄药材中8个结合型蒽醌含量的系统研究

目的:建立分别以其中任何1个结合型蒽醌为内参物均可用于测定大黄药材中8个结合型蒽醌的一测多评法(QAMS法)。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Symmetry C18(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为280 nm。分别以芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷为内参物,采用多点校正法,建立另外7个待测成分与内参物的相对校正因子(RCFs),计算待测成分与内参物色谱峰的相对保留时间(RRTs)。采用RCFs计算分别以其中1个成分为内参物时28批大黄药材中另外7个待测成分的含量,以差异百分比(PD)为参数,与外标法(ESM)测定结果进行比较,验证QAMS的准确性。结果:分别以芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷为内参物时,另外7个待测成分与内参物的RCFs分别为1.435、0.624、1.206、0.849、1.718、0.563、0.549,0.697、0.435、0.841、0.592、1.197、0.392、0.383,1.603、2.3、1.932、1.36、2.753、0.897、0.88,0.83、1.191、0.518、0.704、1.425、0.464、0.455,1.178、1.691、0.736、1.421、2.024、0.663、0.647,0.582、0.835、0.363、0.702、0.494、0.328、0.32,1.788、2.566、1.117、2.157、1.518、3.072、0.982和1.822、2.616、1.137、2.197、1.547、3.13、1.025,RRTs分别为1.207、1.47、1.68、1.719、1.763、1.768、2.015,0.829、1.218、1.393、1.425、1.461、1.466、1.671,0.681、0.821、1.143、1.169、1.199、1.203、1.371,0.596、0.719、0.876、1.023、1.049、1.053、1.2,0.583、0.703、0.856、0.977、1.026、1.029、1.173,0.568、0.685、0.835、0.953、0.975、1.003、1.143,0.566、0.683、0.832、0.95、0.972、0.997、1.139和0.497、0.599、0.73、0.834、0.853、0.875、0.878。8个成分含量的QAMS法计算结果的均值与ESM法测定结果之间的PD均<3%。结论:所建立的QAMS法准确、可行,可在实际工作中只有任何1个对照品情况下同时测定大黄药材中8个结合型蒽醌的含量。

基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价

目的对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验,分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h(有S9)或24 h(无S9),给药24 h后应用细胞计数板进行计数,计算细胞相对倍增速率(RPD)评价受试物细胞毒性;细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后,使用流式细胞仪检测突变细胞(CD45+CD90-)发生率。结果所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%,未见明显细胞毒性作用,可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25μg·mL^(−1)组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高(P<0.001);S9代谢活化条件下,与溶剂对照组比较,大黄素50μg·mL^(−1)组,羟基大黄素6.25、12.5、25μg·mL^(−1)组,大黄酚25、50、100μg·mL^(−1)组和大黄酸12.5、25、50μg·mL^(−1)组Pig-a基因突变率显著升高(P<0.05、0.01、0.001)。结论羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素,其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。

HPLC法同时测定三黄益肾颗粒中3种成分的含量

目的：建立三黄益肾颗粒中结合蒽醌型大黄酚、结合蒽醌型大黄素甲醚、丹参酮ⅡA的含量测定方法。方法：采用HPLC法,色谱柱：Ecilpse C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：甲醇-水（75∶25）;流速：1.0 mL/min;检测波长：270 nm;柱温：30℃。结果：大黄酚、大黄素甲醚、丹参酮ⅡA的线性范围为0.073~0.729μg/mL、0.051~0.510μg/mL、0.055~0.550μg/mL。结论：该方法简单、准确,可作为三黄益肾颗粒中结合蒽醌型大黄酚、结合蒽醌型大黄素甲醚、丹参酮ⅡA的含量测定的方法。

试述大黄炮制对疗效的影响

中药炮制对中药的作用具有重要影响,是中医临床用药的一大特色,中药材在制备成各种剂型之前,根据中医药理论,临床用药的目的,以及贮存、配方或制剂的不同要求,并结合药材自身特点,进行必要的加工处理,使之尽量满足医疗需要。药物炮制与否或炮制方法是否合理,直接关系到医疗效果,在长期的实践中.

HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素等11种成分的量

目的建立HPLC法同时测定大黄中5种游离型蒽醌（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚）、4种结合型蒽醌（芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷和大黄素-8-O-葡萄糖苷）及没食子酸、儿茶素共计11种成分的定量方法。方法采用Symmetry C18色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm。结果没食子酸、儿茶素、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在0.062 4～1.560 0、0.180 0～4.500 0、0.041 2～1.030 0、0.030 6～0.765 0、0.051 0～1.275 0、0.028 8～0.720 0、0.019 8～0.495 0、0.050 5～1.262 5、0.063 7～1.592 5、0.098 0～2.450 0和0.163 0～4.075 0μg进样量与峰面积积分值线性关系良好（r≥0.999 5）,平均加样回收率为95.37%～98.93%,RSD〈2.36%。结论该法简便、准确、专属性强,可用于大黄中11种成分的测定。

饮片粒度对大黄药材蒽醌及鞣质类成分煎出量的影响

中药剂量—效应关系(Dose-effect relationship)研究是保证中医药临床疗效的基础和前提。然而,中药剂量不仅仅是一个药材用量问题,药材品质(品种[1]、产地[2]、商品规格等级等)、调剂学处理(饮片粒度大小、煎煮时间等)均可能影响中药剂量的准确性,进而影响临床疗效的发挥。