大豆ASR蛋白富含组氨酸结构域在结合金属离子中的作用

利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2＋和Cd2＋结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力呈正相关;Gm ASR蛋白及A1-A5可保护DNA分子免受Cu^2＋造成的氧化损伤.CD实验和SDS-PAGE实验结果发现,Gm ASR蛋白及A1-A5短肽与Cu^2＋结合后将引起可逆性聚集及沉淀.可见Gm ASR蛋白通过组氨酸结合过多的金属离子,维持细胞内离子平衡,是保护植物免受重金属毒害的重要机制之一。

盐穗木金属硫蛋白HcMT在大肠杆菌中高效表达及金属离子结合能力的检测

旨在研究盐穗木金属硫蛋白Hc MT基因原核表达情况及结合金属离子的能力。从盐穗木中克隆获得的金属硫蛋白(Hc MT)基因亚克隆至p GEX-6p-2原核表达载体上,在大肠杆菌BL21中表达,分离纯化融白蛋白GST-Hc MT,通过原子吸收分光光度法测定融合蛋白GST-Hc MT结合金属离子的量以判断其与金属离子的结合能力。结果显示,诱导表达的融合蛋白GST-Hc MT分子量在34 k D左右,与预期一致,且通过Western blot进一步得到验证;原子吸收结果表明其具有结合Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Cd^(2+)的能力,融合蛋白结合Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Cd^(2+)的量分别是对照的25倍、10倍、4倍和2倍,其结合能力大小为Cu^(2+)>Cd^(2+)>Zn^(2+)>Pb^(2+)。

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅰ的稀土离子荧光探针研究

稀土离子 (Nd3+ ,Sm3+ ,Eu3+ ,Gd3+ ,Tb3+ )对抗凝血因子 (ACFⅠ )的内源荧光有不同程度的淬灭作用。稀土离子与ACFⅠ荧光滴定的结果表明 ,ACFⅠ分子中有两个稀土离子结合位点 ,稀土离子和钙离子在ACFⅠ分子中两个结合位点是共同的竞争结合位点。每个稀土离子与ACFⅠ的结合常数K1 和K2 相接近 ,说明两个结合位点的结构可能基本一致。不同的稀土离子与ACFⅠ之间有相近的结合常数K1或K2 ,表明ACFⅠ分子中的两个结合位点在结构上都有较大的柔性 。

融和蛋白GST-SUMO-MT在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究

将编码融合蛋白GST-SUMO-MT的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-GS-MT并转化到大肠杆菌Origami(DE3)中。20℃,1mmol/L的IPTG诱导20h后,获得分子量约为43kDa的融合蛋白,表达量占菌体上清总蛋白的38.4%。利用谷胱甘肽交联琼脂糖(glutathionesepharose4B)凝胶柱和SephardexG-25分子筛联用可以得到纯度为95%以上的融合蛋白,得率约为70mg/L。该融合蛋白可与GST抗体产生阳性反应。融合蛋白GST-SUMO-MT可以显著提高宿主对Cd2+、Zn2+和Cu2+离子聚积的能力,其耐受能力比对照组分别提高4.2倍、4倍及1.6倍。此外,原子吸收光谱法测定,每分子GST-SUMO-MT可以结合2～3个Cd2+离子。

流感病毒RNA聚合酶PA亚基:潜在抗流感药物靶点

流感是世界范围内的严重传染性疾病,目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶,其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引物,成为潜在抗流感药物靶点。该文对PA亚基的结构、功能及内切酶抑制剂类抗流感药物研究进展进行概述,为PA亚基的深入研究及针对此靶点的抗流感药物发现提供信息指导。

铁饱和乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨铁饱和乳铁蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法用酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞进行原代培养;乳铁蛋白螯合Fe2+获得铁饱和乳铁蛋白;将其稀释到不同浓度作用于成骨细胞,四唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖;碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞碱性磷酸酶活性。结果随着时间的增加,各浓度组均可促进成骨细胞增殖及增强碱性磷酸酶活性。其中100μg/mL浓度组在72 h时细胞增殖数目最大、碱性磷酸酶活性最高,较对照组有统计学意义(P<0.01)。结论铁饱和乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化。

大豆ASR表达提高酵母和烟草细胞对Cu^(2+)耐受力

利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,证明大豆幼苗在150μmol/L Cu SO4胁迫3 h后,其叶和根内Gm ASR基因表达均上调.将大豆Gm ASR基因转化Cu2+敏感型酵母菌ΔCUP 2和烟草悬浮细胞BY-2,Gm ASR蛋白的表达可增强重组酵母和转基因烟草细胞抗Cu2+胁迫的能力.利用大肠杆菌表达体系表达、分离并纯化大豆Gm ASR蛋白,体外实验证明,Gm ASR蛋白可与Cu2+结合,并具有清除羟基自由基的能力.研究结果推测,ASR蛋白可通过螯合Cu2+降低细胞内Cu2+浓度,提高植物对Cu2+胁迫的耐受力.

锌、铁、锰饱和乳铁蛋白体外抑制乙型肝炎病毒DNA的研究

目的探讨锌、铁、锰饱和乳铁蛋白体外抑制乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)作用。方法以天然HBV感染HepG2细胞为模型,通过应用荧光定量PCR法测定细胞中HBV-DNA水平来检测锌、铁、锰饱和乳铁蛋白抑制HBV效果,并应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)进行锌、铁、锰饱和乳铁蛋白对HepG2细胞的毒性研究。结果锌、铁、锰饱和乳铁蛋白对细胞的最大无毒剂量(TD0)分别为1.5、3.0和1.5g/L;用HBV感染HepG2细胞,分别加入锌、铁、锰饱和乳铁蛋白,各实验组对HBV-DNA均有显著抑制作用,浓度为1.5g/L的锌、铁、锰饱和乳铁蛋白抗HBV-DNA结果经对数转换后分别为:(5.746±0.114)、(6.446±0.103)和(5.999±0.725)。结论当HepG2细胞感染乙肝病毒后,锌、铁、锰饱和乳铁蛋白可以显著抑制HBV-DNA,抑制作用强弱依次为:锌饱和乳铁蛋白>锰饱和乳铁蛋白>铁饱和乳铁蛋白。

锌、铁饱和乳铁蛋白体外抗HBsAg分泌的研究

目的:探讨锌饱和乳铁蛋白(Zn2+-BLF)、铁饱和乳铁蛋白(Fe2+-BLF)体外抑制乙型肝炎表面抗原分泌作用,为锌、铁乳铁蛋白应用于临床治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染提供理论和试验依据。方法:以天然HBV感染HepG2细胞为模型,通过应用ELISA法测定细胞上清中的HBsAg水平来检测Zn2+-BLF、Fe2+-BLF的抗HBsAg分泌效果,并用MTT法对Zn2+-BLF、Fe2+-BLF对HepG2细胞的毒性进行研究。结果:Zn2+-BLF、Fe2+-BLF对细胞的最大无毒剂量(TD0)分别为1.5g/L、3.0g/L;先用HBV对HepG2细胞进行感染,再分别加入Zn2+-BLF、Fe2+-BLF,各浓度组Zn2+-BLF均对HBsAg分泌有一定抑制作用,Zn2+-BLF浓度1.0g/L时对HBsAg的抑制率达60.49%;浓度为1.0g/L、0.5g/L的Fe2+-BLF能显著抑制HBsAg的分泌,但0.1g/L的Fe2+-BLF不能显著抑制HBsAg的分泌。结论:当HepG2细胞感染HBV后,Zn2+-BLF、Fe2+-BLF可以显著抑制HBsAg的分泌,Zn2+-BLF对HBsAg的抑制作用强于Fe2+-BLF,但其作用机理有待深入研究。