应用结晶紫染色法测定干扰素效价

根据活细胞能吸收结晶紫染料的原理 ,建立了测定干扰素效价的结晶紫染色法 ,并用线平行线定量法计算干扰素含量。经试验测定 ,该方法与用常规法测得的结果有很好的相关性 (r =0 .9387,P >0 .0 5 ) ,且重复性较好 ,用 A值表示细胞的病变程度比打分法能够更准确地反应细胞的状态 ,因此所得结果更精确、客观 ,表明该方法可用于干扰素类制品的效价测定。

结晶紫染色测定法在抗肿瘤药物筛选中的应用

结晶紫染色测定法在抗肿瘤药物筛选中的应用陈军战洪生关键词结晶紫染色法药物敏感性抗肿瘤药物中图号Ｒ７３－３５结晶紫染色测定法是由Ｇｉｌｉｅｓ等于１９８６年提出来的一种单层细胞培养的体外药物敏感性测定方法。其原理是结晶紫染色可通过细胞的特定摄生法而选择...

一种简便快速检测精子顶体的新方法──改良结晶紫染色法

一种简便快速检测精子顶体的新方法──改良结晶紫染色法高晓勤，杨薇（贵阳医学院组胚教研室贵阳５５０００４贵阳卫校微生物学教研室）精子顶体是由精子细胞核附近的高尔基复合体所形成的。顶体呈囊泡状半球形贴附于细胞核前端表面。精子顶体内富含多糖及各种水解酶，与...

大鼠睾丸间质细胞中结晶紫染色法半薄切片技术应用

随着科学技术的不断提高，半薄切片技术在生物医学形态学领域方面的应用也越来越广泛，它的应用弥补了常规组织学石蜡切片较厚，细胞成份重叠，难以分辨细胞的细微结构、细胞成份的破坏以及固有结构的丧失等缺点，尽可能保持材料的结构和某些化学成分生活时的状态。结合用电子显微镜样品制备方法，进行材料的定位，光镜电镜的对比观察以及用电镜包埋法对大白鼠的睾丸间质细胞进行研究。

苯胺结晶紫染色法在细菌染色中的应用

细菌是最常见的一类病原微生物,是具有细胞壁的单细胞生物[1]。常规染色不能明确把细菌显现出来,需要特殊染色才能观察。一般细菌常用的方法是选用革兰氏染色法,所用的碱性染料(结晶紫等)与细菌的核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合,因此,革兰氏阳性菌摄取结晶紫多且较牢固,其结果呈蓝色或紫色,而革兰氏阴性菌缺乏或含核糖核酸镁盐极少,即易被酸性复红和中性红等染成红色[2]。

内镜下结晶紫染色结合病理活检对提高Barrett食管诊断准确率及其肠化型检出率的研究

目的通过内镜下结晶紫染色结合病理活检提高对Barrett食管(BE)的诊断准确率及肠化型BE检出率。方法选择我院近两年166例经内镜检查疑诊为BE病变的患者为研究对象,随机分为常规内镜组和色素内镜组。常规内镜组采取内镜检查结合病理活检的方法。色素内镜组先用0.05%结晶紫染色液进行染色,根据染后黏膜变化选择病理活检部位,比较两组的准确率和肠化型BE的检出率。结果色素内镜组BE的诊断准确率为86.42%,肠化型BE的检出率为27.16%;常规内镜组分别为64.70%和10.59%,两组比较有显著差异性。结论内镜下结晶紫染色结合病理活检诊断BE的方法和传统的普通内镜结合病理活检比较,其诊断准确率和肠化型BE的检出率明显提高,是一种简单、实用的检查方法,值得推广。

皮肤淀粉样变中淀粉样蛋白4种染色法的比较

目的对4种特殊染色法显示淀粉样蛋白的优劣进行对比分析,为原发性皮肤淀粉样变探寻更好的组织病理学诊断方法。方法将本院皮肤科近10年确诊为原发性皮肤淀粉样变的33例皮损组织石蜡标本重新切片后分别进行刚果红、甲基紫、结晶紫和过碘酸雪夫氏反应(PAS)4种特殊染色,显微镜下观察组织切片中淀粉样蛋白的染色情况。结果33例标本中的淀粉样蛋白经4种特殊染色后均呈阳性着色;刚果红、甲基紫、结晶紫和PAS分别将淀粉样蛋白染成砖红色、蓝紫色、紫色和紫红色;前3种方法的染色效果不稳定,部分切片中可见淀粉样蛋白与周围组织分辨不清;而在所有PAS染色切片中,淀粉样蛋白与周围组织的颜色对比明显,但其特异性不强。结论在选择确诊原发性皮肤淀粉样变的特染方法时,PAS染色结合其他3种染色中的任何一种能够弥补单一方法的不足。

SM染色法等在泌尿系感染中的诊断价值

目的探讨SM尿沉渣染色镜检在泌尿系感染疾病中的诊断价值。方法第一组1834例样本用UF-100尿沉渣分析仪、干化学分析仪、SM染色镜检三种方法对尿中白细胞进行分析,第二组2730例样本镜检用传统的非染色法。结果第一组UF-100尿沉渣仪法、干化学法、SM染色镜检法检测WBC阳性率分别为32.6%、19.1%、23.6%。第二组UF-100尿沉渣仪法、干化学法、传统的非染色镜检法检测WBC阳性率分别为31.5%、18.2%、15.5%。结论UF-100尿沉渣分析的WBC检出率较高,但易受结晶、小圆上皮细胞因素等影响;干化学分析WBC检出率较低,干扰因素较多,且WBC数较高范围时,干化学分析法不能区分其变化;非染色法镜检检出率低;SM染色后镜检能更好地反映WBC总数和活WBC数的变化。UF-100尿沉渣仪与干化学法检测尿WBC结果不一致时,一定要进行尿沉渣染色镜检,才能提高尿沉渣检验质量,为临床诊断急、慢性泌尿系感染和疗效判断提供指导。

球旁细胞光学显微镜下4种染色法结果观察

目的探讨显示小鼠球旁细胞的适宜染色方法,更好地为教学和科研服务。方法取20只小鼠肾组织做石蜡切片,随机分为4组,分别用HE染色、高碘酸-Schiff氏反应染色、改良结晶紫染色和免疫组织化学染色。结果 HE染色和高碘酸-Schiff氏反应染色不能显示肾球旁细胞;改良结晶紫染色和免疫组织化学均能较好地显示肾球旁细胞(胞质内有特征性的被染色的分泌颗粒)。结论改良结晶紫染色和免疫组织化学染色对球旁细胞有较好的染色效果,但改良的结晶紫染色更为简便、经济、稳定。

神经胶质纤维染色方法改进

神经胶质纤维染色以Holzer磷钼酸结晶紫染色法最为常用，但该染色法的染色效果不佳，影响神经胶质瘤的诊断与鉴别诊断。笔者通过反复摸索实验，对神经胶质瘤染色方法进行了改进，收到良好的效果。

革兰氏染色方法的改进

在不改变实验结果的前提下 ,改进革兰氏染色法 ,将四步操作简化为三步操作 .

不同方法观察单增李斯特菌生物被膜的比较研究

为探索单增李斯特菌生物被膜较好的定性观测方法,本文分别比较研究了银染法、结晶紫染色法、扫描电镜法等三种不同方法定性观察单增李斯特菌生物被膜的效果。实验结果表明:上述三种方法均可定性观察单增李斯特菌生物被膜;银染法、结晶紫染色法均可快速检出,且均简单实用,容易掌握,便于推广应用;扫描电镜法耗时较长且费用较高,但可清晰地观察到被膜内部结构。

几种吡咯里西啶类生物碱对肝细胞毒性的探讨

目的 :考察几种吡咯里西啶类生物碱体外实验中对肝细胞的毒性。方法 :用MTT法检测了 6种吡咯里西啶类生物碱clivorine ,monocrotaline ,isoline ,LP 0 1(yamataimine) ,LP 0 2 (12 acetylyamataimine) ,LJ 0 9(platy phylline)对人正常肝细胞株L 0 2细胞活性的影响 ,对于其中有毒性的clivorine又用结晶紫染色的方法进一步确证其毒性。结果 :Clivorine对肝细胞具有强烈的毒性作用 ,未发现其它几种吡咯里西啶生物碱对肝细胞的毒性。结论

奶牛乳腺炎葡萄球菌生物被膜形成及相关基因分析

【目的】研究临床分离的奶牛乳腺炎葡萄球菌生物被膜形成能力,相关基因的分布及二者之间的关系;【方法】利用通用硅胶片法培养葡萄球菌生物被膜,经充分洗涤后对生物被膜进行银染定性判断菌株形成生物被膜的能力,通过生物被膜菌落结晶紫染色法定量检测菌株生物被膜的形成能力,并用扫描电镜观察被膜结构,对葡萄球菌bap、icaAD、icaBC、sar、agr、sigB、clfaA、clfaB、fnbpA和fnbpB进行PCR扩增检测。【结果】银染法定性结果显示137株葡萄球菌中有120株形成肉眼可见的生物被膜,生物被膜形成率为87.6%;结晶紫染色定量检测与硅胶粘附的有132株,不粘附的有5株。试验所用的137株葡萄球菌中,57株能扩增出bap基因;有43株和54株分别能扩增出icaAD和icaBC;有73株、49株和38株分别扩增出sigB、sar和agr;分别有76株和50株染色体中存在clfaA和clfaB;fnbpA和fnbpB分别在52株和26株菌株中扩增出。【结论】推测bap、sigB、sar、icaAD和icaBC基因是生物被膜形成的重要相关基因;agr及粘附素基因clfaA、clfaB、fnbpA和fnbpB对生物被膜形成的作用不明显。

卟啉氮芥对人肝癌细胞SMMC7721的光动力杀伤作用

目的 :研究新单体化合物卟啉氮芥的光化疗抗肿瘤作用。 方法 :用结晶紫染色法测定卟啉氮芥对人肝癌细胞SMMC772 1的光动力抑制效应 ,用测定培养上清乳酸脱氢酶 (L DH )活性方法研究光动力作用对人肝癌细胞 SMMC772 1细胞膜的作用 ,用 3H - Td R掺入法研究光动力作用对人肝癌细胞 SMMC772 1DNA合成的影响。 结果 :卟啉氮芥 (5μg/ml,培养 1h)可使人肝癌细胞 SMMC772 1D值明显降低、经光激发可使培养上清 L DH活性显著升高 ;可使体外培养人肝癌细胞SMMC772 1的 3H- Td R掺入量显著下降、经光激发可使体外培养人肝癌细胞 SMMC772 1的 3H- Td R掺入量进一步显著下降。结论 :卟啉氮芥可显著抑制人肝癌细胞 SMMC772 1DNA的合成 ;对人肝癌细胞 SMMC772 1有显著的光动力抑制作用 ,可破坏肿瘤细胞的细胞膜 ,抑制肿瘤细胞 DNA的合成。提示卟啉氮芥对肿瘤细胞有显著的光动力杀伤作用 ,具有发展为光化疗抗癌新药的前景。

大肠埃希菌生物被膜体外模型的建立及其应用

以ATCC25922为研究对象,采用改良结晶紫染色、快速银染法和扫描电镜技术对其生物被膜进行定量和定性研究,建立大肠埃希菌生物被膜体外模型,利用优化的模型条件对249株临床分离株进行验证。采用琼脂平板计数法绘制大肠埃希菌浮游菌和被膜菌生长曲线,比较其生长特性的异同。对不同成膜能力的大肠埃希菌临床分离株进行色氨酸定量试验,分析不同培养条件对生物被膜菌胞外基质分泌量的影响。快速银染法和扫描电镜定性研究结果表明,大肠埃希菌形成生物被膜后,形成一种浮游细菌和生物被膜细菌共同分布于同一生存空间内的特殊生理结构;不同稀释度的接种量对细菌生物被膜生物量的变化影响不显著(P>0.05)。249株大肠埃希菌分为强成膜能力、中等成膜能力、弱成膜能力和无成膜能力四个表型,分别占3.21%,18.88%,51.81%和26.10%。

重组人γ干扰素复性过程中体外活性检测方法研究

结晶紫染色法由于具有客观、精确的特点,适用于大量抗肿瘤药物的药敏测定。本实验对此方法进行了探讨和条件优化,考察了结晶紫染液的用量及作用时间、溶媒提取时间、孔板效应及边缘效应等,并将其应用于重组人γ干扰素包涵体初步复性的体外活性检测之中。

肺炎克雷伯菌生物膜形成的相关因素研究

目的探讨毒力荚膜血清型、常见毒力基因、耐药基因、碳青霉烯类耐药以及生物膜培养时间等因素与肺炎克雷伯菌生物膜形成的关系。方法比较结晶紫染色定量检测法检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌组(CRKP组)和肺炎克雷伯菌组(KPN组)的吸光度值(A值),并在生物膜培养的不同时间进行A值比较。PCR扩增6种常见高毒力荚膜血清型基因(K2、K5、K16、K20、K54、K57)、5种常见毒力基因[magA(K1)、rmpA、mrkD、wabG、allS]以及8种耐药基因(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaOXA-M)。结果两组肺炎克雷伯菌菌株生物膜形成能力A值为0.454～0.936,在培养12h时,两组生物膜形成能力差异无统计学意义(P>0.05)。在培养18h时,CRKP组形成生物膜的能力较KPN组强(P<0.05)。比较培养12h和18h两个时间段生物膜的A值,CRKP组培养18h的生物膜形成能力较12h更强(P<0.05);KPN组结果相同。24份标本均未检出毒力荚膜血清型基因(K2、K5、K16、K20、K54、K57),5种常见毒力基因[magA(K1),rmpA、mrkD、allS、wabG]仅检出1例(4%)。耐药基因blaTEM占54%、blaSHV占42%、blaKPC占46%、blaIMP占4%。结论培养时间影响结晶紫染色法在临床观察生物膜形成试验中的结果,影响生物膜形成的其他因素以及深层次的原因有待进一步研究和更多实验结果的支持。

苦参碱对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及超微结构变化的作用

为研究筛选抗高血压血管重构药物，在建立兔主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）体外培养方法的基础上.运用结晶紫染色法、3H-TdR掺入法及透射电镜，观察苦参碱（Mat）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的VSMC增殖及超微结构变化的作用。结果显示：AngⅡ能明显刺激VSMC增殖，引超VSMC肥大、高尔基体等细胞器增多。Mat低、中、高剂量组都能对抗AngⅡ的病理作用，且呈良好的量效关系.与雷米普利（Rap）组相比无明显差异。