结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性研究

目的探讨结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性。方法选取33只小白鼠按照融合蛋白免疫情况的不同分为Rv1009组、BCG组和生理盐水组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测方式对三组小白鼠中的血清特异性抗体滴速情况进行观察。分离小白鼠的脾淋巴细胞后采用体外抗原刺激的方式和MTT比色法对小白鼠脾淋巴细胞增殖指数进行观察。采用ELISA方法检测淋巴细胞悬液中鼠源性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)的产生水平。结果经过研究后发现,结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽免疫小白鼠血清特异性抗体的滴速为1:13800,淋巴细胞增殖的指数为(2.42±0.17),明显高于生理盐水组小白鼠的淋巴细胞增值指数(P<0.05)。在ELISA检测方面,结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽免疫组小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12产生水平分别为(1422±31)、(502±10)、(310±12)ng/L,明显高于生理盐水组小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12产生水平(P<0.05)。结论结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽在体外实验研究的过程中效果更好,具有极强的临床研究价值。

小窝蛋白-1脚手架区结构域多肽对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞血红素加氧酶-1活性增加及M1/M2表型极化的影响

目的探讨小窝蛋白-1脚手架区结构域（CSD）多肽对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞（AMs）血红素加氧酶-1（HO-1）活性增加和M/2表型极化的影响。方法应用生物信息学方法分析全长野生型CSD多肽和101位氨基酸缺失的截短型突变CSD多肽（Δ101CSD）与HO-1的结合情况。分离纯化培养大鼠原代AMs，细胞融合达到80%时用无血清培养基进行同步化处理，并分为5组：空白对照组不予任何处理；LPS组加入100 μ/的LPS处理16 h；LPS ＋血晶素组加入100 μ/的LPS和20 μmo/血晶素处理16 h；野生型CSD多肽＋ LPS ＋血晶素组在LPS处理前6 h加入10 μmo/野生型CSD多肽预处理；Δ101CSD ＋ LPS ＋血晶素组在LPS处理前6 h加入10 μmo/ Δ101CSD预处理。各组处理16 h后，激光共聚焦显微镜下观察AMs细胞膜小窝蛋白-1（Cav-1）与HO-1的结合情况；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）以及AMs的M1型标志物肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和M2型标志物白细胞分化抗原206（CD206）、IL-10的mRNA表达；采用分光光度计检测HO-1活性及一氧化氮（NO）含量。结果生物信息学分析结果显示：野生型CSD和Δ101CSD多肽均能与HO-1结合，且二者结合能力无明显差异；但101位Arg缺失导致Δ101CSD多肽与HO-1的部分结合区域消失。激光共聚焦显微镜下观察结果显示：空白对照组Cav-1和HO-1均低表达；LPS组和LPS ＋血晶素组Cav-1与HO-1大量结合；野生型CSD和Δ101CSD多肽均能明显减少LPS诱导的HO-1与Cav-1结合。HO-1活性分析结果显示：给予LPS刺激后，HO-1活性较空白对照组明显升高；血晶素可促进LPS诱导HO-1活性升高；给予两种CSD多肽预处理后，HO-1活性均进一步升高，以野生型CSD多肽作用更加显著，与LPS ＋血晶素组比较差异有统计学意义（pmol·mg-1·h-1：3？683±266比2？408±132，P〈0.05）。RT-qPCR检测结果显示：LPS可诱导细胞炎性因子及M1型标志物水平升高，M2型标志物水平下降；而血晶素可抑制LPS诱导的炎症反应及M/2表型极化。与LPS ＋血晶素组相比，给予野生型CSD多肽预处理后，AMs中炎性因子水平降低，同时可降低M1型标志物TNF-α和iNOS的mRNA表达水平〔TNF-α mRNA（2-？？Ct）：6.82±0.05比8.70±0.24，iNOS mRNA（2-？？Ct）：331.50±32.05比506.70±0.10，均P〈0.05〕，增加M1型标志物IL-10 mRNA的表达水平（2-？？Ct：269.09±6.54比119.05±3.30，P〈0.05）；而101位缺失部分削弱了CSD多肽对炎性因子的抑制作用，且只能降低iNOS mRNA的表达水平（2-？？Ct：429.11±8.92比506.70±0.10，P〈0.05），说明其促使AMs由M1表型向M2表型转化的能力较差。两种多肽对CD206的表达均无影响。 结论野生型CSD多肽可减少LPS诱导的Cav-1与HO-1结合、增加HO-1活性，促进AMs由M1表型向M2表型转化，抑制促炎因子表达。