胰岛素受体底物PH结构域相互作用蛋白结构和功能研究进展

PHIP是一种与胰腺β细胞中胰岛素受体底物(IRS)的PH结构域相互作用的蛋白。根据小鼠PHIP(mPHIP)mRNA翻译的不同起始位点,除全长的PHIP1外,mPHIP基因还编码其他3种不同变异体。在胰岛素诱导的信号途径中,主要分布于细胞核的PHIP1和IRS-1的PH结构域相互作用,介导IRS蛋白酪氨酸的磷酸化。IRS-2和PHIP1的共表达能诱导IRS在细胞膜上的定位,促进葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)向细胞质膜的转移。PHIP1的表达能提高β-细胞内细胞周期蛋白D2的表达,促进β细胞的生长。PHIP1的表达活化蛋白激酶B(PKB),活化的PKB能明显抑制β细胞的凋亡。PHIP与胰岛素信号传导途径中其他信号分子的相互作用机制尚不明确。

结构域相互作用数据库的产生、发展与应用

结构域是进化上的保守序列单元,是蛋白质的结构和功能的标准组件.典型的两个蛋白质间的相互作用涉及特殊结构域间的结合,而且识别相互作用结构域对于在结构域水平上彻底理解蛋白质的功能与进化、构建蛋白质相互作用网络、分析生物学通路等十分重要.目前,依赖于对实验数据的进一步挖掘和对各种不同输入数据的计算预测,已识别出了一些相互作用/功能连锁结构域对,并由此构建了内容丰富、日益更新的结构域相互作用数据库.综述了产生结构域相互作用的8种计算预测方法.介绍了5个结构域相互作用公共数据库3DID、iPfam、InterDom、DIMA和DOMINE的有关信息和最新动态.实例概述了结构域相互作用在蛋白质相互作用计算预测、可信度评估,蛋白质结构域注释,以及在生物学通路分析中的应用.

同源结构域相互作用蛋白激酶2 (HIPK2)对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

目的:探讨HIPK2对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的影响。方法:成功构建博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型,构建稳定过表达HIPK2腺病毒载体,设为对照组、模型组和过表达HIPK2组,每组各5只,对肺组织进行HE和Masson染色,并用RT-PCR、Western Blot法测定肺组织中HIPK2和α-SMA含量。结果:博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型中HIPK2表达下调(P 【0.05),α-SMA表达上调(P 【0.05),且纤维化程度加重;过表达HIPK2可抑制成纤维细胞的激活,使α-SMA表达下调(P 【0.05),且肺纤维化程度减轻。结论:HIPK2缺乏在肺纤维化机制中具有重要作用,HIPK2可抑制成纤维细胞的激活,减轻肺纤维化。

SpCas9结构域相互作用关键氨基酸的动态网络分析

CRISPR-Cas9系统是一种操作简单、灵活性好、识别和切割效率高的基因编辑技术,具有用于基因治疗的潜能。然而,由于该系统的主要组分Streptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9)蛋白过大,难于向靶细胞运输,因而亟需构建截短体蛋白,以提高系统的运输效率、扩展其应用前景。前期结构研究表明,SpCas9结构域分界清晰,各结构域功能相对独立又彼此协同,易于通过对各结构域进行分步改造实现蛋白截短优化。但报道的晶体结构缺乏SpCas9的全长结构,及结构域间相互作用的关键信息。针对此问题,本文运用分子动力学(Molecular Dynamics, MD)模拟和动态网络分析方法研究SpCas9-sgRNA-DNA复合物结构。我们首先对已有晶体结构的缺失片段进行补齐,构建了一个包含全长SpCas9及DNA链的三元复合物原子结构。然后对复合物结构进行长时间尺度MD模拟,通过动态网络分析方法分析了SpCas9蛋白各结构域间的相互作用,找出影响SpCas9结构域间相互作用的关键氨基酸。与已有实验结果比较,所识别的位点是SpCas9蛋白正常工作的关键氨基酸。因此,本研究不仅可以加深人们对SpCas9作用机制的了解,也为SpCas9蛋白的优化改造提供理论指导。

同源结构域相互作用蛋白激酶2抗肾脏纤维化机制研究进展

综述同源结构域相互作用蛋白激酶2抗肾脏纤维化机制研究进展。同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomaininteracting protein kinase-2,HIPK 2)作用于多条肾脏纤维化相关信号通路上游,在肾小管间质纤维化中发挥重要作用,可能成为潜在抗肾纤维化治疗的有效靶点,结合HIPK2功能结构、在肾纤维化信号通路作用以及治疗进展做以综述,以期为抗肾纤维化治疗的研究提供参考。

同源结构域相互作用激酶2在恶性肿瘤中的研究进展

同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK-2)定位于7q33~7q34的丝氨酸(Ser)/苏氨酸(Thr)蛋白激酶,普遍存在于人类成人组织中。研究表明,HIPK-2是一种抑癌基因。HIPK-2激活或过表达使抑癌基因p53磷酸化,并激活p53的细胞凋亡活性,通过p53依赖性和非依赖性途径促进细胞凋亡,从而抑制血管生成和肿瘤生长。HIPK-2还可通过阻止胞质分裂中四倍体细胞的形成来抑制肿瘤生长。HIPK-2失活机制包括:细胞质定位、杂合性丢失(LOH)和缺氧。HIPK-2失活导致血管生成、肿瘤生长和化疗耐药。HIPK-2可磷酸化β-连环蛋白(β-catenin),通过Wnt/β-catenin信号通路参与肿瘤进展过程。本文就HIPK-2在恶性肿瘤中的研究现状作简要综述。

同源结构域相互作用蛋白激酶2在宫颈癌中的表达及其与人乳头瘤病毒感染和细胞凋亡的关系

目的探讨宫颈癌中同源结构域相互作用蛋白激酶2（HIPK2）的表达及其与人乳头瘤病毒（HPV）感染和细胞凋亡的关系。方法取50例宫颈癌组织和15例正常宫颈组织，采用免疫组化法测定HIPK2和HPV的表达，采用DNA原位末端标记（TUNEL）技术检测了细胞凋亡情况。结果15例正常宫颈组织中，HIPK2、HPV和PCNA阳性表达者分别有1、3和4例，而50例宫颈癌组织中分别有44、39和45例，宫颈癌组织HIPK2、HPV和PCNA的表达明显高于正常宫颈组织（均P〈0．05）。宫颈癌组凋亡指数（AI）为（1．6±0．7）％，正常宫颈组AI为（5．7±0．2）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。在宫颈癌组织中，HIPK2表达与HPV表达呈正相关（r=0．467，P=0．0006），与AI呈负相关（r=-0．370，P=0．0083）。结论在宫颈癌中，HIPK2的表达与HPV感染和细胞凋亡密切相关，可能在宫颈癌发生、发展中起重要作用。

基于结构域的芥子油苷合成相关蛋白质相互作用模型构建和预测

从蛋白质一级序列抽取蛋白质结构域信息建立结构域特征向量,使用结构域特征向量训练基于高斯径向基核的支撑向量机,用5折交叉验证对支撑向量机参数网格寻优,然后用最优化参数训练得到蛋白质相互作用预测器。结果表明:预测器的交叉验证ROC曲线下面积达到了85.49%,可以有效预测拟南芥相关的蛋白质相互作用。

同源结构域相互作用蛋白激酶2在宫颈癌及宫颈癌前病变中的表达及其临床意义

目的探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)在宫颈癌及宫颈癌前病变中的表达情况及其临床意义。方法应用免疫组织化学及RT-PCR技术检测宫颈癌组织24例、宫颈上皮内瘤变(CIN)24例及正常宫颈10例中HIPK2的表达情况,分析HIPK2与宫颈癌发病之间的关系。结果宫颈癌与其他各组HIPK2的表达均有明显差异(均P<0.05),CINⅢ与正常组也有明显差异(P<0.05),而CINⅠ～Ⅱ与正常组比较无明显差异(P>0.05),且HIPK2在宫颈癌组织、CINⅢ、CINⅠ～Ⅱ及正常宫颈中的表达呈递增趋势。结论HIPK2在宫颈组织中表达的减少可能是宫颈癌的发病原因之一。

肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究

目的明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域。方法通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验证p GEX-4T-1-ABCE1-55与β-肌动蛋白有无相互作用。结果 GST-ABCE1-55是带有GST标签的含有357个氨基酸的重组蛋白,大小约66×10~3,在GST pull-down实验中,GST-ABCE1-55并不能与β-肌动蛋白特异结合。结论肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域应位于ABCE1蛋白第358位至第600位编码氨基酸中。

人eRF3a与survivin相互作用的结构域分析

第二类肽链释放因子eRF3(eukaryotic polypeptide release factor)是一种GTPase,它促进第一类肽链释放因子eRF1的释放活性,并与细胞周期调控、细胞骨架组装、细胞凋亡和肿瘤形成等过程相关。哺乳动物细胞中eRF3有两种——eRF3a和eRF3b,分别由GSPT1和GSPT2(G1 to S phase transition 1/2)基因编码。生存素(survivin)是迄今发现的最强有力的凋亡抑制因子,具有独特的结构和复杂的功能,不仅可以抑制细胞凋亡,还参与细胞有丝分裂、血管的生成等过程。eRF3和survivin都与细胞周期和细胞凋亡的调控相关。该实验室的前期研究表明,eRF3和survivin具有相互作用关系。该研究进一步对eRF3a进行截短突变,采用酵母双杂交和pull-down两种分析方法依次验证eRF3a(1-72aa)和eRF3a(1-36aa)与survivin的相互作用关系。结果表明,eRF3a(1-72aa)和eRF3a(1-36aa)均可以与survivin相互作用,由此确定eRF3a与survivin相互作用的最小结构域位于其N末端1-36aa之间,从而为进一步证实eRF3a的N端结构域与survivin协同作用参与细胞周期和细胞凋亡的调控提供了数据支持。

麦角甾苷调节HIPK2-P53通路对人大肠癌裸鼠移植瘤的治疗作用

目的:研究肉苁蓉提取物麦角甾苷对人大肠癌裸鼠移植瘤模型肿瘤生长的作用,及对人大肠癌细胞HIPK2-P53通路的影响,探讨麦角甾苷抑制人大肠癌的作用机制.方法:通过腋下接种人结肠癌HCT-116细胞,建立人大肠癌裸鼠移植瘤模型,随机分为:模型组(生理盐水)、麦角甾苷低[20mg/(kg·d)]、中[40 mg/(kg·d)]、高[80 mg/(kg·d)]剂量组和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组[1 mg/(kg·d)],经腹腔分别给药0.2mL,连续给药2 wk.2 wk后处死裸鼠,分别检测裸鼠瘤体体积、瘤质量,采用免疫组织化学法检测瘤组织中凋亡相关蛋白同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinase 2,HIPK2)、P53、Bax和Bcl-2的表达情况.结果:麦角甾苷低、中、高剂量及5-F U对裸鼠瘤体大小抑制率分别为:48.41%、61.04%、63.75%和75.14%,瘤体质量抑制率分别为:42.79%、53.90%、60.99%、66.19%.免疫组织化学结果显示,裸鼠大肠癌肿瘤组织中麦角甾苷低、中、高剂量及5-FU组HIPK2的表达量分别为:4.83±0.62、8.46±0.99、11.90±1.21、13.50±0.94;P53的表达量分别为:14.59±0.90、17.60±1.40、23.10±2.10、22.44±2.05;B a x表达量分别为14.41±0.38、15.84±0.54、26.28±0.55、26.34±2.33;Bcl-2的表达量分别为14.08±1.04、11.93±0.93、7.48±0.86、5.46±0.67.结论:麦角甾苷能够抑制人大肠癌裸鼠移植瘤生长,上调凋亡相关蛋白HIPK2、P53、Bax的表达,下调Bcl-2表达,其抑制大肠癌的作用与促进肿瘤细胞凋亡密切相关.

ARID蛋白家族在胃癌发生和进展中作用的研究进展

富含AT的相互作用结构域(ARID)蛋白家族由7个亚家族共15个成员组成。ARID蛋白家族成员具有调控基因转录、参与细胞增殖和分化的能力。越来越多的证据表明,ARID蛋白家族成员可通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路或miRNA参与胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡,应用PI3K、AKT抑制剂等可以改善ARID1A、ARID1B和ARID2突变或缺失患者的预后。因此,ARID可能可以作为胃癌诊断和治疗的新靶点。该文综述了ARID蛋白家族在胃癌发生和进展中作用的研究进展,以期为胃癌的诊断、靶向治疗及预后提供参考。

miR-340-5p靶向调控ARID1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-340-5p靶向调控富含AT的相互作用结构域(ARID)1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响。方法 通过实时荧光定-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测miR-340-5p和ARID1A在甲状腺癌细胞中表达水平。通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测转染miR-340-5p抑制物后癌细胞活性、迁移和侵袭变化。双荧光素酶报告基因检测miR-340-5p和ARID1A的靶向结合关系。最后通过同时敲低miR-340-5p和ARID1A的回复实验验证miR-340-5p调控ARID1A影响癌症发展。结果 miR-340-5p在甲状腺癌细胞中明显高表达,ARID1A表达明显较低(P<0.05)。通过抑制BCPAP细胞中miR-340-5p表达明显减少了癌细胞活性、迁移和侵袭水平。miR-340-5p和ARID1A具有直接靶向结合关系。敲降ARID1A能够明显逆转miR-340-5p抑制物对BCPAP细胞活性、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-340-5p是甲状腺癌中的促癌基因,ARID1A为miR-340-5p的靶标下游,miR-340-5p通过靶向调控ARID1A促进甲状腺癌细胞活性、迁移和侵袭。

RAS-RAF蛋白相互作用结构域的单分子力谱分析

利用自行构建的光镊系统,通过in vitro单分子力谱测量,在单分子水平研究了RAS/RAF/MEK/ERK信号传导通路中的重要信号传导蛋白RAF与其上游G蛋白RAS结合的势垒形态。RAS与野生型RAF的单分子结合力分布情况显示,RAS-RAF结合至少涉及RAS结合区(RAS binding domain,RBD)及半胱氨酸富集区(cysteine rich domain,CRD)两个作用位点。而RAS与RAF突变体RAF(Q257R)的单分子结合力分布,存在两个以上的结合域:最可几力为95 pN的包络对应RAS-RAF[RBD]结合;最可几力为117 pN的包络对应RAS-RAF[CRD]结合;最可几力为159 pN的包络对应RAS-RAF[RBD]和RAS-RAF[CRD]同时存在(叠加)时的相互作用。而且在大于200 pN的范围(光镊有效量程之外),RAS与RAF(Q257R)的结合力仍然有相当的概率分布。这说明,突变体RAF(Q257R)比其野生型更易于与RAS结合,且可能涉及新的结合位点。该发现对解释Q257R的致病机理及设计拮抗剂均有重要指导意义。

氧化苦参碱减轻糖尿病肾病小鼠肾组织炎症及纤维化反应的机制研究

目的 通过观察氧化苦参碱(OMT)对同源结构域相互作用蛋白激酶2 (HIPK2)、Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、上皮钙黏素(E-cadherin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18表达的影响,初步探讨OMT在糖尿病肾病(DKD)中抗炎抗纤维的可能保护机制。方法 健康6周龄的db/db小鼠适应性喂养2周,随机分为糖尿病组(DM组)和OMT组,每组10只。OMT组给予腹腔注射氧化苦参碱[120 mg/(kg·d)],持续8周,并设同月龄同背景db/m小鼠为正常对照组(NC组)。处死小鼠前收集血液和尿液,检测各项生化指标,HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理形态学改变,Western blotting检测、免疫组织化学染色观察各组小鼠肾皮质TLR4、HIPK2、NLRP3、Ecadherin、Fibronectin的表达水平及部位;酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清IL-1β、IL-18水平。采用Pearson法对HIPK2与TLR4、NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果 DM组体重、血糖、24 h尿蛋白量、总胆固醇、甘油三酯水平较NC组均升高(P <0.05),OMT组24 h尿蛋白量、总胆固醇、甘油三酯水平较DM组降低(P <0.05)。病理染色显示,DM组可见肾小球系膜区节段性增生,基底膜无明显增厚,肾小管管腔明显扩张,肾小管上皮细胞空泡样变性,间质区炎症细胞浸润和蓝色胶原纤维沉积;经OMT治疗后,相较于DM组,OMT组肾小球系膜区增生程度减轻,肾小管病变有所改善,间质区炎症细胞浸润减少。DM组TLR4、HIPK2、NLRP3、Fibronectin蛋白相对表达量较NC组升高(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量较NC组降低(P <0.05);OMT组小鼠TLR4、HIPK2、NLRP3、Fibronectin蛋白相对表达量较DM组降低(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量较DM组升高(P <0.05)。DM组血清中IL-1β、IL-18相对表达量较NC组升高(P <0.05),OMT组较DM组降低(P <0.05)。Pearson相关相关性分析显示,DM组肾组织中HIPK2蛋白与TLR4、NLRP3蛋白表达均呈正相关(r=0.881和0.774,均P <0.05)。OMT组HIPK2蛋白与TLR4、NLRP3蛋白表达均呈正相关(r=0.814、0.871,均P <0.05)。结论 OMT抑制DM小鼠肾组织的炎症反应和纤维化程度,可能与抑制HIPK2及炎症信号通路的活化有关。

m6Am修饰酶PCIF1调控靶基因ACOT8参与胃癌进展的机制研究

背景与目的:最新证据显示N6, 2’-O-二甲基腺苷(N6, 2’-O-dimethyladenosine,m6Am)修饰酶磷酸化C末端结构域相互作用因子1(phosphorylated c-terminal domain-interacting factor 1,PCIF1)可能是胃癌的重要生物标志物及治疗靶点。然而,这种新的PCIF1分子机制与胃癌进展的关系仍有待进一步探索。本研究分析PCIF1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的调控作用及其调控靶基因酰基辅酶A硫代酯酶8(acyl-CoA thioesterase 8,ACOT8)在胃癌进展中的机制。方法:使用基因表达谱交互分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)分析胃癌患者的胃癌组织和非胃癌组织中的PCIF1表达,并分析了PCIF1表达与胃癌患者总生存率的相关性。收集2019年——2021年长沙市第一医院消化内科就诊患者的89对胃癌组织和匹配的癌旁组织。通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析PCIF1表达。在体外实验中,将SNU5细胞分为PCIF1敲低(shPCIF1)组和相应对照(sh-NC)组,将AGS细胞分为载体对照组(normal control,NC)组和PCIF1过表达(PCIF1)组。使用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)和transwell法分析了PCIF1对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。此外,在PCIF1过表达的AGS细胞中敲低ACOT8并进行了拯救实验。采用皮下异种移植瘤模型来测定PCIF1在胃癌中的生物学效应。结果:PCIF1在胃癌组织和细胞系中呈高表达,并且PCIF1高表达胃癌患者的预后较差。与sh-NC组相比,sh-PCIF1组的细胞活力、EdU阳性细胞、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05)。与NC组相比,PCIF1组的细胞活力、EdU阳性细胞、迁移和侵袭细胞数均显著增加(P<0.05)。在PCIF1过表达的AGS细胞中,敲低ACOT8的表达可降低细胞活力、EdU阳性细胞、迁移和侵袭细胞数。在体内实验中,与NC组相比,PCIF1过表达组裸鼠的移植瘤体积和重量均显著增加(P<0.05)。结论:PCIF1在胃癌细胞系和组织中上调。此外,PCIF1/ACOT8轴参与介导胃癌细胞的恶性行为产生。

HIPK2在脑胶质瘤中的表达及前神经元-间质亚型转化中作用的研究

目的探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)在人脑胶质瘤中的表达及前神经元-间质亚型转化(PMT)中的作用。方法分析美国国立生物信息技术中心基因表达数据库(NCBI-GEO:GSE16011)中HIPK2 mRNA在低级别和高级别胶质瘤中的表达。基于GSE16011数据库进一步分析HIPK2 mRNA在前神经元型、间质型和经典型胶质瘤样本中的表达。根据HIPK2 mRNA的表达量将胶质瘤患者分为HIPK2低表达组和高表达组,并绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank检验比较HIPK2低表达组与高表达组患者的生存差异。体外实验以人星形胶质细胞(NHA)为对照,通过蛋白质免疫印迹法(WB)验证HIPK2蛋白在胶质瘤细胞株H4、A172、U87和U251中的表达。在U87细胞中采用携带HIPK2 cDNA序列的过表达慢病毒载体构建过表达HIPK2的细胞株,以空载慢病毒载体构建对照细胞株。在H4细胞中采用siRNA转染敲低HIPK2的表达。通过划痕实验和Transwell实验探讨HIPK2表达改变对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。以WB实验检测HIPK2表达改变对FN1、CD44和SNAI2蛋白表达的影响。采用Pearson相关分析探讨HIPK2与FN1、CD44和SNAI2表达的相关性。结果HIPK2 mRNA在高级别胶质瘤中的表达水平低于低级别胶质瘤(t=6.86,P<0.001),且HIPK2 mRNA在间质型和经典型胶质瘤中的表达水平均低于前神经元型胶质瘤(均P<0.001)。对GSE16011数据库数据的分析显示,HIPK2高表达组患者的总体生存期长于低表达组[分别为(40.8±3.9)个月和(24.9±3.2)个月,P<0.001]。WB结果显示,与NHA比较,H4、A172、U87和U251细胞中HIPK2蛋白的表达水平均降低(均P<0.05)。U87细胞HIPK2过表达组HIPK2蛋白的表达较对照组显著上调(t=24.88,P<0.05),H4细胞HIPK2敲低组的HIPK2蛋白表达水平较对照组明显下调(t=26.72,P<0.001)。划痕实验结果显示,U87细胞HIPK2过表达组的细胞划痕修复率低于对照组[分别为(18.1±2.0)%和(45.6±4.2)%,t=10.23,P<0.001];而H4细胞HIPK2敲低组的细胞划痕修复率高于对照组[分别为(60.5±5.4)%和(37.9±4.0)%,t=5.83,P=0.004]。Transwell实验结果显示,U87细胞HIPK2过表达组的穿膜细胞数少于对照组[分别为(92.0±11.9)个和(193.1±16.2)个,t=8.75,P<0.001];而H4细胞HIPK2敲低组的穿膜细胞数高于对照组[分别为(204.0±16.9)个和(135.1±15.0)个,t=5.27,P=0.006]。WB实验结果表明,U87细胞HIPK2过表达组细胞中FN1、CD44和SNAI2蛋白的表达水平均低于对照组(均P<0.001);H4细胞HIPK2敲低组中FN1、CD44和SNAI2蛋白的表达水平均高于对照组(均P<0.001)。Pearson相关分析结果显示,胶质瘤中HIPK2的表达与FN1、CD44和SNAI2表达均呈负相关(均P<0.05)。结论HIPK2在高级别胶质瘤和间质型胶质瘤中呈低表达,低表达的HIPK2可能通过影响胶质瘤PMT促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。

HIPK2调控COX-2及β-catenin表达对人结直肠癌细胞VEGF表达的影响

目的:研究同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinases 2,HIPK2)基因重组质粒对HCT-116细胞环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)及β-catenin表达的影响,探讨HIPK2基因对人结直肠癌细胞血管新生因子表达的调节作用.方法:采用脂质体将pEGFP-N3和pEGFP-N3-HIPK2质粒转染人结直肠癌细胞,分为正常组、载体质粒组和HIPK2质粒组,ELISA法检测细胞培养液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,Western blot检测β-catenin蛋白表达情况.在上述3组细胞中同时转染含COX-2基因启动子质粒pGL3-basic-COX-2后,双荧光素酶活性检测COX-2启动子的表达,Real-time PCR检测COX-2 mRNA的表达水平.结果:HCT-116细胞中pEGFP-N3-HIPK2质粒组的荧光表达量与载体质粒pEGFP-N3组的表达量基本一致,两组相比无明显差异.转染pEGFP-N3-HIPK2质粒后,HCT-116细胞内VEGF的表达量由对照组的857.54p g/m L±65.04 p g/m L降低至368.32 p g/m L±98.82 pg/mL,两组相比具有统计学意义(P<0.05);COX-2启动子活性由空载体组的266.407×10-5±40.902×10-5下降至75.467×10-5±18.666×10-5,两组相比具有统计学意义(P<0.05);COX-2 mRNA的相对表达量由空载体组的3.48×10-4±0.64×10-4下调至1.07×10-4±0.32×10-4,两组相比具有统计学意义(P<0.05).同时,Western blot结果显示,HIPK2可明显降低细胞β-catenin的蛋白表达,上调细胞内p-β-catenin蛋白的表达量.结论:pEGFP-N3-HIPK2可明显上调HCT-116细胞HIPK2的表达,显著下调人结直肠癌细胞COX-2的转录表达及VEGF的表达水平,其作用机制可能与其抑制细胞COX-2及β-catenin表达,调节β-catenin-COX-2信号转导有关.

PTEN和BID在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨磷酸酶张力蛋白同系物(PTEN)和BH3相互作用结构域死亡激动剂(BID)在宫颈癌发病机制中的作用。方法:选取宫颈癌患者107例,取癌组织(宫颈癌组),并与50例宫颈上皮内瘤变(宫颈上皮内瘤变组)、慢性宫颈炎(慢性宫颈炎组)作对照,免疫组化法检测PTEN和BID的表达。结果:宫颈癌组PTEN和BID的阳性率和阳性表达强度(分别为:42.99%,OD值:0.19±0.04;45.79%,OD值:0.17±0.02)显著低于宫颈上皮内瘤变组(分别为:62.00%,OD值:0.22±0.05;74.00%,OD值:0.20±0.04)和慢性宫颈炎组(分别为:66.00%,OD值:0.23±0.05;82.00%,OD值:0.22±0.04)(P<0.05或P<0.01)。宫颈上皮内瘤变组和慢性宫颈炎组PTEN和BID的阳性率和阳性表达强度差异均无统计学意义(均P>0.05)。在宫颈癌组中,伴有淋巴结转移组BID的阳性率和阳性表达强度(33.33%;OD值:0.16±0.02)均低于不伴有淋巴结转移组(63.16%;OD值:0.18±0.02)(均P<0.05);PTEN的阳性率和阳性表达强度在伴或不伴淋巴结转移时差异均无统计学意义(38.89%vs 47.37%;OD值:0.19±0.03 vs0.21±0.05)(均P>0.05)。结论:PTEN和BID在宫颈癌组织中表达下降,它们可能与宫颈癌的恶性分化有关,BID的表达还与淋巴结转移相关。PTEN和BID可能是一种治疗肿瘤的潜在靶点。