MAGE-A9结构域缺失突变体对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

背景与目的:人类黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen gene,MAGE)是癌-睾丸抗原(cancer/testis antigens,CTA)家族中一组很典型的成员,除睾丸外几乎在正常成年组织中均不表达,但在很多种肿瘤组织中高表达,因此被认为是一种肿瘤特异性抗原,其中MAGE-A家族包括12个成员,分别为MAGE-A1～MAGE-A12。本研究旨在观察4种MAGE-A9结构域缺失突变体pcDNA3.1 MAGE-A9(1～29)、pcDNA3.1MAGE-A9(1～114)、pcDNA3.1 MAGE-A9(115～285)、pcDNA3.1 MAGE-A9(286～315)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法:构建以上4种MAGE-A9结构域缺失突变体,转染4种MAGE-A9的结构域和对照组Myc-His-pcDNA3.1(-),采用RT-PCR方法检测MCF-7细胞中MAGE-A9各结构域的表达,并用MTT和克隆形成的方法观察MAGE-A9结构域缺失突变体对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。结果:与对照组Myc-His-pcDNA3.1(-)组相比,MAGE-A9结构域缺失突变体pcDNA3.1 MAGE-A9(1～29)组、pcDNA3.1 MAGE-A9(1～114)组和pcDNA3.1MAGE-A9(286～315)组没有导致克隆形成率的明显变化(P>0.05),而pcDNA3.1 MAGE-A9(115～285)导致克隆形成率的明显增加(P<0.05)。结论:pcDNA3.1 MAGE-A9(115～285)能增加乳腺癌MCF-7细胞株的增殖,表明MAGE-A9(115～285)可能为MAGE-A9的功能区域。

第Ⅴ结构域缺失型β_2-GPI对糖尿病大鼠尿蛋白排泄的影响

目的:探讨第Ⅴ结构域缺失型β2-糖蛋白I(DI-IV)对糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄以及血管内皮生长因子(VEGF)-一氧化氮(NO)轴的影响。方法:将大鼠高脂喂养8周后尾静脉注射STZ(30mgkg-1)进行糖尿病造模,造模成功1周后将大鼠随机分为对照组、β2糖蛋白(Iβ2-GPI)组以及DI-IV组,每周分别于尾静脉注射人血清白蛋白(HSA)、β2-GPI、DI-IV各200mgkg-1,持续4周。于干预前后取血,测定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血甘油三酯(TG)、总胆固醇酯(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、24h尿白蛋等。采用Westernblot检测肾脏VEGF、内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的表达及eNOS磷酸化。结果:与干预前相比,对照组、β2-GPI组TG、TC、LDL-C、HDL-C、Scr无明显变化(P均>0.05),而血糖、24h尿蛋白排泄升高(P均<0.05);干预后DI-IV组血TC、LDL-C、24h尿蛋白排泄均减少(P均<0.05)。与对照相比,DI-IV组肾脏VEGF-A表达减少(P<0.05),eNOS的磷酸化表达增加(P<0.05)。结论:DI-IV可能通过改善糖尿病大鼠肾脏VEGF-NO轴功能以及降脂作用,减轻糖尿病SD大鼠24h尿蛋白的排泄。

E-选择素不同结构域缺失对其粘附功能的影响

目的研究Ｅ－选择素不同结构域缺失对其粘附功能的影响。方法从人胎脐静脉内皮细胞总ＲＮＡ中用ＲＴ－ＰＣＲ方法获其全长ｃＤＮＡ，设计并合成三对缺失Ｅ－选择素分子的ＥＧＦ结构域及ＥＧＦ＋ＣＲ１＋ＣＲ２结构域引物，并将三者基因分别在痘苗病毒真核表达系统中表达。结果细胞粘附功能试验结果表明，Ｅ－选择素分子ＥＧＦ结构域或ＥＧＦ＋ＣＲ１＋ＣＲ２结构域的缺失削弱了Ｅ－选择素分子的粘附能力。此外，本研究尚克隆并在痘苗表达系统中表达了可溶性Ｅ－选择素分子。结论Ｅ－选择素分子不同结构域缺失对其粘附能力削弱现象的发现为临床某些疾病的发病机理揭示及治疗提供了线索。可溶性Ｅ－选择素分子在痘苗病毒表达系统中表达成功为与其介导的白细胞粘附。

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶PCP-2与β-catenin相互作用的结构基础

PCP-2是MAM型受体型蛋白酪氨酸磷酸酶亚家族的新成员.为研究PCP-2与β-catenin 相互作用的结构基础,构建了PCP-2胞内区各结构域的缺失突变体,将其及野生型PCP-2分别与β-catenin共转染至BHK-21细胞,采用免疫共沉淀和Western印迹分析PCP-2与β-catenin相互作用的结构基础.结果表明,在野生型PCP-2及上述缺失突变体中,除PCP-2 EXT(缺失包括近膜区在内的整个胞内区的PCP-2)外,野生型PCP-2,缺失胞内区两个磷酸酶结构域的PCP-2(PCP-2ΔClC2)及缺失胞内区第2个磷酸酶结构域的PCP-2(PCP-2ΔC2)均能与抗β-catenin CT抗体发生免疫共沉淀.提示PCP-2与β-catenin通过直接结合发生相互作用,且PCP-2的近膜区是PCP-2与β-catenin结合所必需的结构基础,它介导二者结合.

重组人凝血因子Ⅷ结构改造的研究进展

血源凝血因子Ⅷ是血液凝固过程中关键因子,为治疗甲型血友病的特效药,但存在价格昂贵、给药频率高和潜在的病毒污染风险等缺点;且由于血液制品来源有限,凝血因子Ⅷ类药物在国内供不应求。随着基因工程技术的发展,药用重组人凝血因子Ⅷ得以实现,在此基础上大量针对重组人凝血因子Ⅷ的结构改造研究不断涌现,部分产品已投放市场。文章主要对哺乳动物细胞表达的各类改构重组人凝血因子Ⅷ的原理和研究进展进行综述。由于存在提高蛋白质稳定性及延长药物半衰期等优势,结构改造将是重组人凝血因子Ⅷ类药物未来的技术发展方向。