转染结构性雄烷受体对丝裂霉素C和5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮的细胞毒性的影响

研究丝裂霉素C(MMC)及其衍生物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮[5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione,629]的细胞毒性,以及结构性雄烷受体(constitutive androstane receptor,CAR)转染对其生物学效应的影响。将质粒mCAR/pCR3转染HepG2细胞,经G418耐药性筛选获得转染CAR的g2car细胞,以转染空载体pCR3(HepG2/pCR3)作为对照。用RT-PCR检测质粒和CYP2B6 mRNA的表达,用MTT法评价MMC和629对g2car细胞和HepG2细胞在有氧和乏氧条件下的细胞毒性。RT-PCR检测到CAR和CYP2B6 mRNA在g2car细胞中有表达,在HepG2细胞中无表达;此外,在乏氧情况下,MMC和629的细胞毒性比在有氧情况下均有所增加(P<0.05),并且转染CAR以后,两者的细胞毒性均增加,但对MMC的影响较明显(P<0.05),对629的影响不明显(P>0.05)。提示CAR可在转录水平调节药物的代谢,提高药物的毒性;CYP2B6可以主要代谢MMC,但不主要代谢629。转染CAR基因可以增加细胞CYP2B6 mRNA的表达,并可引起MMC和629毒性的改变。

转染结构性雄烷受体CAR对MMC和629的辐射增敏性的影响

研究了丝裂霉素C(Mictomycin C,MMC)及其衍生物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮(5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione,629)的乏氧辐射增敏效应,以及转染结构性雄烷受体(Constitutive androstane receptor,CAR)对它们的生物学效应的影响。采用RT-PCR(Reverse Transcriptase PCR)检测HepG2和g2car细胞中CAR mRNA和CYP2B6 mRNA的表达,应用体外细胞克隆培养法评价MMC和629对HepG2和g2car细胞在有氧和乏氧条件下的辐射增敏效应。同时,应用流式细胞技术检测629对两种细胞周期和细胞凋亡情况的影响。结果显示:在乏氧情况下,MMC和629对HepG2细胞的辐射增敏效应均高于单纯乏氧组,低于单纯有氧组,并且629的辐射增敏效应高于其母体化合物MMC,转染CAR后,两者的辐射增敏效应均增加;629在低浓度时对细胞周期和细胞凋亡的影响不大,高浓度时可改变细胞周期和诱导细胞凋亡的发生。表明:629较其母体化合物MMC具有较高的辐射增敏效应,并且转染CAR基因可在转录水平调节药物的代谢,以增加细胞的辐射增敏效应。

茵栀黄对结构性雄甾烷受体CAR介导CYP3A4的转录调节作用

目的:探讨茵栀黄对CYP3A4转录表达的影响及机制。方法:Chang Liver细胞中加入0.01、0.1和1μM茵栀黄分别作用24h、36h和48h,采用RT-PCR法和报告基因方法检测CYP3A4 m RNA的表达水平。结果:不同浓度茵栀黄分别处理Chang Liver细胞24h和36h可明显升高CYP3A4 m RNA的表达水平(P<0.05);转入CAR载体的Chang Liver细胞经不同浓度茵栀黄处理36h均可激活CYP3A4的转录表达。结论:茵栀黄可能通过CAR介导增加Chang Liver细胞CYP3A4的转录表达。

滨蒿内酯基于CAR调控CYP3A4转录表达的作用机制

目的探讨滨蒿内酯对CYP3A4转录表达的影响及机制。方法人张氏(Chang Liver)细胞中加入0.01、0.10和1.00μmol/L滨蒿内酯24、36和48 h后,用半定量RT-PCR和报告基因方法检测CYP3A4表达量的改变。结果 RT-PCR方法显示不同浓度滨蒿内酯分别处理Chang Liver细胞24和36 h可诱导CYP3A4的表达,48 h后却抑制CYP3A4的表达(P<0.01)。不同浓度滨蒿内酯处理转入结构性雄甾烷受体(CAR)载体的细胞可激活CYP3A4的转录表达。结论滨蒿内酯可影响CYP3A的转录表达且这种作用随药物处理时间不同而表现出双向效应,其可能机制是通过CAR所介导。