HPMo@UiO-66-SO_(3)H用于中碳链结构磷脂的高效合成

以四氯化锆、磷钼酸水合物、1,2,4,5-苯四甲酸和(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷为原料,通过原位合成法及接枝共聚法制得了负载磷钼酸的磺酸基功能化UiO-66(HPMo@UiO-66-SO_(3)H)。采用XRD、FTIR、SEM、EDS、XPS、N2吸附-脱附和TG-DTG对其进行了表征,将HPMo@UiO-66-SO_(3)H用于大豆卵磷脂与中碳链脂肪酸(辛酸和癸酸)酯交换合成富含辛酸和癸酸的中碳链结构磷脂,通过正交实验优化了反应条件,考察了HPMo@UiO-66-SO_(3)H的循环利用性。结果表明,HPMo@UiO-66-SO_(3)H具有介孔结构,并含有大量HPMo和磺酸基活性组分,且组分间的协同作用促进了中碳链结构磷脂的生成;当HPMo@UiO-66-SO_(3)H含量为大豆卵磷脂、辛酸和癸酸总质量的5%,m(大豆卵磷脂)∶m(辛酸)∶m(癸酸)=1∶10∶10,50℃下反应4 h时,中碳链脂肪酸接入率高达94.31%(辛酸和癸酸接入率分别为44.21%和50.10%);HPMo@UiO-66-SO_(3)H循环利用5次后,活性略微下降。

短碳链结构磷脂在Zn-Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)催化作用下的制备及其性能

通过溶胶-凝胶法和浸渍法制备了负载Zn的SiO_(2)包覆Fe_(3)O_(4)(Zn-Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)),采用SEM、TEM、XPS、Py-IR、VSM、EDS对其进行了表征。将Zn-Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)用于催化大豆卵磷脂(SLs)与短碳链脂肪酸(丙酸和丁酸)间的酸解反应来制备新型短碳链结构磷脂(SCSPLs)乳化剂,并对SCSPLs进行了性能测定。结果表明,核壳结构Zn-Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁性微球负载了大量的活性组分Zn,因而可高效催化制备SCSPLs,在m(SLs)∶m(C3∶0)∶m(C4∶0)=1∶4∶4、催化剂用量为原料总质量的5%、反应温度为50℃、反应时间为5 h的条件下,SCSPLs的短碳链脂肪酸接入率可高达78.15%±1.08%(丙酸和丁酸的接入率分别为35.43%±0.62%和42.72%±0.55%),且Zn-Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)可通过外加磁场进行简单分离,循环5次而无明显失活;与SLs相比,SCSPLs的乳化性、分散性和氧化稳定性均得到很大的提高。

酶法合成富含花生四烯酸结构磷脂

为利用大豆粉末人工合成多不饱和脂肪酸(PUFA),在正己烷体系中,以脂肪酶Lipozyme RM IM催化花生四烯酸乙酯(92.6%)与大豆粉末磷脂进行酯交换反应,制备富含花生四烯酸(ARA)的结构磷脂。系统考察了酶促反应温度、反应时间、酶添加量及底物摩尔比对花生四烯酸结构磷脂中ARA结合率的影响。在单因素实验的基础上,通过响应面方法对合成富含ARA结构磷脂的工艺参数加以优化。经分析验证得到最佳工艺参数为:反应温度55.6℃,反应时间25.1h,酶添加量15.3%,底物摩尔比1∶10.1。在此最优条件下,富含ARA结构磷脂的产率为13.26%,ARA的结合率达15.42%。此外,通过质谱鉴定了合成产物中的卵磷脂(PC)分子种类。

磺酸基功能化C/Si材料催化合成短碳链结构磷脂

通过化学活化有机磺酸前驱体,低温下制备了磺酸基功能化碳/硅材料(C/Si-SO_(3)H),并将其用于大豆卵磷脂与丙酸乙酯或丁酸甲酯催化合成短碳链结构磷脂的反应中,考察了反应温度、反应时间、催化剂用量及循环次数对该酯交换反应的影响。采用FTIR、Raman及Boehm酸含量滴定等手段对C/Si-SO_(3)H进行结构和表面酸性质表征,以建立该催化剂的构效关系。结果表明,C/Si-SO_(3)H表面含有大量Bronsted酸性位点,因而催化性能较为突出;当催化剂用量为反应原料总质量的7%、40℃反应6 h,短碳链结构磷脂中丙酸或丁酸的接入率高达18.33%或16.23%,且C/Si-SO_(3)H循环利用4次而无明显失活。

磷脂酶A_1(Lecitase~ Ultra)催化合成富含α-亚油酸结构磷脂研究

在正己烷体系中,酶催化亚油酸与大豆粉末磷脂进行酯交换反应,制备富含α-亚油酸结构磷脂。从三种常用固定化脂肪酶,一种液态脂肪酶和一种液态磷脂酶中筛选出其中最优磷脂酶A1(Lecitase Ultra)催化合成结构磷脂。通过单因素和正交优化试验得出最优反应条件为:大豆磷脂质量浓度0.20 g/mL、底物物质量比(亚油酸/磷脂)为4∶1、酶添加量(以磷脂质量计,v/w)18%、反应时间24 h、反应温度53℃;在此条件下,获得结构磷脂产品α-亚油酸含量可达77.09%。

富含EPA/DHA型结构磷脂的酶法合成条件优化及表征

为建立富含二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)型结构磷脂的制备方法,本试验以南极磷虾磷脂为原料,以EPA和DHA总结合率为指标,通过响应面法优化富含EPA/DHA型结构磷脂的酶法合成反应参数,并采用气相色谱(GC)和亲水作用色谱-质谱联用(HILIC-MS)技术对其结构进行表征。结果表明,最优酶催化反应条件为:底物质量比(游离脂肪酸∶磷脂,m/m)5.15,反应温度55.22℃,水分添加量(以反应底物总质量计)0.92%,酶添加量(以反应底物总质量计)20%,正己烷3 mL,反应时间24 h,所得结构磷脂中EPA/DHA结合率达64.35%;经GC和HILIC-MS综合分析可知,结构磷脂中磷脂酰胆碱(PC)亚类40:10(20:5/20:5)(18.46%),42:11(20:5/22:6)(12.78%)和38:6(18:1/20:5&16:0/22:6)(7.07%)等分子种含量较高;溶血磷脂酰胆碱LPC亚类20:5(20:5/0:0)(34.40%),22:6(22:6/0:0)(25.99%)和O-16:0(O-16:0/0:0)(10.22%)等分子种含量较高;结构磷脂的PC和LPC组分中脂肪酸单链平均长度≥20的分子种相对含量较原料磷脂分别提高了33.12和37.28个百分点;结构磷脂的PC组分中双键数≥5和双键数≥10的分子种相对含量较原料磷脂分别提高了24.89和27.53个百分点,表明该方法有效提高了结构磷脂中EPA和DHA的含量。本研究结果为进一步探索和丰富酶促合成EPA/DHA型结构磷脂的机理和实践提供了一定的数据支持。

脱血红素细胞色素c的自发插膜能力与磷脂结构的关系

应用气-液界面单分子层实验模型对脱血红素细胞色素c的自发插膜能力与磷脂分子结构间的关系进行了研究。脱血红素细胞色素c对5种带有不同极性头部磷脂单分子层的插入能力为:DMPG>DMPS>DMPA>DMPE>DMPC。磷脂碳氢链长度及饱和度的变化对脱血红素细胞色素c插入磷脂单分子层能力的影响随磷脂极性头部的不同而不同。对以上实验结果分析表明,脱血红素细胞色素c的有效插膜依赖于静电相互作用。

酯酶催化法合成结构化磷脂的研究进展

着重对国内外应用酯酶催化法制备结构化磷脂的研究成果进行了综述,主要从制备方法与原理、常用酯酶种类及反应过程优化等方面进行系统的总结和探讨,以期为相关领域的研究提供参考和借鉴。

含patatin样磷脂酶结构域蛋白7通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ促进巨噬细胞M2型极化

溶血磷脂酰胆碱(LPC)在免疫反应、组织炎症和重塑中调控巨噬细胞极化的动态和整体过程。含patatin样磷脂酶结构域蛋白7(PNPLA7)是近年发现的优先水解LPC的溶血磷脂酶。然而,直到现在仍不清楚PNPLA7在巨噬细胞极化中的表达和作用。本研究发现,PNPLA7在白细胞介素4(IL-4)刺激的巨噬细胞向替代激活(M2)表型的极化过程中上调(P<0.05)。本文发现,PNPLA7的敲低和过表达分别降低和增加了M2标记基因,包括精氨酸酶1(Arg1)和类几丁质酶3(Ym1)的表达(P<0.05)。进一步的研究表明,PNPLA7在M2极化过程中调节过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在mRNA和蛋白质水平上的表达(P<0.05)。然而,信号转导和转录激活因子6(STAT6)的磷酸化不受PNPLA7的影响。这些发现表明,PNPLA7通过PPARγ相关机制促进巨噬细胞抗炎M2型极化。

海洋球石藻(Emiliania huxleyi)磷脂酶C的结构特点及系统进化分析

磷脂酶C(phospholipase C,PLC)作为一种重要的细胞信号分子,是G蛋白信号转导过程中的重要调节因子之一,在动、植物环境胁迫应答及病原菌致病过程中发挥重要作用。海洋浮游植物生长代谢与环境因子之间的相互作用涉及细胞内复杂的信号通路,并最终通过调节细胞分裂过程控制浮游植物的增殖、种群生长动力及初级生产力。但对浮游植物PLC及其参与的信号通路的了解却非常少。通过NCBI基因数据库的关键词搜索、比对,发现海洋球石藻(Emiliania huxleyi)中含有30种PLC蛋白,利用SMART程序预测其结构保守域,以此将30种PLC分为四大类;对其氨基酸序列的信号肽、跨膜结构域、一级结构、二级结构、三级结构及其细胞定位等进行了生物信息学分析和预测。结果表明,海洋球石藻PLC具有丰富的多样性,它们在信号肽、跨膜区等方面均有一定的差别,其一级结构中存在多个可能的磷酸化修饰位点。二级结构中都含有α螺旋,β折叠,无规则卷曲,且都定位于线粒体,而三级结构相似度不高。从亲缘关系上看,海洋球石藻PLC与低等动物更接近。该研究补充和完善了对植物PLC信号转导网络系统的认识,并为进一步开展海洋球石藻PLC细胞定位及其参与的信号通路与环境胁迫之间关系的研究提供了重要的理论指导。

大豆油脱臭过程中磷脂结构变化初探

本文探讨了不同脱胶程度的水化大豆油在脱臭过程中,磷脂含量变化的起因。1脱臭对大豆油中总磷含量没有影响,并且总磷含量与280℃加热试验不相关;2脱臭可不同程度使磷脂分解,导致脱臭后磷脂含量降低,一般加热260℃出现析出物的水化大豆油脱臭后280℃加热试验均无析出物出现;3脱臭可使大豆油中无机磷含量相对增加。

响应面优化脂肪酶催化酸解合成共轭亚油酸磷脂

采用商业化脂肪酶Lipozyme RM IM作为生物催化剂,催化共轭亚油酸(CLA,80%)和大豆磷脂(PC90)酸解反应合成富含CLA的结构磷脂。利用响应面分析方法研究了在正己烷溶剂体系中,底物摩尔比、酶用量、反应温度和反应时间对产物中CLA含量的影响。通过分析验证得到最佳反应条件为:CLA与大豆磷脂的摩尔比6∶1,酶用量30%(以底物总质量计),反应温度48℃,反应时间64 h。在最佳反应条件下,产物中CLA的含量为24.18%。

膜联蛋白Ⅰ的结构和功能

膜联蛋白Ⅰ (annexinⅠ )是annexins蛋白超家族中的一员 ,是结构相关钙离子依赖的磷脂结合蛋白 .具有annexins超家族所共有的中心结构域和承担各自独特功能的N端结构域 .通过调控细胞内磷脂囊泡的聚集、炎症反应和磷脂酶A2的活性而参与细胞信号传导、细胞分化和细胞凋亡等细胞重要的生命过程 .

patatin样磷脂酶结构域蛋白3基因rs738409多态性在代谢相关脂肪性肝病诊疗中的应用研究进展

代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)是一种以肝脏脂肪蓄积为特征的疾病,是终末期肝病、原发性肝癌、肝移植的重要原因。MAFLD影响了全球约1/4的人口,给公共卫生带来了巨大的负担。遗传因素与环境因素在MAFLD发生发展中共同发挥作用,其中patatin样磷脂酶结构域蛋白3(PNPLA3)基因rs738409多态性是MAFLD发生发展的决定性遗传因素之一。该文就PNPLA3基因rs738409多态性在MAFLD发生发展中的作用机制,以及其在MAFLD的预测、诊断及治疗中的应用研究进展进行阐述。

仿天然卵磷脂皮革加脂剂的研制

研究了以菜籽油为原料 ,合成具有天然卵磷脂结构的皮革加脂剂的原理及方法。详细讨论了磷酸化反应的工艺条件。

不同patatin样磷脂酶结构域蛋白3I148M基因型对肝癌细胞增殖的影响

目的 探讨含patatin样磷脂酶结构域蛋白3（PNPLA3）野生型148I/I及突变型148M/M对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及相关机制.方法 构建PNPLA3148I/I及148M/M慢病毒稳定过表达及阴性对照细胞株即过表达PNPLA3野生型148I/I HepG2细胞、过表达PNPLA3突变型148M/M HepG2细胞和阴性病毒对照（NC）HepG2细胞.细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK8）检测不同细胞株的活力,5-乙炔基-2′脱氧尿苷（EdU）法检测细胞增殖情况,Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信号通路的蛋白水平,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测与增殖相关的PNPLA3代谢产物花生四烯酸（AA）、溶血磷脂酸（LPA）,实时荧光定量PCR检测PNPLA3相关增殖指标前列腺素过氧化物合酶2（PTGS2）和过氧化物酶体增殖物激活受体 γ辅助活化因子1α（PGC1α）mRNA表达水平.结果 过表达PNPLA3148M/M组比过表达PNPLA3148I/I组细胞活力高,差异有统计学意义[（98.02±1.29）％比（71.51±2.89）％,P〈0.001],与NC相比差异无统计学意义[（98.02±1.29）％比（100±2.61）％,P=0.181].过表达PNPLA3148M/M组细胞增殖活性较过表达PNPLA3148I/I组高,差异有统计学意义（46.46±1.83比35.96±2.65,P=0.001）,与NC组相比差异无统计学意义（46.46±1.83比46.64±7.33,P=0.965）.过表达PNPLA3148M/M组较过表达PNPLA3148I/I组PGC1αmRNA表达水平,总PI3K、PThr-308蛋白激酶B（PThr-308 AKT）、PSer2448-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PSer2448-mTOR）、PGC1α蛋白表达水平增高,但AA和LPA水平以及PTGS2 mRNA表达水平两组差异无统计学意义.结论 PNPLA3148M/M细胞增殖作用较PNPLA3148I/I强.

外周血PNPLA3 rs738409基因多态性与非酒精性脂肪性肝病遗传易感性研究

目的分析patatin样磷脂酶结构域蛋白3(PNPLA3)rs738409基因多态性与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)遗传易感性的关系。方法2017年11月~2019年11月我院诊治的162例NAFLD患者和同期体检的100例健康人,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性检测外周血PNPLA3 rs738409位点多态性。结果NAFLD组PNPLA3基因rs738409位点GG基因型频率为37.0%,G等位基因频率为58.3%,显著高于健康人(分别为11.0%和34.0%,P<0.05),而GC和CC基因型频率分别为42.6%和20.4%,C等位基因频率为41.7%,与健康人的46.0%、43.0%和66.0%比,差异无统计学意义(P>0.05);73例GG基因型的NAFLD患者血清ALT和AST水平分别为(118.5±20.3)U/L和(85.2±14.7)U/L,显著高于65例GC基因型患者[分别为(93.3±16.4)U/L和(59.6±10.3)U/L,P<0.05]或24例CC基因型患者[分别为(65.9±11.8)U/L和(31.9±5.5)U/L,P<0.05];GG和GC基因型NAFLD患者血清TG水平分别为(2.0±0.5)mmol/L和(1.6±0.4)mmol/L,均显著高于CC基因型NAFLD患者[(1.1±0.2)mmol/L,P<0.05]。结论本研究结果提示PNPLA3 rs738409基因多态性与NAFLD遗传易感性有关,其影响机制有待进一步研究明确。

LYPD8在结直肠癌中的表达及其生物学功能

目的探讨含有Ly6/Plaur结构域的高度糖基化的磷脂酰肌醇锚定蛋白8(LYPD8)在结直肠癌(CRC)中的表达及其生物学功能。方法将收集自2015年3月至2016年9月在温州医科大学附属新昌医院的40例CRC患者的CRC组织与相应的癌旁结直肠组织以及正常结直肠组织进行比较,检测不同临床分期患者CRC组织中LYPD8 mRNA表达,STAT3、p65的磷酸化水平以及IL-6、TNF-α的分泌水平;同时利用真核表达载体(pIRES2)构建过表达LYPD8的质粒DNA,检测LYPD8过表达对CRC细胞增殖和迁移的影响。结果与正常组织和癌旁组织相比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期CRC患者癌组织中LYPD8 mRNA表达水平均明显降低(均P<0.05),其中Ⅲ期患者降低最明显(P<0.05)。CRC组织中STAT3/p65磷酸化水平及IL-6、TNF-α水平均明显增加(均P<0.05)。SW480细胞中LYPD8过表达,其存活凋亡百分比明显降低(P<0.05),迁移个数明显减少(P<0.05)。结论LYPD8在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者CRC组织中的表达较癌旁组织及正常组织明显降低;LYPD8在CRC细胞中通过诱导STAT3、p65去磷酸化,抑制TNF-α、IL-6的分泌,从而抑制CRC细胞的增殖和迁移。

人造细胞内蛋白质合成的研究进展

无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种在体外快速合成目标蛋白质的方法,通过构建含有CFPS系统的人造细胞,能够实现蛋白质的高通量表达和功能性膜蛋白的体外重构.本文详细综述了4种CFPS系统(包括大肠杆菌裂解液、兔网织红细胞裂解液、小麦胚芽提取物、酵母提取物)的适用范围和优缺点,总结了基于CFPS系统构建的人造细胞体系内蛋白质合成的研究现状,以及该领域面临的挑战及未来的发展方向.

应用“GSEA-WGCNA-验证”整合策略分析类风湿关节炎肝肾亏虚证的生物标志物研究

目的应用基因集富集分析(GSEA)和加权基因共表达网络分析(WGCNA)发现类风湿关节炎(RA)肝肾亏虚证的候选生物标志物,并进行临床验证,探讨RA肝肾亏虚证的生物学基础。方法临床收集RA肝肾亏虚证(3例)、7个非肝肾亏虚证(各3例)及健康志愿者(4名)的全血样本,开展转录组学测序。以健康志愿者为对照,筛选RA肝肾亏虚证的差异表达基因集进行富集分析和功能注释。以RA非肝肾亏虚证患者和健康志愿者为对照,对转录组表达谱开展GSEA和WGCNA联用挖掘,将获取的关键差异表达基因作为RA肝肾亏虚证的候选生物标志物。利用独立临床验证集样本(每组≥12例)对候选生物标志物的表达水平进行qPCR检测,采用受试者操作特征(ROC)曲线等评价其辨证效能。结果RA肝肾亏虚证的差异表达基因富集于“免疫-炎症”相关通路、细胞调控相关通路和代谢相关通路,同时,还参与肝肾发育和代谢等生物过程。转录组表达谱的GSEA富集结果表明,与非肝肾亏虚证组相比,肝肾亏虚证组的差异表达基因更明显地参与肝功能(脂质、血液)代谢调节,肾功能(水盐、激素)代谢调节和神经系统调节相关的作用通路。WGCNA分析使转录组表达谱的17010个基因被分为了19个特征模块,其中3个特征模块与肝肾亏虚证呈明显正相关(r>0.300,P<0.05),其生物功能以“免疫-炎症”调节为主。整合GSEA和WGCNA分析结果后,选取变异系数、作用通路和生物模块代表性均排名前50%的3个关键基因[花生四烯酸5-脂氧合酶(ALOX5)、含Patatin样磷脂酶结构域蛋白8(PNPLA8)及抗沉默功能1(ASF1A)]作为RA肝肾亏虚证的候选生物标志物。验证结果显示:ALOX5、PNPLA8和ASF1A的辨证敏感度分别为88.89%、100.00%和100.00%,特异度分别为84.51%、76.47%和78.69%,准确度分别为85.00%、79.49%和80.00%,精确度分别为88.89%、100.00%和100.00%,ROC曲线下面积值分别为0.860、0.910和0.900。结论应用“GSEA-WGCNA-验证”整合策略,发现了RA肝肾亏虚证的新型生物标志物,有助于提高RA核心证候临床精准化诊断的水平和证候客观化研究的深度。