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猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中的表达及鉴定 被引量:1
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作者 李儒曙 苏惠龙 +1 位作者 刘宇 张健騑 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第6期11-15,共5页
为获得大量的猪瘟病毒重组蛋白抗原,本文构建了猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域原核重组表达质粒pET-32a(+)-ABCD,对该重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中的表达产量进行了比较分析,并采用胶体金免疫层析和蛋白质免... 为获得大量的猪瘟病毒重组蛋白抗原,本文构建了猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域原核重组表达质粒pET-32a(+)-ABCD,对该重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中的表达产量进行了比较分析,并采用胶体金免疫层析和蛋白质免疫印迹鉴定重组蛋白的反应原性。结果表明重组质粒pET-32a(+)-ABCD在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中均可以获得可溶性表达,目的蛋白表达量分别占总蛋白量的比例为11.4%和19.7%,大肠杆菌Rosseta(DE3)作为表达宿主菌更高效,且重组蛋白具有反应原性。该研究为猪瘟病毒重组蛋白抗原的制备提供了参考。 展开更多
关键词 e2蛋白ABCD抗原结构 BL21(De3)和Rosseta(De3) 表达 鉴定
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E3泛素连接酶WWP2通过蛋白酶体途径调控p21的稳定性 被引量:1
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作者 董超 张丽君 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1126-1130,共5页
目的 探讨含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2 (WWP2)调控p21稳定性的潜在作用机制。方法 通过免疫共沉淀及Western blotting检测HEK 293T细胞中WWP2与p21的结合情况。用蛋白酶体抑制剂(MG132)和放线菌酮(CHX)处理过表达或敲减WWP2 HEK 293... 目的 探讨含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2 (WWP2)调控p21稳定性的潜在作用机制。方法 通过免疫共沉淀及Western blotting检测HEK 293T细胞中WWP2与p21的结合情况。用蛋白酶体抑制剂(MG132)和放线菌酮(CHX)处理过表达或敲减WWP2 HEK 293T细胞0、4、8 h,通过Western blotting检测p21的表达情况。结果 WWP2与p21间存在结合。过表达WWP2的293T细胞中,p21的表达水平明显降低,且随WWP2表达量增加逐渐降低。敲减WWP2的293T细胞中,p21表达水平增加。随着CHX作用时间延长,对照组和实验组的p21表达水平均逐渐下降。过表达组p21半衰期较对照组缩短;敲减组p21半衰期较对照组延长。随着MG132作用时间延长,对照组和实验组p21表达水平均逐渐上升。空载组较过表达组、敲减组较对照组p21积累均更显著。结论 E3泛素连接酶WWP2可与p21结合,并通过蛋白酶体途径降解p21。 展开更多
关键词 含WW结构域的e3泛素蛋白连接酶2 P21 泛素化
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牛病毒性腹泻病毒E2基因生物信息学分析及可溶性表达 被引量:1
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作者 赵洪哲 李新培 +4 位作者 范峻豪 宋前进 张静 关平原 温永俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期63-67,共5页
为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽... 为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽序列后合成并连接到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-Opti-E2;转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌,经SDS-PAGE和Western blot分析,成功获得大小为43 kDa的BVDV E2基因的最佳可溶性蛋白,且该蛋白特异性较好。本试验E2蛋白的成功表达可为后续ELISA方法的建立和亚单位疫苗的开发奠定基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 囊膜结构蛋白e2 原核表达
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Expression of Structural Protein E2 of Hepatitis C Virus
4
作者 GUO Tai - lin YE Lin- bo MAO Can - quan 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第4期11-15,共5页
The E2 glycoprotein is one of the structural components of the hepatitis C virus (HCV) virion. It elicits production of neutralising antibodies against the virus, and is involved in viral morphogenesis. The protein is... The E2 glycoprotein is one of the structural components of the hepatitis C virus (HCV) virion. It elicits production of neutralising antibodies against the virus, and is involved in viral morphogenesis. The protein is considered as a major candidate for anti-HCV vaccine. Despite this, little is known about this protein. Previous studies have focused on the and functional analysis of the glycosylated forms. This report describes expression of the E2 (recE2) in different forms and in different expression systems in Escherichia coli cells and in mammalian cells in order to obtain enough protein efficiently in vitro, in addition we also analysed the usage of rare codons in the genes of E2 and CORE. All results have shown that great efforts should be made to improve the expression efficiency of E2 in bacteria or mammalian cells. 展开更多
关键词 结构蛋白e2 基因表达 丙型肝炎病毒 病毒感染 病理机制
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盖塔病毒E2结构域蛋白的原核表达及抗血清制备 被引量:2
5
作者 仇相书 史宁 +5 位作者 朱翔宇 任世斌 张海森 李海 鲁会军 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1506-1511,共6页
甲病毒属病毒E2结构蛋白是一种保守的受体结合蛋白,包含与免疫原性、组织噬性及宿主感染范围相关的重要残基。本试验以盖塔病毒(Getah virus,GETV)SD17/09株为模板设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增E2结构域基因(E2d),扩增产物E2d连接... 甲病毒属病毒E2结构蛋白是一种保守的受体结合蛋白,包含与免疫原性、组织噬性及宿主感染范围相关的重要残基。本试验以盖塔病毒(Getah virus,GETV)SD17/09株为模板设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增E2结构域基因(E2d),扩增产物E2d连接至原核表达载体pET-22b(+)融合表达,利用SDS-PAGE及Western blot方法分析表达产物。以His-Bind亲和层析柱纯化E2d蛋白,免疫新西兰兔获得阳性血清,通过血清中和方法检测血清效价,并通过Western blot分析其活性。结果显示,在预期38 kDa处出现目的条带,表明E2d基因成功表达,表达产物以包涵体形式大量存在;免疫后24 d多抗血清中和效价达1∶4096,能与重组蛋白E2d和GETV SD17/09株发生特异性反应。本试验成功应用大肠杆菌表达GETV E2d蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得兔源阳性血清,为开展GETV E2蛋白结构域的功能研究、诊断方法的建立和疫苗研发奠定基础。 展开更多
关键词 盖塔病毒 e2结构蛋白 原核表达 兔阳性血清
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具有免疫反应性的猪瘟病毒多表位基因在大肠杆菌中的克隆表达和鉴定 被引量:1
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作者 侯相民 田宏 +2 位作者 尚佑军 田永强 刘湘涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期6-10,共5页
将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX-BT21转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,表达产... 将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX-BT21转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析法纯化目的蛋白和Western blot分析其免疫学活性。结果表明:融合蛋白GST-BT21以可溶形式表达,分子量约为33kDa,与预期大小相符,纯化的重组蛋白可被猪瘟病毒阳性血清所识别,具有良好的免疫学活性。从而为进一步研究该融合蛋白的免疫特性和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2结构蛋白 多表位抗原 抗原活性
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基因多态性与急性一氧化碳中毒后迟发性脑病的关联研究 被引量:3
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作者 张帆 曾皎 +5 位作者 李文强 韩永凯 张萍 王旭生 顾家鹏 顾仁骏 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期485-489,共5页
目的探讨含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)基因的2个单核苷酸多态性位点(rs3790088、rs4247109)与急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(DEACMP)潜在的关联性,探寻引起DEACMP的遗传易感基因。方法选择2006年11月至2017年12月就诊的急性一... 目的探讨含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)基因的2个单核苷酸多态性位点(rs3790088、rs4247109)与急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(DEACMP)潜在的关联性,探寻引起DEACMP的遗传易感基因。方法选择2006年11月至2017年12月就诊的急性一氧化碳中毒(ACMP)昏迷抢救成功患者,共235例DEACMP患者和429例ACMP患者,ACMP患者均随访90 d以上且未发生DEACMP。采用血液基因组DNA提取试剂盒进行外周血DNA提取;运用Sequenom分型检测技术分析WWP2基因多态性与DEACMP的遗传易感性。DEACMP患者入院后每3 d评估一次《长谷川痴呆量表》(HDS)和《日常生活能力量表》(ADL),评估患者智力和生活能力受损程度。基因型分布是否符合Hardy-Weinderg平衡定律用拟合优度χ^2检验,两组患者基因关联性分析采用2×2四格表或2×3列联表χ^2检验,共显性遗传模式用2×3列联表χ^2检验。结果rs3790088位点包含226例DEACMP患者和414例ACMP患者,rs4247109位点包含234例DEACMP患者和428例ACMP患者。DEACMP和ACMP患者各基因型Hardy-Weinberg平衡检验差异无统计学意义(P>0.05)。DEACMP与ACMP患者rs3790088和rs4247109位点基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。按性别分组后,DEACMP与ACMP患者rs3790088和rs4247109位点基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。三种遗传模式(共显性遗传、显性遗传、隐性遗传)下rs3790088和rs4247109位点基因型与DEACMP发病无关联(P>0.05)。结论WWP2基因的2个单核苷酸多态性位点(rs3790088、rs4247109)和DEACMP的发病尚无法确定存在遗传相关性。 展开更多
关键词 一氧化碳中毒 迟发性脑病 多态性 单核苷酸 含WW结构域的e3泛素蛋白连接酶2
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