改良抗酸染色和结核与非结核基因检测在结核病病理诊断中的应用比较

目的比较分析改良抗酸染色和结核与非结核基因检测在结核病病理诊断中的差异。方法收集赣州市第五人民医院2020年1-12月确诊肺结核患者96例,组织经病理常规取材、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红(HE)染色,之后进行改良抗酸染色与结核与非结核基因检测。结果96例肺结核患者病理中,抗酸染色阳性例数48例,阳性率50%;结核与非结核基因检测结核阳性例数70例,阳性率73%,差异有统计学意义(P<0.05);两种方法联合检测阳性例数75例,阳性率78%,与基因检测相比,差异无统计学意义(P>0.05),与改良抗酸染色相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在结核病病理诊断中,结核与非结核基因检测阳性率显著高于改良抗酸染色法,两种方法联合检测更有利于提高确诊率。

改良抗酸染色、结核与非结核基因检测对结核病的病理诊断分析

探究改良抗酸染色、结核与非结核基因检测对结核病的病理诊断的临床价值。方法 选取本院100例2020年1月-2022年12月本院确诊的肺结核患者,对所有研究对象进行改良抗酸染色、结核与非结核基因检测,分析两种检测方式在肺结核诊断中的应用价值。结果 ①本研究所选的100例患者中,男性53例,女性47例,年龄19-76岁,平均(47.22±10.44)岁;肺内结核59例,占比为59.00%,胸膜结核22例,占比为22.00%,肺及胸膜外结核19例,占比为19.00%。②本研究所选的100例患者中,双项阳性的病例总共50例,单项检测阳性为35例(改良抗酸染色检测6例、结核与非结核基因检测29例),总阳性检出率为85.00%(85/100)。改良抗酸染色检测发现阳性56例,占比为56.00%;结核与非结核基因检测阳性79例,占比为79.00%。结核与非结核基因检测阳性率高于改良抗酸染色检测(P<0.05)。结论 在对结核病进行病理诊断时,与改良抗酸染色相比,结核与非结核基因检测的阳性检出率更高,临床应用价值更高。

荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用研究

探讨在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,观察分析应用价值。方法 本研究的时长段在2022年6月到2023年6月,统共1000例结核患者接受治疗,所有病患都拓展了抗结核药物的测验,且每一位患者的标本均予以荧光定量PCR探针熔解曲线法检测,药物敏感性测定结果为黄金基准,考察判辨荧光定量PCR探针熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的诊断效能。结果 针对1000例的标本中,经过液体药敏试验检测显示对利福平药物耐药例数250例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者;对异烟肼医药有耐药性的液体药敏试验500例,应用溶解曲线检测耐药性包含了470例;经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数170例,予以熔解曲线法显示耐药140例。经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数300例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者。熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的灵敏度分别为84.00%、84.00%、47.06%、66.67%;特异度分别为96.00%、90.00%、84.34%、94.29%;准确度分别为93.00%、97.00%、91.00%、86.00%。结论 在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,可得到较高的应用价值,灵敏度、特异度、准确度较高,可筛查结核病患者对利福平、异烟肼、乙胺丁醇等药物的耐药性,为临床治疗疾病提供可靠的依据。

耐多药结核病实验室检测技术进展

耐多药结核病(MDR-TB)是指对包含异烟肼和利福平同时在内的至少2种以上一线抗结核药物耐药的结核病,其严重威胁着人类的健康和生命,因此早期快速检测耐药情况是MDR-TB患者有效治疗的关键。当前临床MDR-TB诊断主要以表型药物敏感性试验(pDST)检测为主,但pDST检测耗时长,一定程度上延误患者最佳治疗时机,而基因型药物敏感性试验(gDST)则能在较短时间内完成耐药检测。目前在MDR-TB诊断的研究中,pDST检测联合gDST检测是研究热点,但仍处于探索阶段,缺少多中心、大样本、前瞻性研究报道。该文对MDR-TB的实验室检测技术进行综述,以期使读者深入了解MDR-TB的诊断现状及未来研究方向,为MDR-TB的快速诊断及治疗提供参考或借鉴。

组织Gene-xpert MTB/RIF基因检测技术在结核病诊断中的应用研究

目的:探讨组织Gene-xpert MTB/RIF基因检测技术在结核病诊断中的应用价值。方法:选择2022年6月至2024年2月我院收治的130例疑似结核病患者作为研究对象,取研究对象晨间痰液样本分别进行痰涂片镜检、罗氏固体培养检测、支气管黏膜组织、胸膜组织Gene-xpert MTB/RIF基因快速检测。以罗氏固体培养检测结果为金标准,分析痰涂片镜检与不同组织Gene-xpert MTB/RIF基因快速检测对结核病诊断结果的一致性;比较不同检查方式对结核病诊断效能的差异。结果:罗氏固体培养检测发现130例疑似结核病患者中,确诊为结核病的患者共72例,非结核病患者共58例,阳性率与阴性率分别为55.38%、44.62%。Kappa检验分析结果显示,痰涂片镜检与胸膜组织Gene-xpert MTB/RIF基因快速检测对结核病的诊断结果与临床实际结果均存在一般的一致性,而支气管黏膜组织Gene-xpert MTB/RIF基因检测对结核病的诊断结果与临床实际结果有较高的一致性(Kappa值分别为0.679、0.722、0.925)。支气管黏膜组织Gene-xpert MTB/RIF基因检测对结核病的诊断效能数据明显高于胸膜组织检测与痰涂片镜检(P<0.05)。结论:支气管黏膜组织Gene-xpertMTB/RIF基因检测技术在结核病诊断中的应用更好,可为结核病的临床诊断提供更为准确的数据参考,对后续治疗方案的及早制定与实施均具有指导意义。

痰涂片镜检、基因芯片技术及GeneXpert MTB/RIF对疑似肺结核患者的检测效能分析

目的分析痰涂片镜检、基因芯片及多色巢式荧光定量聚合酶链反应(GeneXpert MTB/RIF)对疑似肺结核患者的检测效能。方法选取2017年1月至2022年12月该院收治的疑似肺结核患者97例作为研究对象,均实施痰涂片镜检、基因芯片、GeneXpert MTB/RIF及痰液罗氏培养检查。以痰液罗氏培养结果为金标准,探究不同检测方式及联合检测对疑似肺结核的诊断效能,采用Kappa值检验与金标准诊断结果的一致性。结果痰液罗氏培养检测结果显示,97例疑似肺结核患者阳性55例,阴性42例,阳性检出率为56.70%(55/97)。痰液罗氏培养检出非结核分枝杆菌18株,包括鸟分枝杆菌4株,胞内分枝杆菌9株,偶发分枝杆菌1株,堪萨斯分枝杆菌3株,海分枝杆菌1株。痰涂片镜检检出阳性34例,真阳性29例,阳性检出率为35.05%(34/97),基因芯片检出阳性41例,真阳性37例,阳性检出率为42.27%(41/97);GeneXpert MTB/RIF检出阳性44例,真阳性37例,阳性检出率为45.36%(44/97)。基因芯片、GeneXpert MTB/RIF灵敏度、准确率高于痰涂片镜检,基因芯片与GeneXpert MTB/RIF敏感度一致,但基因芯片特异度高于GeneXpert MTB/RIF。非结核分枝杆菌中,痰涂片镜检检出鸟分枝杆菌1株、胞内分枝杆菌2株,基因芯片检出胞内分枝杆菌1株,GeneXpert MTB/RIF检出鸟分枝杆菌1株。痰涂片镜检、基因芯片、GeneXpert MTB/RIF三项联合检出阳性55例,真阳性53例,三项联合检测灵敏度为96.36%(53/55)、特异度为95.24%(40/42)、准确率为95.88%(93/97),均高于单一方法检测的灵敏度与准确率,差异均有统计学意义(P<0.05)。痰涂片镜检与痰液罗氏培养一致性为68.04%(Kappa=0.59);基因芯片与痰液罗氏培养一致性为77.32%(Kappa=0.70);GeneXpert MTB/RIF与痰液罗氏培养一致性为74.23%(Kappa=0.66);三项联合与痰液罗氏培养一致性为95.88%(Kappa=0.89)。结论较GeneXpert MTB/RIF、痰涂片镜检技术,基因芯片诊断效能及一致性更高,且3种技术联合诊断效能更高,临床可根据需求选择适宜诊断技术。

探究结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值

研究、分析结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值。方法 抽取2023年1月至2024年1月我院收治的耐药肺结核患者(40例),均分为对照组、研究组,各20例,分别实施常规药敏试验、结核分枝杆菌耐药基因检测。结果 研究组耐药检出准确率较高,反观对照组则相对较低,组间有统计学意义(P<0.05);研究组基因突变检出率高于对照组(P<0.05)。结论 在耐药肺结核的治疗中,结核分枝杆菌耐药基因检测的应用价值明显,可为治疗方案的制定或调整提供可靠依据,值得推广。

基因组学技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用

探讨基因组学技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值。方法 本研究病例入组时间为2023年1月至2024年1月,收集94例确诊为结核分枝杆菌感染的患者痰液样本,并提取核酸。应用QIAamp DNA 微量提取试剂盒对菌株标本的链霉素、利福平、异烟肼、乙胺丁醇、阿米卡星以及莫西沙星的耐药情况进行检测分析,结果 与传统方法进行比对分析。结果 基因组学检测组对链霉素、利福平、异烟肼、乙胺丁醇、阿米卡星以及莫西沙星的符合率为90.48%、82.14%、83.33%、88.09%、89.29%、98.24%。Kappa检验结果显示,方法 对利福平的检测结果一致性较高,Kappa值为0.781。结论 基因组学技术在结核分枝杆菌耐药性检测中具有较高的敏感性和特异性,为临床耐药结核病的快速诊断和个性化治疗提供了重要支持。

耐药基因检测在初次复治肺结核患者中的应用价值

目的研究耐药基因检测在初次复治肺结核中的临床价值。方法选取河北省胸科医院2014年1月—2015年12月收治的初次复治时痰液或支气管肺泡灌洗液浓缩集菌抗酸染色阳性的肺结核患者128例,采用BACTEC MGIT 960培养基对痰标本进行培养,同时分别选取高浓度和低浓度异烟肼(INH)和利福平(RFP)进行药敏试验,并采用基因芯片法对药敏阳性菌株进行耐药基因突变检测,分析药敏阳性菌株的耐药基因突变率。结果 128例初次复治肺结核患者中,对RFP的耐药率为25.00%,对INH的耐药率为22.66%。基因芯片检测耐RFP结核分枝杆菌的rpo B基因的符合率为96.23%、特异性为97.46%、敏感度为91.67%;基因芯片检测耐INH结核分枝杆菌的kat G基因的符合率为94.89%、特异性为98.14%、敏感度为81.94%。结论对初次复治肺结核患者耐药基因的检测,可快速、准确的检测出结核分枝杆菌耐药基因,准确推断耐药种类,为临床早期诊断及治疗提供科学指导。

基因芯片快速检测结核分枝杆菌katG基因突变及其与异烟肼耐药相关性

目的了解结核分枝杆菌katG基因S315突变与异烟肼(isoniazid,INH)耐药相关性,建立快速简便的katG基因S315突变基因芯片检测方法。方法采用二倍稀释法检测123株结核分枝杆菌临床分离菌株对INH的耐药性。PCR及测序确定上述结核分枝杆菌katG基因S315位点突变率及突变类型。根据PCR及测序结果,设计Cy3荧光标记探针并制备katG基因S315位点突变检测基因芯片。基因芯片检测结果与PCR及测序结果进行对比分析。结果 123株结核分枝杆菌临床菌株中,39.0%(48/123)菌株对INH敏感,61.0%(75/123)菌株对INH耐药。结核分枝杆菌H37Rv株及所有临床菌株均能扩增出katG基因片段。75株INH耐药菌株中,69.3%(52/75)菌株katG基因出现S315位突变,其中25株突变类型为S315N(AGC→AAC)、12株为S315T(AGC→ACC)、7株为S315I(AGC→ATC)、各有3株分别为S315T(AGC→CGC)和S315R(AGC→AGA)、2株为S315G(AGC→GGC)。所制备的基因芯片对123株结核分枝杆菌katG基因S315野生型或突变型检测结果与PCR及测序结果完全一致。结论结核分枝杆菌katG基因S315突变与INH耐药密切相关。本研究中制备的基因芯片可快速、简便、准确、敏感和特异地检测结核分枝杆菌katG基因S315突变及其类型。

应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药基因的研究

在全球范围内,结核分枝杆菌耐药率不断上升,高耐药和耐多药菌株不断出现和传播,对化疗疗效及结核病流行产生很大影响。利福平（RFP）作为1种主要的抗结核药物,对其耐药常常导致化疗失败。快速检测RFP耐药菌株对了解细菌耐药性有较大意义。我们收集了76株临床分离RFP耐药菌株，扩增rpoB基因的核心位点，并进行自主设计DNA芯片检测，并进行DNA直接测序，了解本地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征。

PCR-SSCP方法用于痰标本中结核分支杆菌rpoB基因突变检测

本文用PCR-SSCP方法直接检测痰标本中结核分支杆菌rpoB基因突变,评价此方法用于结核分支杆菌利福平耐药性试验的意义,以期建立一种直接检测分支杆菌耐利福平的快速方法。本文用PCR-SSCP方法分析了30例肺结核病人(单耐利福平或含利福平的多种耐药)和20例非结核性肺部疾病病人痰标本。30份肺结核病人的痰用PCR-SSCP检测痰中结核分支杆菌rpoB基因突变:21份痰PCR扩增阳性,其中13份SSCP图谱与参考株H_(37)RvSSCP图谱有差别,4份无差别;4份SSCP分析无条带出现SSCP分析阳性率为43.3%。而用套式PCR扩增,27份PCR扩增阳性,其中23份SSCP图谱与参考株H_(37)Rv有差别,阳性率为76.6%。20例非结核病人的痰,只有3份肺癌病人的痰rpoB基因258bp扩增阳性,其它均为阴性。PCR-SSCP成可望为直接检测临床标本中结核分支杆菌耐利福平的快速方法。

基因芯片技术及其在结核分枝杆菌菌种鉴定及耐药性检测方面的研究进展

我国是全球22个结核病高负担国家之一，目前结核病患者数量居世界第2位，仅次于印度。3月24日是“世界肺结核日”，2004年根据世界卫生组织的最新研究报告指出，结核病已跃升为人类头号杀手。我国目前现有肺结核患者约451万，其中传染性肺结核患者约200万。每年约有145万新发病例，每年因结核病死亡人数达13万，大大超过其他传染病死亡人数的总和。

基因芯片技术检测方法对耐多药肺结核治疗的指导价值研究

目的探讨基因芯片技术在肺结核耐药检测中的应用及指导临床治疗的价值。方法河北省胸科医院结核科住院的83位复治菌阳肺结核患者为选例对象,根据既往药敏试验结果,择符合条件的56例耐多药肺结核患者作为研究对象,随机分为基因芯片组24例根据基因芯片检测结果制定抗结核化疗方案,常规药敏组32例根据常规药敏试验结果制定抗结核化疗方案,观察评价两组在治疗后痰菌阴转情况及肺部病灶吸收情况。结果痰菌阴转情况基因芯片组58.3%(14/24),常规药敏组53.2%(17/32),基因芯片组略高于常规药敏组,组间相比无显著性差异(P>0.05);X线肺部病灶吸收情况基因芯片组45.9%(11/24),常规药敏组43.8%(14/32),组间相比无显著性差异(P>0.05)。结论基因芯片技术快速准确,可用于肺结核的耐药检测,指导临床用药。

多位点酶切联合SSCP方法检测结核杆菌inhA基因突变

目的 建立一种简便而有效的方法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药基因inhA突变。方法 收集结核杆菌临床菌株48株,其中异烟肼敏感株25株,耐药株23株。抽提临床菌株DNA和H37Rv标准株DNA,聚合酶链反应(PCR)方法扩增inhA基因,产物纯化后用限制性内切酶Hae Ⅱ酶切,酶切片段用单链多态构象分析(SS-CP)方法检测其单链构象。发现单链构象改变的PCR产物进行DNA测序。结果 48株菌株中,25株敏感株中未见inhA基因单链构象差异,23株耐药株中inhA基因突变率为21.8％。新发现的错义突变有:A26E、R27K、V28A、Q32A、L54V和S72T。结论 应用限制性内切酶Hae Ⅱ改良的聚合酶链反应—单链多态构象分析(PCR—SSCP)技术适用于结核临床菌株inhA基因突变的筛选。inhA基因突变位点呈多样性。

基因芯片技术在分枝杆菌菌种鉴定和结核耐药性检测中的应用及评价

目的探讨基因芯片技术在结核病快速诊疗中的应用价值。方法对抗酸染色涂片阳性的肺结核患者痰标本同时进行基因芯片菌种鉴定和BACTEC MGIT 960培养,对结核阳性的样本分别用以上两种方法检测利福平和异烟肼的耐药性。以培养法为参考方法,评价基因芯片法菌种鉴定和耐药检测的敏感度、特异度和符合率。采用Kappa检验分析两种方法的一致性。结果 656例涂片阳性的患者中,两种方法各检出非结核分枝杆菌21例,符合率为100%。耐药性检测发现,基因芯片对利福平的敏感度为87.8%(86/98),特异度为96.0%(410/427),符合率为94.5%(496/525),Kappa值为0.84,P>0.05;对异烟肼的敏感度为81.9%(96/116),特异度为91.7%(375/409),符合率为89.5%(470/525),Kappa值为0.71,P>0.05;两种药物药敏结果总符合率为92.0%(966/1 050)。结论基因芯片技术能够准确地筛选出非结核分枝杆菌;对利福平和异烟肼耐药性检测与培养法有很好的符合率和高度一致性,而且能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,在结核病的快速诊疗领域具有广阔的应用前景。

结核分支杆菌临床分离株的基因检测研究

目的检测结核分支杆菌临床分离株的IS986和embB基因序列 ,了解结核分支杆菌及其药物敏感性的基因检测同Bactec 4 6 0自动检测系统的相关性。方法用Bactec 4 6 0检测系统对获自肺结核患者的 8株临床分离菌和 1株质控菌进行菌种及EMB药物敏感性的鉴定 ,采用PCR和PCR DS技术对菌株进行IS986和embB基因检测和序列分析。结果 8株临床分离菌经Bactec 4 6 0自动检测系统鉴定为结核分支杆菌 ,其中 7株对EMB敏感、1株耐药 ,质控株耐药。各分离菌株及质控株PCR检测出IS986和embB基因序列 ,符合率 10 0 %。 1株临床分离耐药株embB基因的第 30 6位密码子发生突变 ,1株敏感株embB基因的第 2 78位和 2 79位密码子有突变 ,其余 6株敏感菌及质控株未发现序列改变 ,符合率 77 8%。结论PCR扩增是一种快速、敏感、特异性的结核分支杆菌鉴定方法 ,鉴定结果同Bactec 4 6 0TB检测系统一致。结核分支杆菌对EMB耐药性的形成同embB基因突变有关。Bactec 4 6 0TB系统检测药物敏感性可发生漏诊或误诊 ,可能造成药敏结果与临床治疗效果不一致的情况。

PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变的研究

目的应用PCR -SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB ,katG及ahpC基因突变 ,评价此方法用于结核分支杆菌利福平 (RFP)及异烟肼 (INH)耐药性试验的意义。方法以结核分支杆菌H3 7Rv为对照 ,30例耐RFP(单耐或多耐 )、2 1例耐INH(单耐和多耐 )的结核分支杆菌临床分离株及 10例敏感菌株 ;39例菌阳肺结核患者及 30例非结核性肺部疾病患者痰标本 ,采用PCR SS CP技术检测痰标本和菌株中的结核杆菌rpoB ,katG ,ahpC基因突变 ,并与药敏试验对照。结果PCR -SSCP检测痰标本中结核分支杆菌rpoB ,katG及ahpC基因突变的阳性率分别为 79% (31/ 39)、46 % (18/39)及 5 % (2 / 39)。结论PCR -SSCP可望成为直接检测临床痰标本中结核分支杆菌耐利福平及耐异烟肼的快速方法。