腺苷脱氨酶、结核分支抗酸杆菌DNA、抗结核抗体、铁蛋白、癌胚抗原联合检测对胸腔积液临床鉴别诊断的价值

目的探讨联合检测胸腔积液、血清中的腺苷脱氨酶(ADA)、抗结核抗体(TB-AB)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(SF)、结核分支抗酸杆菌DNA(TB-DNA)对结核性胸腔积液和癌性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法对90例结核性胸腔积液和60例癌性胸腔积液的患者进行联合检测ADA、TB-DNA、TB-AB、SF、CEA,并计算其敏感性和特异性。结果结核性胸膜炎组的胸腔积液中ADA值高于癌性胸液组(P<0.05),TB-DNA、TB-AB阳性率高于癌性胸腔积液组(P<0.05);三种对结核性胸腔积液诊断的敏感性分别为:81.1%、58.8%、50.0%,特异性分别为:91.6%、93.3%、88.3%;结核性胸腔积液组血清中的TB-DNA、TB-AB阳性率高于癌性胸腔积液组,但血清中ADA值,二组相比差异无统计学意义;癌性胸腔积液组的血清及胸腔积液SF、CEA值均高于结核性胸腔积液组(P<0.01),SF、CEA对癌性胸腔积液诊断的敏感性分别为87.7%、97.7%,特异性分别为70.0%、98.3%。结论 ADA、TB-DNA、TB-AB、SF、CEA五种联合检测对结核性胸腔积液及癌性胸腔积液有鉴别诊断价值。

结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗免疫治疗作用的研究

目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检测血清抗体;免疫治疗2月和5月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果:DNA疫苗组抗原特异性抗体不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率无显著差异;各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落计数均比对照组不同程度地减少;C和B组的肺病变程度较轻。免疫治疗5月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高;各组肺、脾细菌数无显著差别比和D组的肺未见明显病变。结论:DNA疫苗似乎具有一定的免疫治疗效果。

结核分支杆菌DNA疫苗抗结核作用的研究

目的 研究结核分支杆菌 MPT64、ESAT6和Ag85A DNA疫苗的抗结核作用。方法 用结核分支杆菌H37 Rv腹腔内注射BALB/c。小鼠2个月后,将小鼠随机分为8组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、微卡菌苗(D)、MPT64 DNA疫苗(E)、ESAT6 DNA疫苗(F)、Ag85A DNA疫苗(G)和联合DNA疫苗(H)免疫小鼠,ELISA法检测血清抗体。免疫治疗2个月和5个月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变并称取重量,作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果 各DNA疫苗组抗原特异性抗体均不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率差异无显著意义,各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落数均比对照组不同程度地减少,只有D组的肺菌落数和E组脾菌落数显著低于对照组,C、E和B组的肺病变指数较低。免疫治疗5个月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高,各组肺、脾细菌数无显著差别,G和D组的肺未见明显病变。结论DNA疫苗具有一定的抗结核治疗作用。

DNA序列分析与PCR-SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的 了解DNA序列分析与PCR -SSCP法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR -SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株 2 5株、耐药株 4 1株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。 结果 2 5株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变 ,4 1株耐利福平株中 38株发生突变 ,突变率为 92 .7% (38/ 4 1) ;2 5株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR -SSCP带型与对照H37Rv株相同 ,4 1株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株 ,提示有突变存在。与DNA序列分析相比 ,PCR -SSCP检测准确率为 93.9% (6 2 / 6 6 ) ,敏感度为 92 .1% (35 / 38) ;特异度是 96 .4 % (2 7/ 2 8)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值 ;PCR -SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选。

吉林市结核分支杆菌IS6110 DNA指纹图谱特征分析

目的 分析吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征。方法 对 5 3株结核分支杆菌分离株进行IS6 110基因分型 ,得到IS6 110RFLP图谱 ;按菌株指纹特征的同源性高低予以分组 ,并进行分析。结果 吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征为 :(1)IS6 110拷贝数目平均为 13个 ;(2 )A、B两组同源性很高 ,具有“北京基因型”特征 ,C组多态性较强 ;(3)IS6 110RFLP图谱特征分布无地域差异 ;(4)耐药菌株与敏感菌株图谱特征无明显差异 ,但初治耐药菌株成簇率较高。结论 吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征以“北京基因型”为主 ;但还具一些独有的特征。

两种DNA探针杂交检测结核分支杆菌方法的研究

为改进结核杆菌DNA探针的特异性与实用性,研制了以生物素标记的两种对结核分支杆菌特异的DNA探针:一个5’端标记的20bp的寡核苷酸探针和一个采用PCR方法合成的188bp长链探针。两种探针分别与结核分支杆菌的全染色体DNA,以及基因组上IS6110序列的一段317bp的PCR扩增产物进行斑点杂交,以碱性磷酸酶(AP)催化的染色反应检测,测试了两个探针的敏感性和特异性。系统地比较研究了两种探针杂交检测条件:探针的浓度选择,杂交温度与洗膜温度的选择,以及杂交与洗膜温度对检测的敏感性与特异性的影响。寡核苷酸探针和188bp探针杂交检测纯化结核分支杆菌基因组DNA的敏感性分别为100ng与6ng,杂交检测PCR产物的敏感性分别是400pg与50pg。两探针的最佳杂交浓度均为40～160ng/ml,最佳杂交温度分别是42℃与68℃,最佳洗膜温度分别是60℃与60～68℃之间。两种探针均仅与结核分支杆菌及BCG有杂交信号,而与其它受试分支杆菌及非分支杆菌杂交结果都呈阴性。它们的特异性都很强,但188bp探针的敏感性约是寡核苷酸探针的7～16倍,而且188bp探针检测本底较低。

结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病

目的研究结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分支杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB/c小鼠1个月后,将小鼠随机分成两组,第一组用Ag85A质粒DNA疫苗治疗12周,第二组用利福平、异烟肼和结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗(免疫5次)联合治疗12周;治疗结束后4周,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果小鼠感染1个月后,肺内菌量可达到109CFU,脾内菌量达到107CFU。治疗结束后4周,第二组小鼠体重均超过第一组,肺、肝、脾脏指数(0.013,0.047,0.011)明显低于第一组(0.017,0.062,0.017),但差异无显著性(P>0.05)。第二组肺脏病变程度较轻,有2/4未见明显病变,脾脏均未见明显病变;而第一组脾脏仅1例未见明显病变。第二组小鼠肺内无菌生长,而第一组肺菌落数为1.2×106CFU;第二组小鼠脾菌落数为4.4×103CFU,比第一组脾菌落数(1.9×105CFU)减少了42倍。结论结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病比单纯疫苗治疗疗效明显。

结核分支杆菌MPT64质粒DNA的免疫原性和保护效力

目的 研究结核分支杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)MPT64质粒DNA的免疫原性和保护效力。方法 分别用生理盐水 (A)、载体质粒 (B)、卡介苗 (C)和MPT64重组质粒 (D)免疫小鼠 ,通过ELISA方法检测小鼠血清中抗MPT64抗体 ,免疫 8周后以MTB腹腔内攻击小鼠 ,攻击 4或 9周后 ,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数及脾淋巴细胞转化试验。结果 D组1 0只小鼠中只有 4只血清中检测出抗MPT64抗体。MTB攻击 4周后 ,D组鼠脾淋巴细胞转化率显著高于其它 3组 ,A、B、D组肺、肝和脾重量明显高于C组 ,A组脾菌落数较其它 3组明显增多 ,其余脏器菌落数各组无明显区别 ,A、B组可见肺部严重病变 ,C组未见明显病变 ,D组存在个体差异。MTB攻击 9周后 ,A、B组鼠脾淋巴细胞转化率较C组显著降低 ,D组显著增高 ,各组肺、肝和脾重量无显著差别 ,C组肝菌落数明显低于其它 3组 ,其余脏器各组间无显著差别 ,各组鼠肺表面均可见不同程度的病变。所有鼠肝、脾均未见明显病变。结论 MTBMPT64DNA疫苗经肌肉注射免疫小鼠能诱发特异的体液和细胞免疫应答 ,对小鼠抗MTB感染具有一定的免疫保护效力 。

荧光定量PCR检测结核杆菌DNA与涂片抗酸染色结果的比较

目的:探讨荧光定量PCR检测结核杆菌DNA的拷贝数与涂片抗酸染色镜检阳性程度的相关性。方法:对可疑结核病患者的124份痰样本同时进行荧光定量PCR检测和涂片抗酸染色镜检,按涂片抗酸染色镜检结果阴性(-)、可疑(±)、1+、2+、3+、4+分类,对荧光定量PCR检测结核杆菌DNA的拷贝数进行统计分析。结果:98例涂片阴性痰样本中,24例样本荧光定量PCR检测阳性,结核杆菌DNA拷贝数多为102～103数量级;26例痰涂片阳性样本中,24例样本荧光定量PCR检测阳性,2例检测阴性,结核杆菌DNA拷贝数多为103～104数量级,和涂片阳性程度基本呈正相关。结论:荧光定量PCR检测结核杆菌DNA与涂片抗酸染色镜检阳性程度有较好的相关性,可以作为临床诊疗较为可靠的实验方法。

结核分支杆菌MPT64 DNA疫苗的纯化及免疫效果

目的：研究结核分支杆菌 MPT64 DNA 疫苗经肌肉注射免疫小鼠的效果。方法：通过 Qiagen 质粒纯化试剂盒纯化质粒 DNA；将 25 只 BALB/c 小鼠随机分为四组，生理盐水组、载体质粒组和重组质粒组于第 0 周、第 3 周、第 6 周经肌肉注射免疫小鼠各 1 次，卡介苗组只在 0 周时于皮内注射卡介苗 1 次；通过 ELISA 方法检测小鼠血清中抗 MPT64 抗体。结果：纯化后的 JW4303 和 JW4303-MPT64 质粒 DNA 经电泳证实无 RNA 污染，OD260/OD280大于 1.8，每 2 000 ml 培养菌可获得 2 mg 左右的质粒 DNA。以三个对照组 15 只小鼠的血清抗 MPT64 抗体 OD值x＋2s为正常界限值，免疫 4 周时重组质粒组 10 只小鼠中只有 4 只血清中抗 MPT64 抗体阳性；免疫 7 周时有 5 只小鼠抗体阳性，抗体水平较前略微增高。结论：结核分支杆菌 MPT64 DNA 疫苗经肌肉注射免疫小鼠只能诱导部分小鼠产生特异的体液免疫应答，免疫效果存在明显的个体差异。

结核分支杆菌复合群DNA分型研究进展

1882年首次分离到结核分支杆菌病原体以来,已知结核分支杆菌复合群(MTBC)包括人结核分支杆菌、牛分支杆菌、非洲分支杆菌、田鼠分支杆菌等,是在全球范围内具有重要影响的人兽共患病病原体,但近年对它们的研究还远远不够。MTBC在核苷酸水平约有99.9%的相似度,已有Spoligotyping分型、MIRU-VNTR分型等一系列的分子生物学技术用于基因组DNA指纹图谱研究,其中基于全基因组分析的分型方法最为可靠。随着DNA测序技术的进步,MTBC菌株全基因序列数据不断丰富,基于全基因组分析的分型方法在不断增多。论文对MTBC的基因组分型技术进行总结并提出展望,以便于进一步研究基因组多样性对基因功能和宿主免疫识别等的影响,进而为防控这类病原体提供依据。

随机扩增多态性DNA技术对结核分支杆菌菌株鉴别及其耐药相关性分析

用引物G1和L1扩增的 16S～ 2 3SrDNA间隔区作为模板DNA ,再用引物AP5 0进行随机扩增多态性DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA ,RAPD)分析 .经AP5 0扩增出的各菌株DNA片段 ,用 1.2 %的琼脂糖凝胶电泳EB染色 ,可获得 1或 2个大小不同的DNA片段 (390～ 10 31bp) ,各株间差异明显 .结果表明 ,不同菌株有不同的DNA多态性 ,药物敏感株与耐药株之间多态性差异明显 ,耐药株中耐药谱相似或相同的菌株间其多态性也相似 ,RAPD有助于简便、快速、有效地了解菌株间的克隆相关性及耐药性传播 .

结核分支杆菌DNA片段探针的制备及其应用研究

我国的结核病疫情十分严重，人口占全球20%，病人数(600万)却占世界病人总数(2000万)的30％。而结核病的诊断、治疗需花费很长时间，这是长期以来存在的问题。随着分子杂交技术及PCR的建立与广泛应用，为结核病的诊断开辟了新的途径。

结核分支杆菌ESAT-6DNA疫苗研究进展

结核分支杆菌引起的结核病是一种人兽共患的慢性传染病,短程督导化疗是治疗该病的主要措施,卡介苗是预防该病的唯一疫苗,但其免疫效果极不稳定。本文介绍了结核分支杆菌ESAT-6重组质粒:pJW-ESAT-6、pGEX-ESAT-6、pCD-ESAT-6、pMCT-ESAT-6-Ag85B、pJW-TPA-ESAT-6和pVAX-Ub-ESAT-6等DNA疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展。

结核分支杆菌稳定L型染色体DNA的限制性酶切分析

目的探讨结核分支杆茵稳定L型变异的分子机制。方法对结核分支杆茵稳定L型纯培养物的染色体DNA的特异性PCR扩增片段进行HaeⅢ限制性内切酶分析。结果结核分支杆茵稳定L型的染色体DNA具有与其亲代细菌型一致的主要酶切片段,但也显示出不同于其亲代细茵型DNA的酶切片段。结论结核分支杆茵稳定L型可保留与其亲代细茵型一致的特异性染色体基因,但也发生了染色体基因的改变。

直接涂片法与浓缩集菌法找结核分支抗酸杆菌的比较分析

目的:通过试验研究分析比较出直接涂片法与浓缩集菌法两种方法哪种方法操作简单、阳性率高,更有利于辅助临床诊断肺结核患者。方法:选择278例疑似肺结核患者,分别采用浓缩集菌法和直接涂片法染色两种方法查找抗酸杆菌,并对结果进行对比分析。结果:浓缩集菌法和直接涂片法结核分支杆菌检出率分别为10.1%和3.2%。结论:浓缩集菌法涂片染色找结核分支杆菌阳性检出率明显高于直接涂片法找抗酸结核杆菌法。