结核分支杆菌重组38KDa蛋白质抗原免疫学特性的研究

目的研究重组结核分支杆菌蛋白38KDa(rTPA38)的免疫学特性,以寻找特异性的诊断制剂。方法皮肤试验轮圈法:分别以HRV全菌体、卡介苗、堪萨斯、偶发、瘰疬分支杆菌致敏豚鼠备用;以5IU国际37标准品PPD为阳性对照,0.2μg重组rTPA38抗原分别于背部皮内注射48h观察红肿、硬结反应的纵横径。以rTPA为抗原,PPD为对照,用ELISA法检测血清中的特异性抗结核抗体。结果rTPA与PPD均可诱发豚3838鼠迟发型超敏反应(DTH),所产生的DTH反应与PPD相似,而对堪萨斯、偶发、瘰疬分支杆菌致敏的豚鼠不产生DTH反应。238例肺结核病组、rTPA和PPD检测的灵敏度分别为65.1%、72.7%。健康献血员组、非结核38呼吸疾病组和卡介苗接种阳转者血清同时用rTPA和PPD检测,rTPA的特异性分别为95.6%、95.9%、383888.5%;PPD的特异性分别为91.8%、85.4%、68.7%。统计结果表明rTPA蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组,其38阳性率差异有显著性(P<0.05)。两者检测卡介苗接种阳转组的阳性率和血清抗体滴度差异有显著性(P<0.05)。结论rTPA38诱发豚鼠的DTH反应与PPD相似。rTPA蛋白抗原有较高的特异性和灵敏度,是ELISA法的38可靠抗原,可替代PPD成为一种新的特异性诊断制剂。

重组结核分支杆菌38000蛋白质抗原免疫学特性的研究

目的 :探讨国产结核分支杆菌蛋白 380 0 0 (rTPA38)的免疫学特性 ,用以寻找特异性的诊断试剂和筛选新一代疫苗。方法 :( 1)皮肤实验法。H37RV致敏豚鼠 ,5IU国际标准品PPD为阳性对照 ,0 .2 μg重组rTPA38抗原分别于背部皮内注射 ,2 4,48,72h后测量红肿硬结反应横纵径。 ( 2 )ELISA检测 9种羊抗分支杆菌血清并检测结核病人血清中特异性抗结核抗体。结果 :0 .2 μgrTPA38蛋白质抗原在 2 4,48,72h结果基本相似 ,与国家标准品相比均可诱发豚鼠迟发性超敏反应 (DTH) ,其效力与PPD相似。rTPA38只与羊抗牛、BCG、耻垢分支杆菌有交叉反应。用rT PA38和PPD为抗原 ,检测肺结核疾病组灵敏度分别为 6 7.2 % ,72 .5 % ;健康献血员组、非结核呼吸疾病组、卡介苗阳转组 ,rTPA38特异性分别为 96 8% ,96 .7% ,87 5 % ;PPD特异性分别为 93.7% ,85 .7% ,6 8.7%。统计结果表明 ,rT PA38蛋白与PPD检测非结核呼吸疾病组、卡介苗阳转组特异性均有显著意义 (P <0 .0 5 )。结论 :rTPA38具有较高的特异性和敏感性 ,并能诱发豚鼠DTH反应 ,有望成为一种新的特异性诊断试剂。

湖北荆州地区结核分枝杆菌/人类免疫缺陷病毒双重感染流行病学特征及治疗转归分析

目的研究湖北荆州地区结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)/人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)双重感染流行病学特征及患者治疗转归。方法通过中国疾病预防控制信息系统,导出湖北荆州地区2012至2021年登记的HIV感染者资料,分析合并MTB感染情况。分析MTB/HIV双重感染患者人口学特征及治疗转归情况。以单因素、多因素Logistic回归分析患者治疗转归影响因素。结果2012至2021年湖北荆州地区共有28132例HIV感染者可随访,共检出MTB感染107例,检出率为0.38%,MTB感染检出率呈波动性降低趋势(z=3.612,P=0.001)。107例MTB/HIV双重感染患者中,性别以男性居多,占76.64%;年龄以18~45岁居多,占56.07%;民族以汉族居多,占82.24%;职业以农民居多,占43.93%;婚姻以未婚居多,占71.03%;吸烟者占64.49%,饮酒者占48.60%。107例MTB/HIV双重感染患者均坚持抗结核与抗HIV治疗,MTB感染治愈20例,完成疗程62例,治疗成功率76.64%(82/107),治疗失败率23.36%(25/107)。单因素及多因素Logistic回归分析结果显示:首诊医疗机构级别为市级、存在肺外结核及重症肺结核均是MTB/HIV双重感染患者治疗失败的危险因素。结论湖北荆州地区MTB/HIV双重感染以男性及18~45年龄段患者为主。此外,该病患者治疗转归受首诊医疗机构级别、存在肺外结核、重症肺结核等因素影响,应予以重点关注。

风湿免疫病患者结核分枝杆菌潜伏感染率及相关影响因素的多中心横断面研究

目的:以结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测作为筛查结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的工具,调查我国风湿免疫病患者结核分枝杆菌潜伏感染率,并分析影响T-SPOT.TB检测结果的相关因素。方法:纳入自2014年9月至2016年3月我国东、中、西部13家三级甲等综合医院接诊的风湿免疫病患者作为研究对象,共计3715例。应用T-SPOT.TB对研究对象进行LTBI筛查。收集研究对象的基本信息,包括性别、年龄、地区、体质量指数、病程、吸烟史、基础疾病、结核病患者密切接触史、结核病既往史,以及糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂的使用情况,实验室化验结果,风湿免疫病诊断结果等。采用单因素及多因素logistic回归模型分析影响T-SPOT.TB检测结果的因素。结果:3715例研究对象T-SPOT.TB检测阳性者有672例(18.1%,95%CI:16.9%~19.3%)。不同风湿免疫病病种患者T-SPOT.TB检测阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=79.003,P<0.001),白塞综合征患者检测阳性率最高(44.4%,32/72),混合性结缔组织病患者检测阳性率最低(8.9%,4/45)。男性风湿免疫病患者T-SPOT.TB检测阳性率为23.6%(168/711),明显高于女性(16.8%,504/3004),差异有统计学意义(χ^(2)=18.213,P<0.001)。不同年龄组风湿免疫病患者T-SPOT.TB检测阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=67.189,P<0.001),51~60岁组检测阳性率最高(24.8%,143/577),16~20岁组检测阳性率最低(8.1%,13/160)。多因素logistic回归分析显示:年龄≥41岁(aOR=1.81,95%CI:1.48~2.23),吸烟≥21支/d(aOR=1.66,95%CI:1.15~2.40),有结核病既往史(aOR=3.88,95%CI:2.71~5.57),患白塞综合征(aOR=3.00,95%CI:1.70~5.28)是T-SPOT.TB检测阳性结果的独立相关因素;使用大剂量激素(aOR=0.67,95%CI:0.47~0.96)或生物制剂(aOR=0.55,95%CI:0.36~0.84),淋巴细胞计数偏低(aOR=0.39,95%CI:0.25~0.62),低蛋白血症(aOR=0.72,95%CI:0.52~0.99),以及患多发性肌炎/皮肌炎(aOR=0.54,95%CI:0.29~0.99)、系统性红斑狼疮(aOR=0.75,95%CI:0.57~0.99)是T-SPOT.TB检测阴性结果的独立相关因素。结论:风湿免疫病患者总体结核分枝杆菌潜伏感染率为18.1%,各病种T-SPOT.TB检测阳性率差异明显。当患者有大剂量糖皮质激素、生物制剂的使用,淋巴细胞计数偏低,低蛋白血症,以及罹患系统性红斑狼疮时警惕假阴性结果。

结核分支杆菌感染后树突状细胞发挥的免疫学作用

世界卫生组织最新统计表明,全世界大约20亿人口被感染结核病,每年超过200万人死于结核病,超过90%的受染人群尽管体内有病原体的长期存在却并不发病,因此研究结核分支杆菌与宿主免疫系统的反应。

结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗免疫治疗作用的研究

目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检测血清抗体;免疫治疗2月和5月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果:DNA疫苗组抗原特异性抗体不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率无显著差异;各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落计数均比对照组不同程度地减少;C和B组的肺病变程度较轻。免疫治疗5月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高;各组肺、脾细菌数无显著差别比和D组的肺未见明显病变。结论:DNA疫苗似乎具有一定的免疫治疗效果。

重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的 探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法 以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为 66.3%、63.0 %和 72 .3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测 ,rTPA38特异性分别为 97.6%、96.8%、86.0 %。rTPA16特异性分别为 94 .7%、93.1%、75 .0 %。PPD特异性为93.4 %、85 .7%、67.9%。统计分析显示 ,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组 ,其阳性率有显著性差异 (P <0 .0 5 )。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P <0 .0 5 )。rTPA38和rTPA16同时检测 10 8例肺结核病组血清可提高 11.1%的阳性率。结论 rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性 ,是ELISA的可靠抗原 ,与rTPA16联用可提高灵敏度 ,对结核病血清学诊断有较高参考价值。

结核分支杆菌MPT63抗原的表达及其血清学诊断价值的研究

获得结核分支杆菌重组MPT6 3蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值 ,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法 :应用基因工程技术表达、纯化MPT6 3蛋白 ,通过Westernblotting和免疫双扩散试验分析其抗原性 ,通过斑点免疫试验、结明试验和结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果 :重组质粒 pET2 4b -MPT6 3测序表明具有正确的编码序列 ,MPT6 3蛋白在大肠杆菌细胞内以可溶性蛋白的形式高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 40 %左右 ,分子量约 16kDa ,Westernblotting和免疫双扩散试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 46 .7%和 5 0 % ,结核病一步法检测的阳性率为 70 % ,结明试验的阳性率为 80 %。在34例正常血清中 ,MPT6 3和PPD斑点免疫试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 38.2 %和 35 .3 % ,结核病一步法检测的阳性率为 2 3 .5 %。结论 :pET2 4b -MPT6 3大肠杆菌工程菌能以可溶性蛋白的形式高效表达 ,重组的MPT6 3也许可作为结核病血清学诊断的一组抗原之一。

γ-干扰素对免疫低下小鼠结核分支杆菌感染的影响

目的 观察、评价γ 干扰素 (IFN γ)对免疫功能低下小鼠结核分支杆菌感染的影响和疗效。方法 将DBA/ 2小鼠 90只按免疫功能正常和免疫功能低下 2种状态分别制成小鼠结核分支杆菌感染模型。随机分组给予IFN γ或IFN γ单克隆抗体治疗 ,检测肺组织菌落计数 ,观察治疗后生存率。结果 免疫正常组小鼠无死亡 ,第 2周、第 4周菌落数分别为 (5 1.5± 17.5 )× 10 3cfu/mL、(10 6 .3± 4 1.0 )× 10 3cfu/mL。免疫低下组 8只死亡 ,菌落数分别为 (16 3.7± 6 1.7)× 10 3cfu/mL、(76 8.3± 2 0 6 .5 )× 10 3cfu/mL ,免疫低下 +IFN γ组 3只死亡 ,菌落数分别为 (5 4.2± 2 1.3)× 10 3cfu/mL、(2 12 .7± 80 .7)× 10 3cfu/mL ,免疫低下组与免疫低下 +IFN γ组比较有显著性差异。免疫正常小鼠给予IFN γ抗体后肺组织菌落数增多 ,与对照组比较有显著性差异。结论 IFN γ增强宿主免疫功能 ,对结核分支杆菌感染小鼠产生保护效应 ,适用于免疫功能低下宿主合并结核感染的辅助治疗。

重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的 :研究结核分枝杆菌重组 16 0 0 0蛋白 (rPA16 )诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法 :家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组 ,皮下多点注射分别进行免疫。 6次免疫后采血 ,双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验 (ELISA)跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应 ;同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应 ,并用rPA16抗原检测人血清标本 ,分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果 :兔血清抗体效价结果显示 :5个月后 ,加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体 ,不加佐剂组 2个月后血清抗体检测即为阴性。ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感 ,rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达 1∶6 4 0 0 ,不加佐剂组的血清抗体滴度仅为 1∶4 0 0。ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异性较好 ,仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应 ,与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性。同时又分析了rPA16抗原的特异性 ,与人型PPD相比 ,该抗原只与所试各类分支杆菌、BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应 ,而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应。ELISA检测血清标本结果 :肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性?

结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的免疫学特性

目的 研究原核表达的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85 B的免疫学特性 .方法 用原核表达的 Ag85 B蛋白免疫 BAL B/c小鼠 ,EL ISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果 .分离免疫小鼠的脾淋巴细胞 ,体外用抗原再刺激 ,MTT方法检测 IFN- γ产生水平和 MTT法检测淋巴细胞增殖 .结果 Ag85 B免疫小鼠可引起较高水平的特异性抗体应答 ,免疫小鼠的脾淋巴细胞体外用抗原再刺激 ,淋巴细胞的增殖较显著 . MTT方法检测 Ag85 B免疫小鼠的 IFN-γ量为 96 0pg· L- 1 ,而生理盐水对照组的量低于 80 pg· L- 1 .结论 Ag85

结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的免疫学特性

目的 :研究结核分枝杆菌 (MTB)分泌蛋白MPT6 4的免疫学特性 .方法 :用原核表达的MPT6 4蛋白免疫BALB/c小鼠 ,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果 .分离免疫小鼠的脾淋巴细胞 ,体外用抗原再刺激 ,MTT方法检测IFN γ 产生水平和MTT法检测淋巴细胞增殖 ,并对脾脏细菌负荷计数 .结果 :MPT6 4免疫小鼠可引起体液免疫和保护性细胞免疫 ,免疫小鼠的脾淋巴细胞体外用抗原再刺激 ,淋巴细胞的增殖较显着 .MTT方法检测小鼠的IFN γ 量为 1 0 2 4ng/L ,而生理盐水对照组低于 80ng/L .结论 :MPT6

冻干治疗用母牛分支杆菌菌苗对耐多药肺结核患者临床疗效及细胞免疫功能的影响

目的:寻找耐多药结核病免疫治疗的有效药物。方法:79例耐多药肺结核患者(MDRTB)随机分为治疗组46例和对照组33例,两组患者抗痨方案均为“3AkPaThLevl15PaThLevl”,治疗组加用“母牛分支杆菌菌苗”。治疗1～3个月后观察疗效及检测外周血T淋巴细胞亚群。结果:治疗1、2、3个月后治疗组患者痰菌阴转率(41.3%、63.0%、80.4%)、X线片肺部病灶吸收好转率(30.4%、50.0%、67.4%)分别优于对照组(12.1%、27.3%、39.4%,P<0.001;6.1%、21.2%、27.3%,P<0.05);治疗3个月后治疗组外周血CD3+、CD4+及CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.01),CD8+显著低于对照组(P<0.05)。结论:母牛分支杆菌菌苗可增强耐多药肺结核患者的细胞免疫功能,利用患者康复,可用于耐药结核病免疫治疗。

结核分支杆菌MPT64质粒DNA的免疫原性和保护效力

目的 研究结核分支杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)MPT64质粒DNA的免疫原性和保护效力。方法 分别用生理盐水 (A)、载体质粒 (B)、卡介苗 (C)和MPT64重组质粒 (D)免疫小鼠 ,通过ELISA方法检测小鼠血清中抗MPT64抗体 ,免疫 8周后以MTB腹腔内攻击小鼠 ,攻击 4或 9周后 ,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数及脾淋巴细胞转化试验。结果 D组1 0只小鼠中只有 4只血清中检测出抗MPT64抗体。MTB攻击 4周后 ,D组鼠脾淋巴细胞转化率显著高于其它 3组 ,A、B、D组肺、肝和脾重量明显高于C组 ,A组脾菌落数较其它 3组明显增多 ,其余脏器菌落数各组无明显区别 ,A、B组可见肺部严重病变 ,C组未见明显病变 ,D组存在个体差异。MTB攻击 9周后 ,A、B组鼠脾淋巴细胞转化率较C组显著降低 ,D组显著增高 ,各组肺、肝和脾重量无显著差别 ,C组肝菌落数明显低于其它 3组 ,其余脏器各组间无显著差别 ,各组鼠肺表面均可见不同程度的病变。所有鼠肝、脾均未见明显病变。结论 MTBMPT64DNA疫苗经肌肉注射免疫小鼠能诱发特异的体液和细胞免疫应答 ,对小鼠抗MTB感染具有一定的免疫保护效力 。

哮喘的免疫学机制及应用草分支杆菌治疗的进展

支气管哮喘（以下简称哮喘）是由多种细胞（嗜酸性粒细胞、T细胞、肥大细胞、中性粒细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病，以气道慢性炎症、气道高反应性和气道重塑为发病特征［1］。其发生机制复杂，目前尚未完全阐明，近年来免疫学机制以及以免疫学为靶点的治疗策略已成为当下研究的热点［2?3］。灭活草分支杆菌作为一种多功能强的免疫刺激剂，具有免疫调节作用，在哮喘的治疗过程中得到极大的关注［4?5］。本文就哮喘的发病机制以及草分枝杆菌在哮喘治疗中的最新研究进展予以综述。

结核分支杆菌MPT64 DNA疫苗的纯化及免疫效果

目的：研究结核分支杆菌 MPT64 DNA 疫苗经肌肉注射免疫小鼠的效果。方法：通过 Qiagen 质粒纯化试剂盒纯化质粒 DNA；将 25 只 BALB/c 小鼠随机分为四组，生理盐水组、载体质粒组和重组质粒组于第 0 周、第 3 周、第 6 周经肌肉注射免疫小鼠各 1 次，卡介苗组只在 0 周时于皮内注射卡介苗 1 次；通过 ELISA 方法检测小鼠血清中抗 MPT64 抗体。结果：纯化后的 JW4303 和 JW4303-MPT64 质粒 DNA 经电泳证实无 RNA 污染，OD260/OD280大于 1.8，每 2 000 ml 培养菌可获得 2 mg 左右的质粒 DNA。以三个对照组 15 只小鼠的血清抗 MPT64 抗体 OD值x＋2s为正常界限值，免疫 4 周时重组质粒组 10 只小鼠中只有 4 只血清中抗 MPT64 抗体阳性；免疫 7 周时有 5 只小鼠抗体阳性，抗体水平较前略微增高。结论：结核分支杆菌 MPT64 DNA 疫苗经肌肉注射免疫小鼠只能诱导部分小鼠产生特异的体液免疫应答，免疫效果存在明显的个体差异。

结核分支杆菌分泌蛋白Mtb81克隆、表达、纯化及血清学诊断价值的初步研究

目的通过结核分支杆菌Mtb81基因在大肠杆菌中的表达,获得大量纯化的重组Mtb81蛋白。通过Western-blot和ELISA方法评价Mtb81抗原,检测血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性,为进行结核病血清学诊断打下基础。方法应用PCR技术扩增结核分支杆菌H37Rv Mtb81DNA序列;构建pET24b-Mtb81重组质粒,然后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3);通过Western-blot鉴定重组Mtb81蛋白,采用Chelating Sepharose Fast Flow纯化重组Mtb81蛋白;将纯化的重组Mtb81蛋白通过Western-blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测结核病人及正常人血清中的抗体,应用Microsoft Excel软件统计分析实验数据。结果pET24b-Mtb81在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%左右。纯化后的Mtb81样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为95%左右。纯化后的Mtb81蛋白通过Western-blot鉴定,结果显示:加入结核病人血清抗体于目的蛋白位置有一条显色带,而加入正常人血清组则无显色反应;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测30例结核病人及正常人血清中的抗体,结果显示:rMtb81的特异性和灵敏度分别为96%、93%。结论pET24b-Mtb81大肠杆菌工程菌株能高效表达Mtb81蛋白,Western-blot结果证明表达蛋白具有很好的免疫反应性和抗原特异性;ELISA结果证明重组Mtb81检测结核病人血清中的抗结核抗体,具有较高的灵敏度和特异性。