GeneXpert MTB/RIF与全自动结核分枝杆菌培养在淋巴结结核诊断中的效能比较研究

目的:比较GeneXpert MTB/RIF与全自动结核分枝杆菌(MTB)培养在淋巴结结核中的诊断效能。方法:选取临床疑似淋巴结结核患者332例为研究对象,依据临床诊断标准将其为淋巴结结核组(研究组,158例)和非淋巴结结核组(对照组,174例)。两组均进行GeneXpert MTB/RIF试验和全自动MTB培养。比较两种检测方法对淋巴结结核的诊断效能。结果:两组性别、年龄比较差异有统计学意义(均P<0.05)。研究组GeneXpert MTB/RIF试验阳性率为87.34%,高于全自动MTB培养的阳性率49.37%(P<0.05)。对照组GeneXpert MTB/RIF试验阴性率为90.23%,高于全自动MTB培养的阴性率84.48%(P<0.05)。研究组双阳性率为48.10%,双阴性率为11.39%,两种方法联合检测双阳性率高于双阴性率(P<0.001)。与全自动MTB培养比较,GeneXpert MTB/RIF试验对淋巴结结核的检测敏感度、符合率、阳性预测值和阴性预测值升高,漏诊率降低(均P<0.05);两者联合检测敏感度、特异度、符合率、阳性预测值和阴性预测值升高,漏诊率和误诊率降低(均P<0.05)。GeneXpert MTB/RIF试验与两者联合检测结果比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:与全自动MTB培养比较,GeneXpert MTB/RIF试验对淋巴结结核的诊断效能更高。

基于BACTEC MGIT 960培养的结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌混合感染检测方法的研究

目的:探讨结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)和非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)混合感染的检测方法,为临床诊治混合感染提供参考依据。方法:使用脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌3种NTM和MTBC标准菌株(H37Rv)各制备3种不同初始浓度(10^(-2)mg/ml、10^(-4)mg/ml和10^(-6)mg/ml)的菌液,将每个浓度的NTM与MTBC采用9种不同比例(NTM标准菌株与H37Rv按照1∶99、5∶95、10∶90、20∶80、50∶50、80∶20、90∶10、95∶5和99∶1)混合制成81种混合感染标本。3种感染模型分别为脓肿分枝杆菌和H37Rv、鸟分枝杆菌和H37Rv、胞内分枝杆菌和H37Rv。经BACTEC MGIT 960培养,采用MPB64抗原检测、对硝基苯甲酸(PNB)生长试验、荧光PCR熔解曲线法和恒温扩增实时荧光法4种方法对培养液进行检测。结果:3种混合感染模型的81份标本均在34 d内报告阳性。其中,MPB64抗原检测阳性3份(3.7%,3/81);PNB生长试验阳性78份(96.3%,78/81);荧光PCR熔解曲线法仅检出相应的NTM 64份(79.0%,64/81),仅检出MTBC 3份(3.7%,3/81),同时检出相应的NTM和MTBC 14份(17.3%,14/81);恒温扩增实时荧光法检出MTBC 67份(82.7%,67/81)。结论:临床标本经BACTEC MGIT 960培养,仪器报告阳性后,用MPB64抗原检测和PNB生长试验初判,若有NTM生长,建议采用分子生物学方法鉴定NTM,同时用单一检测MTBC核酸的方法对培养液进行检测,以免MTBC漏检。

结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核诊断效能的研究

目的探究结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的诊断效能。方法选取2021年9月至2022年9月阳江市公共卫生医院收治的188例疑似菌阴肺结核患者,均进行结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA检测。以组织培养及病理检查为“金标准”。比较结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA检测单独检测、联合检测菌阴肺结核的诊断结果以及诊断效能。结果188例疑似菌阴肺结核患者中132例确诊为阳性,结核菌培养检测检出阳性115例,阴性73例;结核分枝杆菌-DNA检测检出阳性107例,阴性81例;联合检测检出阳性134例,阴性54例。结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的灵敏度、阴性预测值、准确率(91.67%、79.63%、87.23%)高于结核菌培养检测(78.79%、61.64%、79.26%)、结核分枝杆菌-DNA检测(75.00%、59.26%、78.19%),差异有统计学意义(P<0.05)。结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的特异度、阳性预测值(76.79%、90.30%)与结核菌培养检测(80.36%、90.43%)、结核分枝杆菌-DNA检测(85.71%、92.52%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核进行诊断,有利于提升诊断灵敏度、阴性预测值、准确率,诊断效能较高。

4种实验室检测技术对肺外结核病成人患者非呼吸道标本中结核分枝杆菌检出率对比观察

目的 对比观察结核菌荧光染色、环介导等温扩增技术(LAMP)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)、全自动分枝杆菌液体培养检测技术(BACTEC MGIT 960)诊断成人肺外结核病非呼吸道标本结核分枝杆菌(MTB)的效能。方法 收集2019年1月—2021年12月确诊为肺外结核病患者的非呼吸道标本317例份(组织155例份、尿液52例份、胸水47例份、脓液41例份、脑脊液22例份),分别采用荧光染色、LAMP、BACTEC MGIT 960、Xpert MTB/RIF检测,比较各检测技术检测同一种非呼吸道标本的MTB检出率。结果 LAMP、Xpert MTB/RIF、BACTEC MGIT 960、荧光染色的MTB检出率分别为72.6%、70.3%、48.3%、22.7%。在组织标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色检出率最低;在尿液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT 960和荧光染色;在胸水标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT 960,荧光染色最低;在脓液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色最低;在脑脊液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP、Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960检出率较高,荧光染色最低。245例荧光染色阴性的标本中,LAMP、BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF的MTB检出率分别为66.1%、39.2%和63.7%,LAMP和Xpert MTB/RIF在涂阴标本中的检出率差异无统计学意义,但均高于BACTEC MGIT 960(P均<0.05)。126例标本为Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960同时阳性,两种方法检测利福平耐药性统计分析发现,Kappa值为0.829,P<0.05。结论 LAMP和Xpert MTB/RIF诊断人肺外结核病非呼吸道标本MTB灵敏度和特异度高,同时具有检测速度快的优势;荧光染色特异度高,但灵敏度低;BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF对利福平药敏的一致性强,但培养时间长,后续能得到药物种类多,对临床治疗在药物选择性上高。

云南省昭通地区结核分枝杆菌临床分离株遗传多样性和耐药分子特征

目的调查云南省昭通地区结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株的遗传多样性和耐药分子特征。方法2022年9月—2023年8月从昆明医科大学附属昭通医院收治的298例涂阳肺结核患者中共采集了MTB 298株,用MeltPro TB测定法通过荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)熔解曲线法鉴定所有分离株。用多色熔解曲线分析技术进行间隔区寡核苷酸分型(interval oligonucleotide typing,Spoligotyping)。用分枝杆菌散布重复单元(mycobcterial interspersed repetitive units,MIRU)-可变数目串联重复序列分型(variable number of tandem repeat typing,VNTR)(MIRU-VNTR)24位点分型法进行基因分型。使用PCR和靶向测序检测耐药基因突变。结果北京菌株占所有MTB菌株的69.80%(208/298)。其他谱系包括T、LAM、MANU2、CAS、NEW-1和SITVITWEB数据库中未发现的孤儿型,分别占5.70%(17/298)、3.36%(10/298)、0.67%(2/298)、0.34%(1/298)、8.39%(25/298)及11.74%(35/298)。北京菌株对左氧氟沙星的耐药率略高于非北京菌株(P=0.042),而北京菌株与非北京菌株2种基因型菌株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、吡嗪酰胺、卡那霉素耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。MIRU-VNTR 24位点分型分析结果显示,33个菌株可分为13株聚类,其聚类率为39.39%。每个等位基因的Hunter-Gaston指数在0~0.814之间,其中18个位点对非北京菌株具有中高鉴别能力。但只有10个位点对北京菌株具有中高鉴别能力。结论MTB菌株在中国云南省昭通地区表现出较高的遗传多样性,北京菌株是MTB和耐药结核病菌株的优势谱系。

Xpert MTB/RIF技术在肺结核患者结核分枝杆菌鉴定及利福平耐药检测中的应用价值

目的分析Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌鉴定及利福平耐药性的检验效能及临床应用价值。方法收集感染科初诊疑似肺结核患者痰液样本,以临床确诊为金标准,评估涂片荧光染色法、Xpert MTB/RIF、液体培养法对结核分枝杆菌检测效能。以比例法药敏试验为金标准,评估Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌利福平耐药性检验效能。结果2019年5月至2021年5月初诊疑似肺结核患者593例,确诊肺结核141例,非结核分枝杆菌感染14例,其他肺部感染438例。593例疑似肺结核患者中,三种方法检测阳性率分别为:荧光染色法16.7%,Xpert MTB/RIF法23.4%,液体培养法23.6%。141例确诊肺结核患者中男性占比75.2%,其中涂片法敏感性为58.9%低于Xpert MTB/RIF 98.6%和液体培养法99.3%,涂片法特异性为96.46%、Xpert MTB/RIF和液体培养法特异性均为100%。Xpert MTB/RIF和液体培养法检测MTB一致性Kappa值均>0.99。以140株培养阳性结核杆菌比例法药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF法检测利福平耐药敏感性87.5%、特异性100%、准确性99.3%,与比例法药物敏感性试验结果一致性Kappa值0.93,结核杆菌利福平耐药率女性(8.6%)高于男性(4.8%)。结论临床确诊肺结核患者中Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌一致性高、操作简单、敏感性与特异性好,对利福平耐药性检测与比例法比较结果符合率高。Xpert MTB/RIF可作为快速检测MTB及利福平耐药性的有效方法,并可为临床快速选择治疗方案提供参考。

结核分枝杆菌分泌蛋白早期分泌性抗原6(ESAT-6)的免疫学性质及其在新型疫苗中作用的研究进展

早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进MTB的扩散、定植,引发MTB的全身感染。ESAT-6还可抑制Th1细胞的保护性免疫反应从而抑制相关促炎细胞因子的分泌,引发机体免疫功能的紊乱,加速MTB感染进程。在这一感染过程中,ESAT-6所具备的高度免疫原性使其可作为优势抗原用于新型结核病(TB)疫苗的研制,具有广阔的发展前景。

结核分枝杆菌DNA检测在结核病中的诊断价值

目的研究结核分枝杆菌(MTB)DNA检测在结核病中的诊断价值。方法选取2021年10月至2022年9月南郑区人民医院收治的102例结核病患者为研究组,另取同期67例其他肺部疾病患者作为对照组。以双盲实验法采集所有患者的痰液标本,以实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测所有患者痰液中MTB DNA,以Xpert MTB/RIF检测实施验证性诊断。将细菌学培养结果作为金标准,比较不同检测方式对结核病的诊断效能;比较不同检测方式对肺结核及肺外结核的检出情况;比较不同检测方式对不同类型肺结核的检出情况。结果MTB DNA检测共检出结核病87例,其中3例误诊,18例漏诊;Xpert MTB/RIF检测共检出结核病62例,其中2例误诊,42例漏诊。MTB DNA检测诊断结核病的灵敏度、准确度及阴性预测值高于Xpert MTB/RIF检测(P<0.05);MTB DNA检测、Xpert MTB/RIF检测诊断结核病的特异度及阳性预测值无显著差异(P>0.05)。MTB DNA检测的肺结核检出率、肺外结核检出率高于Xpert MTB/RIF检测(P<0.05)。MTB DNA检测的继发性肺结核检出率高于Xpert MTB/RIF检测(P<0.05)。结论MTB DNA检测对结核病的诊断效能较佳,对肺结核或肺外结核的诊断价值均优于Xpert MTB/RIF检测,值得推广。

Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。

以肺泡灌洗液行结核/非结核分枝杆菌检测对菌阴肺结核的诊断价值

目的评估取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行结核/非结核分枝杆菌(MTB/NTM)检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法收集临床诊断为菌阴肺结核的324例患者资料,对上述患者进行支气管镜检查,所有患者取BALF标本,根据检测方法分为MTB/NTM组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTB检测)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测)、结核分枝杆菌环介导等温扩增技术(TBLAMP)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测)。结果MTB/NTM组罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTM检测阳性率分别为14.04%、1.75%、43.86%;GeneXpert MTB/RIF组罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为16.77%、3.73%、54.66%;TB-LAMP组罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测阳性率分别为18.87%、4.72%、49.06%。MTB/NTM、GeneXpert MTB/RIF、TB-LAMP检测分别与罗氏培养、涂片抗酸染色阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MTB/NTM检测与GeneXpert MTB/RIF检测、TB-LAMP检测比较,差异无统计学意义(χ^(2)=2.185,P=0.335)。结论MTB/NTM检测具有较好诊断效能,相对简单、快捷,相较于TB-LAMP检测、GeneXpert检测更经济,并能鉴别NTM,及时减少NTM病患者误诊后使用结核药引起身体损害及经济损失。

基于利福平耐药结核分枝杆菌半巢式实时荧光定量PCR技术检测胃液结核分枝杆菌在儿童肺结核中的诊断价值

目的分析基于利福平耐药结核分枝杆菌半巢式实时荧光定量PCR技术(Xpert-MTB/RIF)检测胃液结核分枝杆菌在儿童肺结核中的诊断价值。方法选取2020年1月到2021年12月贵阳市公共卫生救治中心儿童结核科收治50例疑似肺结核患儿作为研究对象,取所有患儿晨起空腹胃液,分别行抗酸染色涂片、Xpert-MTB/RIF及罗氏(L-J)培养检测。以MTB培养作为金标准,分析不同检测方法结果,比较不同检测方法对儿童肺结核的诊断效能,分析Xpert-MTB/RIF及L-J培养阳性患儿MTB利福平耐药性情况及Xpert-MTB/RIF检测法与L-J培养法的药敏试验一致性。结果50例疑似肺结核患儿中,MTB培养结果检出36例肺结核,肺炎14例。抗酸染色涂片法检出阳性1例,阴性49例;L-J培养法检出阳性11例,阴性39例;Xpert MTB/RIF检测法检出阳性18例,阴性32例。Xpert MTB/RIF检测法、L-J培养法对儿童肺结核的诊断灵敏度高于抗酸染色涂片检测法,差异有统计学意义(P<0.05),Xpert MTB/RIF检测与L-J培养法诊断灵敏度比较差异无统计学意义。不同检测方法对儿童肺结核的诊断特异度、阳性预测值、阴性预测值比较差异均无统计学意义。Xpert MTB/RIF检测MTB对利福平的耐药敏感结果与L-J培养法的一致性Kappa值为0.891,具有较高的一致性。结论Xpert MTB/RIF检测较方便与快捷,具有较高的诊断效能,其检测MTB对利福平的药敏试验结果与L-J培养法一致性较高,有利于临床及早诊断儿童肺结核疾病并进行干预指导。

肺组织结核菌培养和结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核患者的诊断价值

目的:探讨肺组织结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)检测在菌阴肺结核诊断中的应用价值。方法:选取南宁市第四人民医院2015年9月—2020年1月收治的68例疑似菌阴肺结核患者作为研究对象,所有患者采用全胸腔镜或胸腔镜辅助小切口行肺切除术,将手术切除的肺病灶组织浸泡在福尔马林溶液中固定,取部分组织进行肺组织结核菌培养和TB-DNA检测,剩余肺病灶组织进行病理检查。同时对患者痰液样本进行痰涂片检查。以病理检查结果为金标准,比较单独采用肺组织结核菌培养、TB-DNA检测及二者联合检测对菌阴肺结核的诊断价值。结果:68例患者痰涂片及病理检查诊断结果显示,菌阴肺结核42例,肺部其他疾病26例。肺组织结核菌培养检出菌阴肺结核与痰涂片及病理检查诊断一致性较高(Kappa=0.646,P<0.05),TB-DNA检测检出菌阴肺结核与痰涂片及病理检查诊断中度一致(Kappa=0.529,P<0.05),肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测检出菌阴肺结核与痰涂片及病理检查诊断一致性极好(Kappa=0.816,P<0.05)。肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测诊断菌阴肺结核的敏感度、正确率高于肺组织结核菌培养、TB-DNA单独检测,漏诊率低于肺组织结核菌培养、TB-DNA单独检测,差异有统计学意义(P<0.05);肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测诊断菌阴肺结核的特异性、阳性预测值、阴性预测值高于二者单独检测,误诊率低于二者单独检测,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肺组织结核菌培养、TB-DNA检测均是诊断菌阴肺结核的有效指标,且与二者单独检测相比,联合检测的检出率、敏感度和特异性更高。

Xpert MTB/RIF与结核分枝杆菌利福平耐药表型检测一致性分析

目的探讨Xpert MTB/RIF和表型药物敏感性试验(pDST)检测结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)耐药性结果的一致性,以及产生不一致结果的原因。方法对2020年云南省耐药监测中行Xpert MTB/RIF检测的672株MTB进行比例法pDST,对2种方法结果不一致的菌株进行全基因组测序(WGS)。结果以pDST结果为标准,XpertMTB/RIF检测MTBRFP耐药的敏感性为94.44%,特异性为97.32%,阳性预测值为66.67%,阴性预测值为99.52%。672株MTB中,有19株(2.83%)Xpert MTB/RIF与pDST检测结果不一致。2株Xpert MTB/RIF显示RFP敏感,pDST显示RFP耐药菌株中,未检出耐药突变1株,检出rpoB-Ile491Phe突变1株;17株Xpert MTB/RIF显示RFP耐药,pDST显示RFP敏感菌株均发现RFP耐药相关突变。Xpert MTB/RIF与pDST检测结果不一致的19株MTB均未发现明显的异质性耐药情况。结论Xpert MTB/RIF与pDST检测MTB RFP耐药结果一致性较好。结果不一致的主要原因为pDST结果的不稳定性、部分rpoB基因突变与RFP耐药相关性差,以及少数菌株发生了Xpert MTB/RIF靶点以外的其他罕见突变。

Xpert MTB/RIF Ultra在快速检测结核分枝杆菌和利福平耐药中的应用

目的探讨Xpert MTB/RIF Ultra在快速检测结核分枝杆菌和利福平耐药中的应用价值。方法收集2019年12月至2020年5月就诊于福州肺科医院的447例疑似肺结核患者的痰标本,分别进行MGIT960液体培养及药敏、Xpert MTB/RIF(Xpert)和Xpert Ultra检测,将检出MTB的菌株和痰液进行rpoB基因Sanger测序。以临床诊断结果为参照,比较MGIT960液体培养、Xpert、Xpert Ultra检测MTB的敏感度和特异度;分别以液体药敏和测序结果为金标准,评价Xpert Ultra检测MTB利福平耐药性的效能。结果以临床确诊为参照,Xpert Ultra敏感度高于液体培养和Xpert,差异有统计学意义(χ^(2)=28.97、164.86,P均<0.05),特异度与液体培养和Xpert比较差异无统计学意义(P均>0.05)。分别以利福平液体药敏表型结果和rpoB基因测序结果为金标准,Xpert Ultra的敏感度为88.89%和93.75%。同时经测序分析,35例利福平耐药样本中,rpoB的531位点突变最为常见,占48.57%。结论Xpert Ultra能快速检测痰液中的MTB及其利福平耐药性,对肺结核早期诊疗有良好的临床应用价值,适合在各级实验室推广。

结核分枝杆菌涂片镜检联合培养在肺结核患者痰液标本检测中的应用效果

目的:观察结核分枝杆菌涂片镜检联合培养在肺结核患者痰液标本检测中的应用效果。方法:选取2022年1月—12月山东省公共卫生临床中心846份疑似肺结核患者的痰液标本,分别进行涂片镜检、培养和涂片镜检联合培养检出,观察使用3种不同的方法对于分枝杆菌阳性的检出率。结果:846个痰样本中,初诊的痰样本635个,复诊的痰样本211个。培养检出187个样本为阳性者,阳性率为22.10%,其中初次诊断阳性痰液样本168个,阳性检出率为26.46%,复诊阳性的痰液标本有19个,阳性检出率为9.00%。痰涂片镜检检出阳性152个,阳性检出率17.97%,其中初次诊断的痰涂片阳性129个,阳性检出率为20.31%,复诊痰涂片阳性有23个,阳性检出率10.90%。用涂片镜检联合培养对846个痰标本进行检测,结果显示,206个标本为阳性,阳性检出率为24.35%,其中出诊标本中173个,阳性检出率为27.24%,复诊标本中,33个标本为阳性,阳性检出率为15.64%。培养的痰液中有18例感染,感染率为2.1%。初次诊断时,痰涂片阳性率显著低于培养阳性率(P<0.05)。复诊痰液样本的培养阳化率略低于涂片法的阳化率,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:痰涂片的培养阳性检出率高于涂片的阳性检出率,涂片镜检联合培养的阳性检出效果优于单一检测方法。

痰液标本结核分枝杆菌与支气管肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌培养结果比较

目的分析痰液标本结核分枝杆菌、支气管肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌培养结果。方法选取2020年1月至2021年6月宜春市人民医院收治的100例疑似肺结核患者作为研究对象,均接受痰液培养、支气管肺泡灌洗液培养,以临床综合诊断为金标准,比较两种结核分枝杆菌培养方法培养结果及诊断效能。结果支气管肺泡灌洗液培养结核分枝杆菌所需时间为(8.93±0.35)d,短于痰液培养的(23.98±2.44)d,差异有统计学意义(P<0.05)。100例疑似肺结核患者经临床综合诊断阳性91例,支气管肺泡灌洗液培养检出真阳性89例,痰液培养检出真阳性68例。支气管肺泡灌洗液培养结果对肺结核诊断的灵敏度、符合率均高于痰液培养,差异有统计学意义(P<0.05);两种检测方法特异度比较差异无统计学意义。结论支气管肺泡灌洗液培养诊断肺结核的灵敏度较高,有利于提高疑似肺结核患者疾病检出率,且该方法获得培养结果所需时间较短,值得临床推广应用。

用Xpert MTB/RIF技术快速诊断患者结核分枝杆菌感染及其对利福平耐药的临床价值

目的:探究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)/利福平耐药的实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)技术对MTB快速诊断与其对利福平耐药的临床价值。方法:选取2020年1月—2021年4月开封市结核病防治所收治的90例疑似肺结核患者的病例资料,统计其患者接受痰液细菌培养、Xpert MTB/RIF检测和药敏试验结果,参照痰液细菌培养结果为金标准,分析Xpert MTB/RIF法诊断MTB感染及其对利福平耐药的敏感度、特异度、准确率与Kappa一致性。结果:90例疑似肺结核患者的痰液细菌培养检测发现,75例患者(占83.33%)被确诊为肺结核,15例患者(占16.67%)为非肺结核;用Xpert MTB/RIF法诊断MTB感染的灵敏度为96.00%、特异度为93.33%、准确率为95.56%(Kappa=0.848);75例肺结核患者痰液细菌培养呈阳性的标本中分离出耐药菌株75株,药敏试验结果显示29株(占38.67%)对利福平耐药,46株(占61.33%)对利福平敏感;用Xpert MTB/RIF法检测利福平耐药的灵敏度为89.65%、特异度为97.83%、准确率为94.67%(Kappa=0.886)。结论:用Xpert MTB/RIF法快速诊断MTB感染及其对利福平的耐药情况,其检测结果与金标准比较具有较高的一致性,可用于MTB感染及其对利福平耐药的鉴别诊断。

内蒙古地区羊源副结核分枝杆菌的分离与基因分型

【目的】副结核病被世界动物卫生组织(OIE)列入必须报告的《OIE疫病、感染及侵染名录》,我国将其列为二类动物疫病,引起多种反刍动物慢性、增生性肠炎,感染动物通过肠道间歇性排菌而成为养殖场的持续传染源,给养殖业带来了巨大经济损失。其病原体副结核分枝杆菌(MAP)属于胞内寄生的革兰氏阳性菌,为三类动物病原微生物,包括S型(羊型,细分为Ⅰ型、Ⅲ型和骆驼型)和C型(牛型、Ⅱ型,包括B型(野牛型))。有研究表明,各亚型MAP无宿主特异性,但具有地域性,内蒙古作为国内该病的首发地区,获得并准确鉴定内蒙古地区MAP菌株亚型及基因特征,对副结核病的预防控制意义重大。【方法】对内蒙古地区来源的28份MAP阳性的羊源病料进行MAP分离培养,菌落Ziehl-Neelsen染色,染色阳性菌扩繁,提取扩繁菌液基因组DNA,进行IS900基因、IS1311基因和DMC基因扩增、测序和序列分析,同时IS1311基因PCR产物进行Hinf I和Mse I双酶切鉴定。【结果】28份样品经过7—12周培养,共有9支培养基长出菌落,菌落半透明乳白色、表面光滑。挑取单菌落进行抗酸染色,在显微镜下观察到呈不规则(单个或分枝状)、红染的细短杆菌,符合分枝杆菌的形态学特征及抗酸染色特性。9株分离菌IS900、IS1311和DMC基因PCR扩增产物均与目的基因片段预期大小一致。确定了本研究9株分离株均为MAP菌株,分别命名为MAP-NM1至MAP-NM9。DMC基因扩增产物大小为310bp,符合Ⅱ型MAP特征;IS1311基因扩增产物经HinfⅠ和MseⅠ双酶切,本研究9株MAP均得到4条目的条带,与Ⅱ型MAP一致;IS1311基因测序结果与S型、C型、印度野牛型和美国野牛型MAP代表株对照分析显示,9株MAP IS1311基因片段的64、65、68、223、236、422、527、628位碱基位点符合C型和B型MAP特征;IS900基因测序结果序列分析显示,9株MAP IS900基因片段第169位及第216位碱基分别为C(胞嘧啶)和A(腺嘌呤),符合Ⅱ型和Ⅲ型MAP特征;17株来自GenBank数据库的MAP IS900基因参考序列与本研究9株分离株IS900基因系统进化树显示,本研究9株MAP均划分于Ⅱ型MAP分支;3个基因测序结果进行Blast在线分析,与本研究所得分离株同源性最高的参考序列均为Ⅱ型MAP,且同源性均高于98%。综上所述,本研究9株MAP分离株均为Ⅱ型MAP。【结论】首次分离得到内蒙古地区羊源Ⅱ型MAP菌株。

基于免疫信息学的结核分枝杆菌多阶段多表位疫苗构建

目的构建一种包含结核分枝杆菌(MTB)早期分泌蛋白和潜伏感染相关抗原表位的多阶段多表位疫苗。方法运用免疫信息学方法预测12个MTB蛋白的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助性T细胞(HTL)表位,从中筛选具有抗原性且无细胞毒性和致敏性的表位构建多表位疫苗,并进行理化性质分析、二级结构预测,3D建模,模型精制、质量验证,与Toll样受体4(TLR4)受体分子对接,最后进行免疫模拟。结果MTB表位疫苗共包含12个B细胞表位、11个CTL表位和12个HTL表位,具有灵活、稳定的球形构象,热稳定性和亲水性好,可与TLR4稳定相互作用。免疫模拟表明该疫苗能够同时激发有效的细胞和体液免疫应答。结论提出了一种基于免疫信息学技术的多阶段多表位MTB疫苗构建策略,该疫苗可能对活动期和潜伏性MTB感染有预防作用。

GeneXpert MTB/RIF、MGIT960液体培养法在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨GeneXpert MTB/RIF、MGIT960液体培养法在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用。方法回顾性分析386例疑似和确诊结核病患者胸腔积液标本中腺苷脱氨酶(ADA)、GeneXpert MTB/RIF及MGIT960液体培养法的检测结果。以胸腔积液ADA>40 U/L作为鉴别结核性积液的标准,将标本分为3组:第1组为非结核性积液(ADA≤40 U/L,219例),第2组为结核性积液(ADA>40 U/L,145例),第3组为脓性胸腔积液(不能进行ADA检测,22例)。结果在386例患者中,GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌复合群的阳性率为15.54%(60/386),MGIT960液体培养法检测结核分枝杆菌复合群的阳性率为5.44%(21/386),前者检测阳性率明显高于后者(χ^(2)=14.52,P<0.05)。3组中,GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为3.20%、24.83%和77.27%;MGIT960液体培养法检测阳性率分别为2.74%、8.28%和13.64%。GeneXpert MTB/RIF在结核性积液、脓性胸腔积液中检测结核分枝杆菌复合群的阳性率明显高于MGIT960液体培养法(χ^(2)=14.38、17.97,P<0.05)。将采用MGIT960液体培养法检测为阳性的标本21例进行GeneXpert MTB/RIF检测发现,两种方法检测阳性结果的符合率为52.38%(11/21)。结论GeneXpert MTB/RIF检出结核分枝杆菌复合群的阳性率明显高于MGIT960液体培养法,特别是在结核性积液和脓性胸腔积液中。两种方法联合检测,有助于临床对结核性胸膜炎的早期诊断和治疗。