结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究

目的:通过比较分析卡介苗株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒株结核分枝杆菌临床分离株(XJ-MTB)的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性是否具有相关性。方法:首先提取上述四种不同毒力结核分枝杆菌菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;再运用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测各组菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;最后比较不同毒力结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果:四种不同毒力菌株PhoP基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(9.05)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.25)、BCG(0.08),且四种菌株中PhoP基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05);同时四种不同毒力菌株PhoR基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(5.72)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.18)、BCG(0.07),且四种菌株中PhoR基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05)。其中XJ-MTB菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平与BCG、H37Rv、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);H37Rv菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与BCG、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);而BCG菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与H37Ra相比统计学差异不显著(P>0.05)。结论:结核分枝杆菌PhoPR双组分系统中PhoP基因和PhoR基因在不同毒力结核分枝杆菌中的表达存在差异,并且该系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性存在相关性。

抗IFN-γ自身抗体相关非结核分枝杆菌感染研究进展

抗IFN-γ自身抗体引起成人免疫缺陷,从而导致机会性致病菌感染,是最近出现的医学问题。非结核分枝杆菌(NTM)感染是抗IFN-γ自身抗体阳性患者最常见的感染,近年来抗IFN-γ自身抗体相关的NTM感染不断增多。本文就抗IFN-γ自身抗体相关NTM感染的致病机制、NTM物种、临床表现及免疫调节辅助治疗等方面作一综述,为临床医生进一步了解此病,避免误诊和漏诊,并在合理治疗等方面提供帮助。

结核分枝杆菌L型致病性的实验研究

以结核分枝杆菌稳定Ｌ型感染豚鼠，证明结核分枝杆菌变为Ｌ型后致病性减弱，发病时间延长，ＯＴ试验阴性，引起的病理变化主要表现为组织的间质性炎症，有干酪样坏死，而无典型结核结节形成。原因在于细菌变为Ｌ型后细胞壁缺损，磷脂减少，不足以刺激巨噬细胞转变为上皮样组胞与郎罕氏巨细胞，而形成结核结节。在诊断上容易造成误诊或漏诊。

非结核分枝杆菌及其致病性的研究进展

非结核分枝杆菌是指除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌之外的其他分枝杆菌,种类多,分布广泛,属于致病菌或条件致病菌。近年来,非结核分枝杆菌患病率和分离率不断提高,引起广大医学工作者的高度重视,成为当前医疗工作者和科研工作者的主要研究目标。

结核分枝杆菌中Pup-蛋白酶体系统和致病性之间的关系

全世界约有1/3的人口感染结核分枝杆菌,每年有上百万人发病死亡[1]。目前结核病的诊断和治疗面临着巨大的挑战,尤其是活动性结核病以及耐药结核病的诊断及有效治疗问题。结核分枝杆菌本身的特点导致其和宿主之间的关系异常复杂,对其致病机制的认识依然不足。因此,对于结核分枝杆菌致病性和致病机制的研究是关键。

结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗的构建、鉴定和表达及其保护力

目的构建和鉴定结核分枝杆菌(MTB)重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb)-ESAT-6疫苗,研究该疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到ESAT-6抗原编码基因;将该基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-ESAT-6;用电穿孔法将该质粒导入Bb及BL21(DE3),构建结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗。用IPTG诱导重组BL21(DE3)菌表达ES-AT-6/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。65只BALB/c雌性小鼠,随机分为5组:A组(SC)、B组(IM)、C组(IN)、D组(Bb)、E组(PBS)。分别于免疫后8周用5×105CFU MTB H37Ra减毒株悬浮于10μL PBS中进行鼻腔粘膜接种感染。攻击感染后6w剖杀各组小鼠8只,计数肝、肺组织荷菌量,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖。结果PCR成功扩增出288bp的ESAT-6基因;双酶切证实ESAT6基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-ESAT-6疫苗构建成功。免疫印迹分析发现重组质粒pGEX-ESAT-6的表达产物在相对分子量(35kDa)处有明显的蛋白表达条带,表达效率为20%,且能被活动性结核病人血清特异识别。鼻腔内接种组的肝、肺组织荷菌量明显低于其他免疫组。疫苗接种组IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b明显升高,IgG3和IgE无明显变化;疫苗接种组的脾淋巴细胞明显增殖。结论成功构建了结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗,重组Bb-ESAT-6疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有一定免疫保护作用。

结核分枝杆菌的致病机理

结核病仍是全球健康的主要威胁,其致病菌结核分枝杆菌的致病机理与众不同。脂类代谢在致病中具有重要的作用。巨噬细胞被入侵的细菌修饰的机理也是研究细菌持续感染致病的重要突破点。研究细菌的致病机理可以为开发新的疫苗和治疗药物奠定坚实的基础。

结核分枝杆菌稳定L型致病性的研究

目的探讨结核分枝杆菌稳定L型的致病性.方法将不同浓度结核分枝杆菌稳定L型纯培养物经腹部皮下注射感染豚鼠,观察动物局部皮肤反应、腹股沟淋巴结肿大情况、结核菌素试验、病理变化、病变组织涂片染色及分离培养.结果剂量为2×104个/ml的结核分枝杆菌稳定L型注射后15d发生腹股沟淋巴结肿大,但局部皮肤未见红肿.2×106个/ml在12d后可见腹股沟淋巴结肿大,局部皮肤也未见红肿.病变组织病理切片是非特异性改变,切片抗酸染色未见抗酸菌但可见抗酸阴性的圆球体,分离培养未能够检出结核分枝杆菌L型或细菌型.结论结核分枝杆菌稳定L型仍然具有致病性,但毒力显著减弱,大剂量时能够引起动物局部组织发生非特异性的炎性病变.

不同毒力结核分枝杆菌对THP-1细胞凋亡及细胞因子表达的影响

为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六个时间点的凋亡情况,应用荧光定量PCR检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-6的转录水平,应用ELISA方法检测细胞上清液中三种细胞因子的分泌量。结果显示:BCG组和H37Rv组的早期凋亡率均显著高于对照组(P<0.05)。巨噬细胞细胞因子TNF-α、IL-6的转录水平与分泌水平相符,弱毒菌株巨噬细胞凋亡情况随时间延长成上升趋势,其分泌的细胞因子TNF-α表现为相同趋势,IL-6表现为相反趋势。强毒株巨噬细胞凋亡情况低于弱毒株,细胞因子分泌情况复杂,一般表现为一种先增强后抑制的情况。本试验通过对不同时间点细胞因子与凋亡情况关系的研究为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制提供新思路。

结核分枝杆菌毒力相关因子研究进展

结核病（tuberculosis）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）感染引起的传染病，也是单一致病菌感染导致病死率最高的疾病。近年来由于艾滋病的流行、人口流动、耐药结核病的增多，全球结核病发病率呈现出上升的趋势，结核病对人类的生命威胁仍旧十分严峻。据WHO报道，目前全世界约1／3的人口感染了结核分枝杆菌，

结核分枝杆菌进化与致病性的研究

分子流行病学是研究结核分枝杆菌传播和种群进化的有力工具。特别是近年来建立起来的单核苷酸多态性分型方法,能将结核分枝杆菌临床菌株分为三大家族,并且确立其种系发生关系。研究表明,不同进化分支上的结核分枝杆菌在不同的国家和地区流行,不同基因型菌株的致病性和传播力不尽相同。如细胞和动物模型都证明在东亚流行的北京基因型菌株比其他基因型菌株具有更高的毒力,能抑制宿主的免疫反应。本文综述近年来在结核分枝杆菌进化、分型及菌株致病性方面的研究成果。

非结核分枝杆菌分离与致病的相关性研究

目的探讨非结核分枝杆菌分离与非结核分枝杆菌病诊断的关系。方法对2007年1～12月我院检验科分离的非结核分枝杆菌的实验资料及相应病例资料进行回顾性分析。结果全年分枝杆菌培养阳性3046株，其中非结核分枝杆菌628株（占20．62％），它们包括鸟-胞内分枝杆菌复合群149株、戈登分枝杆菌98株、龟分枝杆菌90株、脓肿分枝杆菌90株、不产色分枝杆菌62株、瘰疬分枝杆菌31株、偶发分枝杆菌30株、耻垢分枝杆菌30株、次要分枝杆菌12株及其它非结核分枝杆菌56株。按中华医学会《非结核分支杆菌诊断与处理指南》（2000），从细菌学角度有13例鸟-胞内分枝杆菌病、9例龟分枝杆菌病、9例脓肿分枝杆菌病、4例偶发分枝杆菌病、2例不产色分枝杆菌病、1例戈登分枝杆菌病及1例其它非结核分枝杆菌病等39例病例确立诊断，涉及分离的非结核分枝杆菌96株。结论多数非结核分枝杆菌为定植菌或污染菌。偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌复合群等为非结核分枝杆菌病常见致病性菌种。

泛素样蛋白-蛋白酶体系统与结核分枝杆菌致病性的相关性研究进展

结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,MTB)中的泛素样蛋白-蛋白酶体系统(prokaryotic ubiquitin-like protein-proteasome system,PPS),主要介导和调控MTB体内蛋白质的降解。在特定环境下,MTB中泛素样蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup)选择性标记特定的蛋白质,并在辅助因子的帮助下将靶蛋白送入蛋白酶体内降解,对MTB在宿主体内的生长、繁殖及致病性发挥重要调控作用。本文首先简单介绍了MTB中Pup、蛋白酶体的结构特点、作用及PPS降解靶蛋白的主要过程,接着重点介绍了PPS对MTB致病性的调控机制,及如何通过改变PPS作用来降低MTB致病性等一些最新进展,希望能够为寻找新型抗结核药物提供方向。

PhoPR双组份系统在结核分枝杆菌致病机制中的研究进展

双组份信号转导系统(Two-component signal transduction system,TCS)广泛存在于原核生物细胞内,对细胞生长、分化、代谢、毒力、持留性、致病性等方面的调控发挥着重要作用。PhoPR TCS作为双组份系统中最基本、最重要的感应外界环境变化,并作出相应反应的调控系统,能够调控结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,MTB)更好的适应宿主微环境变化。因此PhoPR TCS作为MTB适应环境变化的重要调控系统已愈来愈受关注,关于PhoPR TCS在MTB的致病机制调控方面的研究正在成为新的热点。

结核分枝杆菌毒力基因研究进展

结核病是目前全球重点控制的传染病之一,结核分枝杆菌(简称结核杆菌)具有强大的致病性和传染力,而要彻底了解和控制结核杆菌,对其毒力基因的认识就显得非常重要。近年来世界各国投入了很大的人力物力研究结核杆菌的毒力基因。对毒力基因的认识将促进结核的疫苗研制、临床诊断与控制,具有十分重要的抗结核战略意义。

结核分枝杆菌致病机制及结核病新型诊断技术研究

结核分枝杆菌(Mtb)是重要的全球性致病菌,引起的结核病是世界上致死率最高的传染病之一。据世界卫生组织报告,全球每年有约200万人死于结核病,其中98%的死亡都发生在发展中国家,如南非、印度和中国等。我们课题组通过基础研究与临床需求的紧密结合,在Mtb的进化和致病机制研究以及结核病诊断和药敏快速检测新方法的建立等方面都取得了较大的进展。

痰液标本结核分枝杆菌与支气管肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌培养结果比较

目的分析痰液标本结核分枝杆菌、支气管肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌培养结果。方法选取2020年1月至2021年6月宜春市人民医院收治的100例疑似肺结核患者作为研究对象,均接受痰液培养、支气管肺泡灌洗液培养,以临床综合诊断为金标准,比较两种结核分枝杆菌培养方法培养结果及诊断效能。结果支气管肺泡灌洗液培养结核分枝杆菌所需时间为(8.93±0.35)d,短于痰液培养的(23.98±2.44)d,差异有统计学意义(P<0.05)。100例疑似肺结核患者经临床综合诊断阳性91例,支气管肺泡灌洗液培养检出真阳性89例,痰液培养检出真阳性68例。支气管肺泡灌洗液培养结果对肺结核诊断的灵敏度、符合率均高于痰液培养,差异有统计学意义(P<0.05);两种检测方法特异度比较差异无统计学意义。结论支气管肺泡灌洗液培养诊断肺结核的灵敏度较高,有利于提高疑似肺结核患者疾病检出率,且该方法获得培养结果所需时间较短,值得临床推广应用。

偶发分枝杆菌致病力初步探讨

为了探讨偶发分枝杆菌(Mf)的致病力,选用小鼠观察腹腔注射Mf菌后感染情况。结果表明,未经照射的对照组血培养均为阴性,肺、肝、肾Mf菌检出率分别为15%、30%、10%;经^(60)CO照射3Gy的小鼠有80%出现败血症,肺、肝、肾感染率为76.7%、83.3%、70.0%;照射2Gy的小鼠有60%出现败血症,肺、肝、肾感染率分别为60.0%、63.3%、33.3%。4只裸鼠中3只发生败血症,肺、肝、肾都检出Mf菌。本文结论是Mf菌感染与机体免疫功能低下有关。

初治涂阳肺结核患者治疗前后结核分枝杆菌毒力变化的探讨

目的分析初治涂阳肺结核患者经抗结核药物治疗前后结核分枝杆菌（MTB）的毒力变化情况。方法收集2014--2015年入选“武汉市初治涂阳肺结核免费隔离治疗项目”的患者中初治涂阳肺结核且经抗结核治疗2周后痰涂片仍未转阴者（未转阴组）治疗前、治疗1周后及治疗2周后分离的MTB（15株）；初治涂阳肺结核经抗结核药物治疗后2周内痰涂片转阴患者（转阴组）治疗前分离的MTB（4株）；耐多药结核病患者（对照组）治疗前分离的MTB（1株）。将上述不同类别患者不同时间点痰培养分离的MTB菌株于体外分别感染巨噬细胞3h和96h后，应用流式细胞术检测巨噬细胞早期凋亡水平，同时计数菌落数量，分析其变化情况。结果未转阴组治疗前、治疗1周后、治疗2周后分离的MTB菌株感染巨噬细胞3h后，诱导巨噬细胞早期凋亡率分别为（2．95±1．13）％、（4．21±1．92）％、（3．73±1．36）％，差异无统计学意义（F=3．38，P=0．086）；感染巨噬细胞96h后，诱导巨噬细胞早期凋亡率分别为（4．25±0．48）oA、（5．69±2．03）％、（5．06±1．25）％，差异无统计学意义（F=1．69，P=0．245）。未转阴组、转阴组及对照组患者治疗前痰培养分离的MTB菌株感染巨噬细胞3h后诱导巨噬细胞早期凋亡率分别为（2．95±1．13）％、（4．05±1．87）％、（4．38±0．29）％，差异无统计学意义（F=1．94，P=0．380）；感染巨噬细胞96h后，诱导巨噬细胞早期凋亡率分别为（4．25±0．48）％、（4．11±0．26）oA、（5．39±0．24）%，差异有统计学意义（F=11．97，P=0．003）。各组不同治疗时间所分离的MTB菌株感染巨噬细胞后菌落数量差异无统计学意义。结论初治涂阳肺结核经抗结核治疗后2周痰涂片仍未转阴患者所携带的MTB菌株毒力在治疗前后没有变化。

不同耐药类型结核分枝杆菌毒力变化的初步研究

目的初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床耐药分离株和实验室诱导耐药株的毒力变化表征。方法选取MTB标准株H37Rv和减毒株H37Ra各1株、4株临床耐药分离株(15833、16030、17080和30744,各1株)和8株实验室诱导耐药株[分别为单耐Pretomanid(PA-824)菌株(P1)、单耐利奈唑胺(Lzd)菌株(L1)、单耐PBTZ-169菌株(169-1、169-2、169-3,各1株),以及同时耐PA-824和Lzd的LPDR菌株(PL1、PL2、PL3,各1株)]。测定临床耐药分离株对一、二线抗结核药物和实验室诱导耐药株对Lzd、PA-824、PBTZ-169的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。绘制各研究菌株的体外生长曲线及测量感染巨噬细胞2d后的胞内菌落形成单位(colony forming units,CFU),并测定感染2d后巨噬细胞释放乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量。动物实验选取BALB/c小鼠168只,6~7周龄,体质量16~18g/只,分为14组,每组12只。将各耐药菌株以尾静脉注射的方式感染BALB/c小鼠,记录小鼠半数生存期,进行生存分析。结果体外实验表明,MTB临床耐药分离株30744生长曲线相比于其他耐药株的生长平台期提前,菌株体外适应性较低,其余各耐药菌株生长曲线趋势基本一致。临床耐药分离株(15833、16030、30744、17080)和对Lzd和PA-824同时耐药的实验室诱导耐药株(PL1、PL2、PL3)感染巨噬细胞2d后的胞内CFU计数[分别为(5.180±0.074)、(5.571±0.029)、(5.550±0.073)、(5.446±0.099)、(5.763±0.197)、(5.907±0.053)、(5.661±0.083)log10CFU/ml]明显低于标准株H37Rv[(6.207±0.028)log10CFU/ml],差异均有统计学意义(t=17.932、12.758、12.034、10.241、4.796、7.042、9.113,P值均<0.05)。另外,菌株15833、16030、30744、1708、P1、L1、PL1、PL2、PL3、169-1、169-2、169-3感染巨噬细胞2d后LDH释放量的吸光度A490值比值(分别为0.252±0.039、0.412±0.078、0.247±0.022、0.358±0.054、0.329±0.015、0.483±0.017、0.328±0.046、0.455±0.075、0.283±0.041、0.258±0.044、0.374±0.080、0.311±0.097)均明显低于标准株H37Rv(0.958±0.025),差异均有统计学意义(t=27.269、16.788、38.244、24.238、44.005、32.698、27.713、15.171、31.798、31.472、16.515、15.570,P值均<0.01)。体内毒力实验显示:(1)所有菌株感染小鼠后,半数生存期(≥15d)均明显长于H37Rv标准株(12d)。(2)小鼠生存曲线显示:准广泛耐药菌株感染小鼠的存活时间长于耐多药菌株,即30744>17080>16030>15833;双重耐药菌株LPDR组小鼠存活时间>PBTZ-169耐药菌株组=单耐Lzd组>单耐PA-824耐药菌株组。结论 MTB耐药株的毒力均较野生型标准株下降,毒力的大小与该菌株耐药的数量可能呈负相关。