结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(SapM)抑制小鼠巨噬细胞自噬

目的研究结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(Sap M)对小鼠巨噬细胞自噬的影响。方法分别用Sap M、渥曼青霉素、饥饿处理GFP-LC3-Raw264.7细胞。荧光显微镜下观察自噬体的形成,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ水平;再用Sap M处理GFP-LC3-Raw264.7细胞后加氯喹,Western blot法检测LC3Ⅱ水平。结果 Sap M和饥饿均导致GFP-LC3斑点增多和LC3Ⅱ水平增高,在Sap M处理的细胞中加入氯喹并没有引起LC3Ⅱ的进一步升高。结论 Sap M可阻断自噬体与溶酶体的融合,从而抑制小鼠巨噬细胞自噬。

结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶检测对结核病诊断价值的Meta分析

目的系统评价结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(TB-SA)检测对结核病的诊断价值。方法计算机检索CNKI、万方、维普、Medline、Embase、CochraneLibrary等数据库,筛选关于TB-SA检测对结核病诊断价值的中、英文文献并进行系统评价。对纳入的文献,采用诊断精确性研究的质量评估方法(QUADAS)进行质量评价,并用Meta-Disc1.4软件进行meta分析。结果共纳入符合要求的文献13篇,合并敏感度为0.70(95%CI:0.69～0.72),合并特异度为0.83(95%CI:0.82～0.85),合并阳性似然比为4.43(95%CI:3.32～5.92),合并阴性似然比为0.35(95%CI:0.30～0.42),合并诊断优势比为14.33(95%CI:9.17～22.37),汇总受试者工作特征曲结(SROC)下面积为0.8324。结论 TB-SA检测对结核病具有一定的诊断价值,可以辅助结核病的诊断。

SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM和Rab7的相互作用

目的研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用。方法采用Rab7小干扰RNA(si Rab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平。m Cherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测SapM与Rab7共定位情况,免疫共沉淀分析SapM与Rab7的关系。用3种SapM的突变体SapM△ARCA,SapM△FRED和SapM△CT转染Raw264.7细胞,分析SapM的不同突变体与Rab7的关系。结果 si Rab7处理后,细胞P62水平显著增高;免疫组织化学染色结果显示SapM与Rab7在胞内共定位;免疫共沉淀分析显示SapM与Rab7可相互沉淀;3种不同突变形式的SapM中,只有SapM△CT不能与Rab7相互作用。结论 SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM与Rab7的相互作用。