河南省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征

目的:分析河南省耐多药(MDR)结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法:收集150株MDR结核分枝杆菌,应用PCR扩增利福平耐药相关基因rpoB编码区全长并测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列,分析菌株的突变特征。结果:MDR菌株rpoB基因编码区存在突变者占97.2%(140/144),突变在利福平耐药决定区(RRDR)内者占96.5%(139/144),RRDR内和RRDR外同时存在突变者占99.3%(139/140);突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB516。发现未被记录的15个突变位点和4个突变类型,其中rpoB1284位点突变可能是多态性位点,与利福平耐药无关。结论:检测河南地区结核分枝杆菌rpoB基因RRDR内位点的突变可预测MDR结核分枝杆菌的耐药性。

应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药基因的研究

在全球范围内,结核分枝杆菌耐药率不断上升,高耐药和耐多药菌株不断出现和传播,对化疗疗效及结核病流行产生很大影响。利福平（RFP）作为1种主要的抗结核药物,对其耐药常常导致化疗失败。快速检测RFP耐药菌株对了解细菌耐药性有较大意义。我们收集了76株临床分离RFP耐药菌株，扩增rpoB基因的核心位点，并进行自主设计DNA芯片检测，并进行DNA直接测序，了解本地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征。

210株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征研究

目的了解结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法对结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)81个碱基在内的286bp的片段进行PCR-SSCP分析,并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌的rpoB基因此扩增区域进行序列测定。结果共对210株结核分枝杆菌临床分离菌株进行了研究,其中利福平耐药株110株,非利福平耐药株40株,敏感株60株。PCR-SSCP检测显示110株利福平耐药株中有75株有突变存在,经测序分析,77.3%(58/75)的菌株发生rpoB基因的单位点突变,主要集中在456位60.3%(35/58)和451位25.9%(15/58);22.7%(25/110)的菌株发生了联合突变。此外,经PCR-SSCP检测,40株非利福平耐药株中有3株发生突变,60株敏感株中有2株发生突变。经直接测序分析突变涉及位点为436位、451位和460位。结论结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因是rpoB基因耐药决定区发生突变,其中456位丝氨酸和451位组氨酸是最常见的突变位点。

HRCA技术联合DNA芯片检测结核分枝杆菌利福平耐药基因突变的初步分析

目的对超分支滚环扩增技术(hyperbranched rolling cycle amplification,HRCA)技术联合DNA芯片检测结核分枝杆菌利福平耐药基因突变进行初步分析。方法采用直接涂片检测在2013年至2015年期间搜集的898份痰液样本中结核分枝杆菌情况,同时采用改良罗氏培养法与HRCA技术联合DNA芯片法对阳性样本进行鉴定,并对利福平耐药基因进行初步分析。结果 989份检测的痰液样本中361份为阳性,涂阳率为40.2%。HRCA技术联合DNA芯片法阳性率为98.0%,显著高于改良罗氏培养法(35.2%),且差异具有统计学意义(P<0.05)。通过HRCA技术联合DNA芯片法发现85株结核分枝杆菌对利福平耐药,其中单纯rpoB基因突变比例为36.5%(31/344);katG基因与rpoB基因均突变比例为60.0%(51/344);inhA基因与rpoB基因突变比例均为3.5%(3/344);且二位点联合突变及单位点突变率分别为89.4%(76/85)与10.6%(9/85)。结论 HRCA技术联合DNA芯片法能够有效快速检出结核分枝杆菌突变基因,rpoB基因突变为主要结核分枝杆菌利福平耐药的基础,且突变呈现多样性。

广西百色地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征分析

目的分析百色地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测利福平耐药性,PCR技术检测耐药结核分枝杆菌rpoB基因序列并测序分析利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。结果分离培养获得98例MTB,98例MTB出现36株利福平耐药,耐药率为36.73%,36株耐利福平菌株中有27株rpoB基因发生突变,基因突变率为75.00%,其中516位点突变率为3.70%(1/27),531位点突变率为59.26%(16/27),526位点突变率为29.63%(8/27),533位点突变率为7.41%(2/27)。突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB533。结论百色地区耐利福平结核分枝杆菌耐药性产生的主要分子机制是因为rpoB的基因发生突变。

杭州地区结核分枝杆菌利福平耐药基因突变特征分析

在全球范围内，结核分枝杆菌耐药率不断上升，高耐药率和耐多药菌株不断出现和传播，对化疗疗效及结核病流行产生很大影响。利福平（RFP）作为一种主要的抗结核药物，若对其耐药常常导致化疗失败，因此快速检测RFP耐药菌株对了解细菌耐药性具有较大意义。现笔者根据临床药敏试验结果，收集了经临床分离的RFP耐药菌株，通过PCR扩增rpoB基因的核心位点，进行DNA直接测序，以期了解杭州地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征。报道如下。

聚合酶链反应-单链构象多态性技术鉴别结核分枝杆菌利福平耐药基因

目的:采用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌rpoB基因突变,并探讨其在结核分枝杆菌对RFP耐药性测定方面的临床价值。方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性技术分别检测48株RFP药物敏感和耐药结核分支杆菌临床分离株,先用PCR扩增rpoB基因,随后用SSCP方法鉴定其扩增产物有无突变,并与药敏结果做对照分析。结果:48株结核临床分离株中11株RFP敏感株SSCP带谱均与对照相同,37株RFP耐药株中有3株带谱与对照相同,另34株SSCP带谱与对照有不同程度的差异。48株临床分离株的L-J药敏法与SSCP的平行分析结果对比,PCR-SSCP方法检测RFP耐药结核菌的敏感性为91.90%,特异性为90.90%。结论:PCR-SSCP技术可快速准确检测结核分枝杆菌rpoB基因突变,此技术可用于临床结核分枝杆菌RFP药物敏感性的直接快速检测,以及时指导临床合理选用敏感抗结核药物。

超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术在结核病诊断中的应用进展

1结核病现状结核病是严重危害人类健康的传染性疾病之一,是仅次于新型冠状病毒感染的第二大传染病杀手,是全球第13大死因[1]。2022年10月27日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布《2022全球结核病报告》[2](以下简称报告)指出,2021年全球新发结核病患者约1060万人,其中儿童约120万人。受新型冠状病毒的影响,全球结核病发病率与2020年相比上升了3.6%,打破了过去20年间每年约2%的下降趋势。2019年至2021年,全球因结核病死亡人数有所增加,2021年全球共有160万人死于结核病,相当于倒退到2017年的水平。2020年至2021年全球耐药结核病负担增加了3%,2021年报告了45万例利福平耐药结核病例,需要治疗的耐药结核患者中仅有36%的人接受了治疗,并且全球耐药结核的成功治疗率只有60%。2021年全球结核病基本医疗服务支出也从2019年的60亿美元下降至54亿美元,而2022年所需的费用为130亿美元[2],资金缺口巨大。

2019—2021年宜春地区患者结核分枝杆菌利福平耐药株基因型分析研究

目的:探究2019—2021年宜春地区结核分枝杆菌利福平耐药株基因型。方法:选择2019年1月—2021年12月于宜春市人民医院接受治疗的肺结核患者100例,采集所有患者痰液样本进行检测。分析结核分枝杆菌分离情况及耐药性,另分析利福平耐药株基因型。结果:100例患者中共分离出结核分枝杆菌47株,分离率为47.00%,2019、2020、2021年结核分枝杆菌分离率分别为33.33%、45.95%、54.76%。2019年分离出结核分枝杆菌7株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为42.86%、28.57%、28.57%;2020年分离出结核分枝杆菌17株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为58.82%、29.41%、11.76%;2021年分离出结核分枝杆菌23株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为60.87%、21.74%、17.39%。结核分枝杆菌对利福平耐药率最高。经rpoB基因测序可见27株利福平耐药株均发生rpoB基因变异,基因突变率为100%(27/27),突变基因位点主要位于509~533位。结论:2019—2021年宜春地区结核分枝杆菌感染率呈逐年上升趋势,结核分枝杆菌感染患者对利福平存在较高的耐药性,且rpoB基因位点突变的发生与利福平耐药间存在密切联系。

Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测在结核病诊断中的应用价值

目的 探讨运用Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测(MTB/RIF)对疑似肺结核患者的诊断效能。方法 结合病原学、影像学诊断结果,选取郑州人民医院和郑州市中心医院2021年1—12月收治的248例疑似肺结核患者为研究对象,留取痰液或肺泡灌洗液进行培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色和液基集菌涂片染色检测,对Xpert MTB/RIF在肺结核疑似患者中的诊断效能进行评估。结果 248例研究对象中,最终诊断为肺结核122例。MTB液体培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色涂片、液基集菌染色检测诊断肺结核的敏感度分别为54.10%、97.54%、7.38%、16.39%,特异度分别为98.41%、98.41%、95.24%、93.65%。Xpert MTB/RIF检测结果的敏感度优于其他3种检测方法,且漏检率最低。结论 Xpert MTB/RIF能提高MTB的阳性检出率,对结核病的早期诊断及有效防控均有益处,具有实际临床应用价值。

聚合酶链反应熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药的临床价值分析

目的:评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)熔解曲线法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对利福平和异烟肼耐药的临床价值,为临床MTB耐药情况的快速、准确检测提供参考。方法:选取2023年10月-2024年4月苏州市第五人民医院收治的153例结核病患者作为研究对象,留取所有患者的痰液标本、纤支镜洗液标本和培养菌株标本,同时采用荧光PCR熔解曲线法、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(XpertMTB/RIF法)和微孔板药敏法检测MTB对异烟肼和利福平的耐药情况,分析荧光PCR熔解曲线法检测MTB对利福平和异烟肼耐药的临床价值。结果:微孔板药敏法检测结果显示,153例结核病患者中有43例的MTB为耐药型,其中单利福平耐药的有1例(占0.65%),单异烟肼耐药的有15例(占9.80%),利福平+异烟肼耐药的有27例(占17.65%);与Xpert MTB/RIF法相比,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对利福平耐药的符合率、阳性预测值、阴性预测值、灵敏性、特异性分别为98.04%、90.91%、100.00%、100.00%、97.56%,而其Kappa值为0.94;与微孔板药敏法相比,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对利福平耐药的符合率、阳性预测值、阴性预测值、灵敏性、特异性和Kappa值分别为95.42%、81.82%、99.17%、96.42%、95.20%、0.86,而其检测MTB对异烟肼耐药的符合率、阳性预测值、阴性预测值、灵敏性、特异性和Kappa值分别为94.12%、92.31%、94.74%、85.71%、97.30%、0.85。结论:对于MTB对利福平和异烟肼的耐药检测,荧光PCR熔解曲线法与Xpert MTB/RIF法、微孔板药敏法几乎完全一致,可为临床耐药结核病的早期诊断提供较为可靠的依据。

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征与利福平耐药水平关系的研究

目的了解结核分枝杆菌rpoB基因突变特征与利福平耐药水平的关系。方法测定266株(109株利福平耐药株,157株利福平敏感株)结核分枝杆菌利福平MIC值及其rpoB基因序列,分析不同突变特征的菌株其利福平MIC值的差异。结果 109株利福平耐药株rpoB基因皆发生错义突变,常见突变密码子531与526的突变频率分别为69.7%与17.4%。利福平耐药株中单密码子突变株占82.6%,多重密码子突变株占17.4%。531单密码子突变株与526单密码子突变株之间平均利福平MIC值差异无统计学意义(P=0.87),但两独立样本T检验分析显示,多重密码子突变株平均利福平MIC值(115.8μg/mL)显著高于单密码子突变株平均利福平MIC值(48.4μg/mL)(t=2.659,P=0.016)。利福平敏感株未发生错义突变。5.5%(6/109)的利福平耐药株仅在rpoB基因起始端发生突变,突变密码子分别是247,251和253。结论 531与526是最常见突变密码子,且以单密码子突变为主;531与526单密码子突变株之间利福平耐药水平差异无统计学意义,但多重密码子突变株利福平耐药水平显著高于单密码子突变株利福平耐药水平;rpoB基因起始端突变可能是除利福平耐药决定区域之外导致利福平耐药的第2个耐药决定区;rpoB基因DNA序列分析有助于结核分枝杆菌利福平耐药表型和耐药水平的预测。

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。 方法 应用绝对浓度法测定 5 8株结核分枝杆菌对 4种一线抗结核药物的药敏特性 ,对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序 ,分析rpoB基因突变与多重耐药的关系 ,以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果 5 8株结核分枝杆菌中 ,利福平耐药株 36株 ,敏感株 2 2株。 36株耐药株均存在rpoB基因突变 ,其中 88.9% (32 / 36 )至少对利福平和异烟肼同时耐药。 90 .0 %的利福平高度耐药株 (18/ 2 0 )与rpoB基因 5 31位和 5 2 6位密码子突变相关。密码子 5 31位和 5 2 6位各有 1株双碱基突变 ,且均为多重耐药株。结论 结核分枝杆菌rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药 ,因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌 ;

广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因特征分析

目的分析广州地区利奈唑胺(linezolid,LZD)耐药结核分枝杆菌临床分离株耐药基因的突变特征,为控制广州地区耐利奈唑胺结核病提供一定的研究基础和依据。方法选取2012年1月~2022年1月广州市胸科医院住院患者的60株利奈唑胺耐药结核分枝杆菌的临床分离株,分为耐多药组和广泛耐药组。采用微孔板稀释法对60株菌株进行利奈唑胺最低抑菌浓度(MIC)检测,并对60株菌株的利奈唑胺耐药基因23S rRNA、rplC、rplD进行测序,分析其突变特征。结果60株LZD耐药株对LZD的MIC值分布于2~32μg/ml之间。耐多药组的MIC50和MIC90分别为2μg/ml、32μg/ml,广泛耐药组的MIC50和MIC90分别为8μg/ml、32μg/ml。60株菌株中发现有12株23S rRNA基因发生突变,其中有1株发生两个基因位点突变;有11株rplC基因发生突变,其中有1株发生双位点突变;发现2株rplD基因发生突变。23S rRNA、rplC基因突变发生率在不同性别和年龄患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因23S rRNA、rplC突变发生率明显高于rplD,在不同性别和不同年龄患者中的发生率无显著差异。

基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价

目的评价基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床应用效果。方法利用基因芯片技术对涂阳肺结核患者的痰标本和临床分离株进行利福平和异烟肼耐药基因位点检测,比较痰标本与菌株检测结果的差异;并以BACTEC MGIT 960药敏试验结果为对照评价基因芯片的检测性能。另外,通过对999株鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株进行rpoB、katG和inhA基因耐药相关区域扩增产物测序,以验证基因芯片对核酸序列检测的准确性。结果在涂阳的1 108例标本中有100例经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌。其余的1 008例痰标本基因芯片结果与BACTEC MGIT960培养阳性的菌株基因芯片结果比较仅有9例结果不一致,符合率为99.1%。以BACTEC MGIT960培养法药敏结果为对照,999株菌株基因芯片法检测利福平耐药性的符合率为98.1%,异烟肼的耐药性的符合率为94.5%。与DNA测序法相比,基因芯片法检测利福平和异烟肼耐药性的准确率分别为99.6%和99.8%。结论基因芯片技术能够快速、准确地进行结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性检测,并能直接用于痰标本检测。

盐都区利福平耐药肺结核患者临床特征及治疗转归分析

目的分析盐都区利福平耐药肺结核(RR-PTB)患者临床特征及治疗情况。方法收集2012—2021年盐城市盐都区登记确诊的肺结核患者的临床资料,分析肺结核患者耐药情况、RR-PTB患者的临床特征及治疗转归情况。结果2012—2021年盐都区共发现病原学阳性肺结核患者864例,占所有肺结核患者的30.76%(864/2809);2012—2021年盐都区RR-PTB检出率为11.67%(93/797),呈先上升后下降趋势。2012—2016年、<60岁、高危人群的耐药肺结核(DR-PTB)、RR-PTB和耐多药肺结核(MDR-PTB)检出率均高于2017—2021年、≥60岁、非高危人群(P<0.05)。2012—2021年盐都区共67例RR-PTB患者纳入治疗,成功治疗率为71.64%(48/67)。2017—2021年、<60岁、非高危人群、6个月末痰培养阴性患者的成功治疗率较高,诊断天数≥30 d、合并糖尿病、合并空洞病灶、中断治疗≥14 d患者的成功治疗率较低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论盐都区RR-PTB的防治工作取得了显著成效,但应重点关注≥60岁、高危人群、合并糖尿病、合并空洞病灶等RR-PTB患者的治疗管理,制定针对性的综合防控措施,提高成功治疗率。

徐州地区结核分枝杆菌基因分型及其与利福平耐药基因突变的关系

目的探究徐州地区结核分枝杆菌的基因型分布特征及其与利福平耐药基因突变形成的关系。方法选取徐州市传染病医院结核病实验室基因型毒株500株,其中含有经罗氏比例法鉴定的耐利福平临床分离株300株和利福平敏感200株,采用间隔区寡核苷酸分型(spoligotyping)分析其基因型结构及其与利福平抗性基因的突变关系。结果徐州地区的结核分枝杆菌的基因分型主要为北京家族基因群(61.2%)和非北京家族基因群(38.8%),利福平耐药和敏感组北京家族基因群的构成比差异无统计学意义(2=0.09,P>0.05);北京家族531位点、516位点以及531和526位点突变率分别为55.49%、10.99%和7.69%与非北京家族33.90%、21.19%和15.25%相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论徐州地区结核分枝杆菌基因型为北京家族基因群和非北京家族基因群,非北京家族基因群具有基因多态性,两者与利福平耐药率无明显相关,两者在单531、单516以及531和526利福平耐药位点突变率存在差异。

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的研究

目的探讨基因芯片技术在检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的应用。方法收集21例临床诊断结核病患者体液标本经培养得到的分离菌液,进行基因芯片检测,包括利福平的rpoB基因位点和异烟肼的KatG和inhA基因位点,从而判断其耐药性。结果 21例样本中,利福平rpoB基因有10例突变,总突变率为47.6%,其中9例为531位点的(C-T)突变,1例526位点的(C-G)突变。与药敏试验的符合率为81.0%。异烟肼基因突变有6例,总突变率为28.6%,其中4例为KatG 315(G-C)突变,2例为inhA-15(C-T)突变。与药敏试验的符合率为90.5%。利福平的11例耐药株中,基因芯片检测8例为突变型,突变率为72.7%,在利福平的10例敏感株中,基因芯片检测2例为突变型,突变率为20.0%。在异烟肼的6例耐药株中,基因芯片检测5例为突变型,突变率为83.3%,在异烟肼的15例敏感株中,基因芯片检测1例为突变型,突变率为6.7%。结论基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。

结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药表型及rpoB基因型分析

目的分析结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株利福平(rifampin,RFP)耐药表型及rpoB基因突变关系,阐明MTB RFP耐药株rpoB基因突变特征。方法采用改良罗氏培养基比例法检测387株MTB临床分离株对RFP敏感性,并进行rpoB基因测序。对经测序rpoB基因511位和533位密码子突变株进行RFP最小抑菌浓度(MIC)检测。结果比例法检测387株MTB临床分离株中1,98株RFP耐药株,189株RFP敏感株。rpoB基因测序结果表明1,98株比例法RFP耐药株中1,92株(96.97%)发生rpoB基因突变,涉及16种单位点和24种双位点密码子联合突变类型,单位点和双位点密码子联合突变率分别为84.34%(167/198)和12.63%(25/198),其中发现1种单位点和21种双位点密码子联合突变新类型。最常见的突变位点为531位(51.01%)、526位(21.21%)和516位(7.07%)密码子。6株(3.03%)耐药株在rpoB测序范围内未见突变。189株比例法RFP敏感株中,174株(92.06%)在rpoB基因测序范围内未见突变1,5株(7.94%)发生突变,其中7株CTG511CCG(Leu→Pro)突变和6株CTG533CCG(Leu→Pro)突变。511位和533位密码子突变株MIC检测结果提示其突变与低度耐RFP相关。结论所得数据及一些新的发现为进一步研究MTB RFP耐药机制、研制快速新型分子药敏试验方法提供理论和实际应用依据。

某院结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因特征

目的了解某院结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpo B及异烟肼耐药相关基因kat G、inh A的突变特征,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。方法收集83例结核病患者痰标本,分离培养MTB,采用BD960液体法检测利福平、异烟肼耐药性,提取菌株DNA,采用聚合酶链反应扩增rpo B、kat G、inh A全基因,对扩增产物进行测序分析。结果 83株样本中,39株对利福平耐药,51株对异烟肼耐药。耐利福平菌株rpo B基因突变率为97.44%(38/39),531位点突变率60.53%(23/38),526位点突变率23.68%(9/38),32株出现多位点联合突变。耐异烟肼菌株kat G基因突变率为98.04%(50/51),共发现16种突变类型,其中以kat G 315位点突变为主,占70.00%(35/50),1株为kat G与inh A联合突变。结论该院耐多药MTB产生耐药性与rpo B和kat G基因突变相关,检测MTB耐多药相关基因突变可为早期快速诊断耐药结核病提供参考依据。