超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术在结核病诊断中的应用进展

1结核病现状结核病是严重危害人类健康的传染性疾病之一,是仅次于新型冠状病毒感染的第二大传染病杀手,是全球第13大死因[1]。2022年10月27日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布《2022全球结核病报告》[2](以下简称报告)指出,2021年全球新发结核病患者约1060万人,其中儿童约120万人。受新型冠状病毒的影响,全球结核病发病率与2020年相比上升了3.6%,打破了过去20年间每年约2%的下降趋势。2019年至2021年,全球因结核病死亡人数有所增加,2021年全球共有160万人死于结核病,相当于倒退到2017年的水平。2020年至2021年全球耐药结核病负担增加了3%,2021年报告了45万例利福平耐药结核病例,需要治疗的耐药结核患者中仅有36%的人接受了治疗,并且全球耐药结核的成功治疗率只有60%。2021年全球结核病基本医疗服务支出也从2019年的60亿美元下降至54亿美元,而2022年所需的费用为130亿美元[2],资金缺口巨大。

Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测在结核病诊断中的应用价值

目的 探讨运用Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测(MTB/RIF)对疑似肺结核患者的诊断效能。方法 结合病原学、影像学诊断结果,选取郑州人民医院和郑州市中心医院2021年1—12月收治的248例疑似肺结核患者为研究对象,留取痰液或肺泡灌洗液进行培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色和液基集菌涂片染色检测,对Xpert MTB/RIF在肺结核疑似患者中的诊断效能进行评估。结果 248例研究对象中,最终诊断为肺结核122例。MTB液体培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色涂片、液基集菌染色检测诊断肺结核的敏感度分别为54.10%、97.54%、7.38%、16.39%,特异度分别为98.41%、98.41%、95.24%、93.65%。Xpert MTB/RIF检测结果的敏感度优于其他3种检测方法,且漏检率最低。结论 Xpert MTB/RIF能提高MTB的阳性检出率,对结核病的早期诊断及有效防控均有益处,具有实际临床应用价值。

2019—2021年宜春地区患者结核分枝杆菌利福平耐药株基因型分析研究

目的:探究2019—2021年宜春地区结核分枝杆菌利福平耐药株基因型。方法:选择2019年1月—2021年12月于宜春市人民医院接受治疗的肺结核患者100例,采集所有患者痰液样本进行检测。分析结核分枝杆菌分离情况及耐药性,另分析利福平耐药株基因型。结果:100例患者中共分离出结核分枝杆菌47株,分离率为47.00%,2019、2020、2021年结核分枝杆菌分离率分别为33.33%、45.95%、54.76%。2019年分离出结核分枝杆菌7株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为42.86%、28.57%、28.57%;2020年分离出结核分枝杆菌17株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为58.82%、29.41%、11.76%;2021年分离出结核分枝杆菌23株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为60.87%、21.74%、17.39%。结核分枝杆菌对利福平耐药率最高。经rpoB基因测序可见27株利福平耐药株均发生rpoB基因变异,基因突变率为100%(27/27),突变基因位点主要位于509~533位。结论:2019—2021年宜春地区结核分枝杆菌感染率呈逐年上升趋势,结核分枝杆菌感染患者对利福平存在较高的耐药性,且rpoB基因位点突变的发生与利福平耐药间存在密切联系。

结核分枝杆菌利福平耐药的分子机制及检测技术

结核病是一种由结核分枝杆菌引起的人畜共患病,长期以来不仅给人类健康产生巨大威胁,也给养殖场(户)造成巨大的经济损失。利福平作为一个关键性药物,在结核病漫长的治疗历程中发挥了里程牌作用,但随着药物的使用,结核分支杆菌对利福平的耐药性愈发普遍,给结核病治疗带来了挑战。本文对结核分枝杆菌利福平耐药的机制及检测技术做一简单概述,以期为临床上治疗结核病制定合理用药方案提供参考。

荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用研究

探讨在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,观察分析应用价值。方法 本研究的时长段在2022年6月到2023年6月,统共1000例结核患者接受治疗,所有病患都拓展了抗结核药物的测验,且每一位患者的标本均予以荧光定量PCR探针熔解曲线法检测,药物敏感性测定结果为黄金基准,考察判辨荧光定量PCR探针熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的诊断效能。结果 针对1000例的标本中,经过液体药敏试验检测显示对利福平药物耐药例数250例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者;对异烟肼医药有耐药性的液体药敏试验500例,应用溶解曲线检测耐药性包含了470例;经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数170例,予以熔解曲线法显示耐药140例。经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数300例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者。熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的灵敏度分别为84.00%、84.00%、47.06%、66.67%;特异度分别为96.00%、90.00%、84.34%、94.29%;准确度分别为93.00%、97.00%、91.00%、86.00%。结论 在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,可得到较高的应用价值,灵敏度、特异度、准确度较高,可筛查结核病患者对利福平、异烟肼、乙胺丁醇等药物的耐药性,为临床治疗疾病提供可靠的依据。

广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因特征分析

目的分析广州地区利奈唑胺(linezolid,LZD)耐药结核分枝杆菌临床分离株耐药基因的突变特征,为控制广州地区耐利奈唑胺结核病提供一定的研究基础和依据。方法选取2012年1月~2022年1月广州市胸科医院住院患者的60株利奈唑胺耐药结核分枝杆菌的临床分离株,分为耐多药组和广泛耐药组。采用微孔板稀释法对60株菌株进行利奈唑胺最低抑菌浓度(MIC)检测,并对60株菌株的利奈唑胺耐药基因23S rRNA、rplC、rplD进行测序,分析其突变特征。结果60株LZD耐药株对LZD的MIC值分布于2~32μg/ml之间。耐多药组的MIC50和MIC90分别为2μg/ml、32μg/ml,广泛耐药组的MIC50和MIC90分别为8μg/ml、32μg/ml。60株菌株中发现有12株23S rRNA基因发生突变,其中有1株发生两个基因位点突变;有11株rplC基因发生突变,其中有1株发生双位点突变;发现2株rplD基因发生突变。23S rRNA、rplC基因突变发生率在不同性别和年龄患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因23S rRNA、rplC突变发生率明显高于rplD,在不同性别和不同年龄患者中的发生率无显著差异。

探究结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值

研究、分析结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值。方法 抽取2023年1月至2024年1月我院收治的耐药肺结核患者(40例),均分为对照组、研究组,各20例,分别实施常规药敏试验、结核分枝杆菌耐药基因检测。结果 研究组耐药检出准确率较高,反观对照组则相对较低,组间有统计学意义(P<0.05);研究组基因突变检出率高于对照组(P<0.05)。结论 在耐药肺结核的治疗中,结核分枝杆菌耐药基因检测的应用价值明显,可为治疗方案的制定或调整提供可靠依据,值得推广。

(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌抑制作用及其生物被膜调控基因的影响

目的 研究(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌体外抑制作用及其生物被膜调控基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的影响。方法 通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)筛选含生物被膜调控基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的耐药结核分枝杆菌,采用刃天青显色法和液体培养计数法测定(R)-(+)-长叶薄荷酮对生物被膜介导的耐药结核分枝杆菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibit concentration, MIC)和最低杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration, MBC),应用反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌生物被膜调控基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的影响。结果 在3×10^(7) CFU/mL和3×10^(6) CFU/mL菌液浓度下,刃天青显色法测得(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌的MIC和MBC分别为14.79、29.59 mg/mL;液体培养计数法测得(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌的MIC_(90)和MBC分别为19.89、24.62 mg/mL。RT-PCR法结果表明长叶薄荷酮可抑制Rv0024、Ra1362的表达,促进Rv2872的表达(P<0.05)。结论 (R)-(+)-长叶薄荷酮通过调控耐药结核分枝杆菌生物被膜主要基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的表达,达到抑制耐药结核分枝杆菌的生长的作用。

Xpert MTB/RIF与结核分枝杆菌利福平耐药表型检测一致性分析

目的探讨Xpert MTB/RIF和表型药物敏感性试验(pDST)检测结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)耐药性结果的一致性,以及产生不一致结果的原因。方法对2020年云南省耐药监测中行Xpert MTB/RIF检测的672株MTB进行比例法pDST,对2种方法结果不一致的菌株进行全基因组测序(WGS)。结果以pDST结果为标准,XpertMTB/RIF检测MTBRFP耐药的敏感性为94.44%,特异性为97.32%,阳性预测值为66.67%,阴性预测值为99.52%。672株MTB中,有19株(2.83%)Xpert MTB/RIF与pDST检测结果不一致。2株Xpert MTB/RIF显示RFP敏感,pDST显示RFP耐药菌株中,未检出耐药突变1株,检出rpoB-Ile491Phe突变1株;17株Xpert MTB/RIF显示RFP耐药,pDST显示RFP敏感菌株均发现RFP耐药相关突变。Xpert MTB/RIF与pDST检测结果不一致的19株MTB均未发现明显的异质性耐药情况。结论Xpert MTB/RIF与pDST检测MTB RFP耐药结果一致性较好。结果不一致的主要原因为pDST结果的不稳定性、部分rpoB基因突变与RFP耐药相关性差,以及少数菌株发生了Xpert MTB/RIF靶点以外的其他罕见突变。

结核分枝杆菌耐药机制与检测技术的研究进展

结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性呼吸道传染病,对人类健康和生命危害极大。在治疗过程中,随着抗结核药物的广泛应用和结核病患者长期使用抗结核药物,导致耐药菌株的出现并不断传播。在结核病高发的非洲和亚洲,耐多药结核病(multi drug-resistant tuberculosis,MDR-TB)患者已超过1000万,成为结核病的主要传染源。MDR-TB患者中耐药菌株的出现,将导致更多结核病患者因病情严重而死亡。因此,了解MDR-TB耐药机制,建立准确可靠的耐药检测技术,对于指导临床合理用药和有效治疗结核病具有重要意义。

基于基因芯片技术对耐利福平或异烟肼结核分枝杆菌基因突变位点的检测分析

目的:分析基因芯片技术对耐利福平或异烟肼结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)基因突变位点的检测情况,为耐多药结核的临床诊断提供依据。方法:收集2020年—2023年在苏州市第五人民医院就诊的395例结核患者的痰液标本,采用基因芯片技术对利福平耐药基因ropB(511、513、516、526、531、533)和异烟肼耐药基因KatG(315)、inhA(-15)突变位点进行检测,以罗氏固体培养绝对浓度法作为金标准,分析基因芯片技术对MTB耐利福平或异烟肼的准确性。结果:基因芯片技术对利福平耐药诊断的Kappa值为0.80,符合率为92.15%,灵敏度为87.74%,特异度为93.77%,阳性预测值为83.78%,阴性预测值为95.42%,而对异烟肼耐药诊断的Kappa值为0.87,符合率为93.42%,灵敏度为98.82%,特异度为89.38%,阳性预测值为87.43%,阴性预测值为99.02%。结论:基因芯片技术可以快速、高效地检测MTB耐利福平和耐异烟肼基因突变,与罗氏固体培养绝对浓度法高度一致,可为临床诊疗提供依据。

Xpert MTB/RIF Ultra在快速检测结核分枝杆菌和利福平耐药中的应用

目的探讨Xpert MTB/RIF Ultra在快速检测结核分枝杆菌和利福平耐药中的应用价值。方法收集2019年12月至2020年5月就诊于福州肺科医院的447例疑似肺结核患者的痰标本,分别进行MGIT960液体培养及药敏、Xpert MTB/RIF(Xpert)和Xpert Ultra检测,将检出MTB的菌株和痰液进行rpoB基因Sanger测序。以临床诊断结果为参照,比较MGIT960液体培养、Xpert、Xpert Ultra检测MTB的敏感度和特异度;分别以液体药敏和测序结果为金标准,评价Xpert Ultra检测MTB利福平耐药性的效能。结果以临床确诊为参照,Xpert Ultra敏感度高于液体培养和Xpert,差异有统计学意义(χ^(2)=28.97、164.86,P均<0.05),特异度与液体培养和Xpert比较差异无统计学意义(P均>0.05)。分别以利福平液体药敏表型结果和rpoB基因测序结果为金标准,Xpert Ultra的敏感度为88.89%和93.75%。同时经测序分析,35例利福平耐药样本中,rpoB的531位点突变最为常见,占48.57%。结论Xpert Ultra能快速检测痰液中的MTB及其利福平耐药性,对肺结核早期诊疗有良好的临床应用价值,适合在各级实验室推广。

结核分枝杆菌耐药基因突变特征及与耐药水平关系的研究

探讨结核分枝杆菌耐药基因突变特征及与耐药水平关系,以掌握结核分枝杆菌的耐药机制,为临床用药提供参考。方法 选取2021年8月~2023年8月在结核病防治机构登记的痰涂片、抗酸杆菌阳性的初、复治肺结核病患者为研究对象,对收集的1200株结核分杆菌进行全基因测序,应用DNA微阵列芯片法、最低抑菌浓度(MIC)药敏试验法、比例法,分析结核分枝杆菌耐药基因突变特征与耐药水平之间的关系。结果 在对1200株结核分杆菌进行检验得出,531(C→T)是利福平rpoB主要突变类型,异烟肼中以katG315(G→C)突变型、inhA-15(C→T)突变型为主,在实施不同基因突变类型比较时,存在统计学意义(P<0.05)。结论 本次研究得出531(C→T)突变型在利福平rpoB中多见,katG315(G→C)突变型在异烟肼出现概率较高,利福平高耐药水平为ropB密码子531、516、526,异烟肼高耐药水平为katG315。

GeneXpert结核分枝杆菌/利福平耐药检测在肺结核诊断中的价值评估

目的:评估在肺结核临床诊断中应用GeneXpert MTB/RIF(结核分枝杆菌/利福平耐药检测)的价值,为肺结核疾病诊断、治疗工作提供参考。方法:评估对象选择2020年3月—2021年3月天津市滨海新区塘沽传染病医院就诊的60例肺结核疑似与确诊患者,对患者痰标本进行收集,实行GeneXpert MTB/RIF、抗酸染色法、固体培养实验检测,比较三种检测方法耐药菌和结核杆菌的阳性率;并比较GeneXpert MTB/RIF、抗酸染色法的特异性和灵敏度。结果:相比固体培养法,GeneXpert MTB/RIF的实行,阳性检出率提升明显,差异有统计学意义(χ^(2)=4.3854,P<0.05);与固体培养法相比,抗酸染色法的实行,阳性检出率降低明显,差异有统计学意义(χ^(2)=4.0615,P<0.05);与抗酸染色法相比,GeneXpert MTB/RIF的实行,特异性和灵敏度均明显提升,差异有统计学意义(χ^(2)=17.7882,6.8056,P<0.05)。结论:在肺结核临床诊断中应用GeneXpert MTB/RIF价值较高,特异性、灵敏度和准确性均较高,操作方便,有助于疾病的早期治疗工作。

应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药基因的研究

在全球范围内,结核分枝杆菌耐药率不断上升,高耐药和耐多药菌株不断出现和传播,对化疗疗效及结核病流行产生很大影响。利福平（RFP）作为1种主要的抗结核药物,对其耐药常常导致化疗失败。快速检测RFP耐药菌株对了解细菌耐药性有较大意义。我们收集了76株临床分离RFP耐药菌株，扩增rpoB基因的核心位点，并进行自主设计DNA芯片检测，并进行DNA直接测序，了解本地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征。

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的研究

目的探讨基因芯片技术在检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的应用。方法收集21例临床诊断结核病患者体液标本经培养得到的分离菌液,进行基因芯片检测,包括利福平的rpoB基因位点和异烟肼的KatG和inhA基因位点,从而判断其耐药性。结果 21例样本中,利福平rpoB基因有10例突变,总突变率为47.6%,其中9例为531位点的(C-T)突变,1例526位点的(C-G)突变。与药敏试验的符合率为81.0%。异烟肼基因突变有6例,总突变率为28.6%,其中4例为KatG 315(G-C)突变,2例为inhA-15(C-T)突变。与药敏试验的符合率为90.5%。利福平的11例耐药株中,基因芯片检测8例为突变型,突变率为72.7%,在利福平的10例敏感株中,基因芯片检测2例为突变型,突变率为20.0%。在异烟肼的6例耐药株中,基因芯片检测5例为突变型,突变率为83.3%,在异烟肼的15例敏感株中,基因芯片检测1例为突变型,突变率为6.7%。结论基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。

DNA芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变

目的建立快速检测结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药rpoB基因突变的DNA芯片。方法从34株临床痰样本中提取结核分枝杆菌的基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段,荧光标记后与芯片上含有特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,同时与DNA测序法比较。结果用DNA芯片检测出19株耐药株和15株敏感株,且结果与DNA测序相同,准确率可达88.2%,敏感性为78.9%,特异性为100.0%。结论DNA芯片快速检测结核分枝杆菌对RFP的耐药rpoB基因突变是一种操作简便、准确性、敏感性和特异性较高,且易于开展的方法。

54例复治利福平耐药结核病患者菌株遗传特征及耐多药基因分析

目的 分析54例复治利福平耐药结核病(RR-TB)患者的结核分枝杆菌(MTB)菌株遗传特征及耐多药基因突变情况。方法 选择同时留存有初治及复治MTB菌株的复治RR-TB患者54例,取其初治及复治时的MTB共54对(108株),采用RD105基因缺失法检测其基因型,15位点可变数目串联重复序列基因分型实验(MIRU-VNTR)判断其复治发病原因;取复治时的MTB 54株,通过MIRU-VNTR结果构建最小生成树(MST),分析群体遗传特征;采用分子线性探针药敏实验分析复治MTB的耐多药基因(利福平耐药rpo B基因及异烟肼耐药kat G、inh A基因)突变情况。结果 108株复治RR-TB患者的MTB均为北京基因型,内源性复燃占比77.8%(42/54)、外源性再感染占比22.2%(12/54)。MST显示,54株复治MTB分为3个克隆复合群(CC1、CC2、CC3)和13个独特基因型;共48种基因型,成簇率为11.1%。分子线性探针药敏试验结果显示,异烟肼耐药kat G、inh A基因突变40株,耐多药率为74.1%(40/54);利福平耐药rpo B基因以S531L位点突变为主(63.0%,34/54),异烟肼耐药kat G基因以S315T1位点突变为主(75.0%,30/40)。结论 北京地区复治RR-TB患者发病原因主要是内源性复燃,主要流行菌株为北京基因型,呈现出较高的遗传多样性,成簇率较低,MTB耐多药基因突变位点多为rpo B基因S531L及kat G基因S315T1。

新疆部分地区结核分枝杆菌rpoB基因突变与对利福平耐药相关性检测

目的:了解新疆部分地区结核分枝杆菌对利福平耐药株rpoB基因的突变情况。方法:通过基因测序对新疆部分地区结核分枝杆菌耐利福平菌株rpoB基因进行检测。结果:从380份痰样本中获得62株结核分枝杆菌初始耐药分离株,利福平耐药株14株,经测序,8株发生在531位的丝氨酸(Ser)转变为亮氨酸(Leu),编码核苷酸序列由TCG到TTG改变;2株是在516位的天冬氨酸(Asp)转变为甘氨酸(Gly),编码核苷酸序列由GAC到GGC改变;1株是在526位的组氨酸(His)转变为天冬氨酸(Asp),编码核苷酸序列由CAC到GAC改变;其余未见变化。结论:本地区结核分枝杆菌对RFP的耐药与rpoB基因的点突变有关,主要为531、526、516位氨基酸的改变,其中531位是最常见的突变位点。

国产试剂检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药基因临床价值的探讨

目的比较进口试剂和国产试剂在检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药基因差异,探讨国产试剂的临床使用价值方法 152株经罗氏培养阳性的菌株,分别用德国Hain life science Gmb H生产的Geno TypeMTBDRplus、亚能生物技术(深圳)有限公司生产的基因探针试剂检测利福平、异烟肼耐药基因,并与传统的药敏结果作比较。结果 152例菌株中有148株纳入比较,其中进口试剂、国产试剂和罗氏培养法对利福平、异烟肼耐药的检出率分别为47.30%(70/148),43.24%(64/148);50%(74/148),41.89(62/148);48.65%(72/148),47.30%(70/148),国产试剂与进口试剂、罗氏培养法相比,对利福平、异烟肼耐药检出率均无统计学差异(P>0.05).以罗氏培养的药敏结果为金标准,国产试剂和进口试剂对利福平、异烟肼耐药的检出敏感性和特异性均无统计学差异(P>0.05)。结论国产试剂检测异烟肼和利福平耐药的敏感性与特异性与进口试剂相接近,且操作简便,价格便宜,适合基层医院对结核分枝杆菌耐药性的快速检测。