不同支气管镜介导标本的结核分枝杆菌基因检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值

目的:分析不同支气管镜介导标本结核分枝杆菌基因(TB-DNA)检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值。方法:选取2022年1—12月聊城市传染病医院痰涂片阴性肺结核患者178例为研究对象,采用奇偶数字法分为对照组和研究组,各89例。对照组采用肺泡灌洗液进行标本提取,研究组采用毛刷刷检进行痰液标本收集,两组均以荧光定量聚合酶链反应检测标本中的TB-DNA,比较两组肺结核诊断、耐药性检测效能以及不良反应。结果:研究组肺结核诊断灵敏度、特异度以及准确率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组耐药性检测灵敏度、特异度以及准确率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在痰涂片阴性肺结核患者的疾病诊断中,以毛刷刷检介导标本的肺结核诊断、耐药性检测效能优于肺泡灌洗液介导标本,两种标本介导方式不良反应均比较少,安全性相当。

不同支气管镜介导标本的结核分枝杆菌基因检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值

目的:不同支气管镜介导标本的TB-DNA检测痰涂片阴性肺结核价值分析。方法:以随机样本抽样法于痰涂片阴性肺结核患者中抽取60例,对其分别采用肺泡灌洗液提取标本、毛刷刷检收集痰液标本,之后采用荧光定量PCR法对其TB-DNA进行检测,对比两种介导标本的检测结果及不良事件发生率。结果:肺泡灌洗液提取标本阳性41例,阳性率68.33%;黏膜毛刷刷检提取标本阳性55例,阳性率91.67%,两种提取标本方法检测阳性率对比,差异有统计学意义(P<0.05)。两种介导标本方法不良事件发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与肺泡灌洗液提取标本相比,毛刷刷检收集标本TB-DNA诊断痰涂片阴性肺结核效能更显著。

荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用研究

探讨在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,观察分析应用价值。方法 本研究的时长段在2022年6月到2023年6月,统共1000例结核患者接受治疗,所有病患都拓展了抗结核药物的测验,且每一位患者的标本均予以荧光定量PCR探针熔解曲线法检测,药物敏感性测定结果为黄金基准,考察判辨荧光定量PCR探针熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的诊断效能。结果 针对1000例的标本中,经过液体药敏试验检测显示对利福平药物耐药例数250例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者;对异烟肼医药有耐药性的液体药敏试验500例,应用溶解曲线检测耐药性包含了470例;经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数170例,予以熔解曲线法显示耐药140例。经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数300例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者。熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的灵敏度分别为84.00%、84.00%、47.06%、66.67%;特异度分别为96.00%、90.00%、84.34%、94.29%;准确度分别为93.00%、97.00%、91.00%、86.00%。结论 在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,可得到较高的应用价值,灵敏度、特异度、准确度较高,可筛查结核病患者对利福平、异烟肼、乙胺丁醇等药物的耐药性,为临床治疗疾病提供可靠的依据。

2型糖尿病合并肺结核患者空腹血糖水平与痰涂片、T-SPOT.TB结果的关系及结核分枝杆菌rpoB基因检测临床意义

目的探究2型糖尿病(type 2 diabetes nephropathys,T2DM)合并肺结核患者空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)水平与痰涂片、结核分枝杆菌T细胞斑点实验(T-cell spot test for tuberculosis infection,T-SPOT.TB)结果的关系及结核分枝杆菌rpoB基因检测的临床意义。方法选取2022年1月—2023年1月昆明市第三人民医院收治102例T2DM合并肺结核患者作为研究组,另选同期在我院治疗的102例单纯肺结核患者作为对照组。比较2组临床资料、痰涂片和T-SPOT.TB检查结果,并对研究组不同FPG水平患者痰涂片阳性率、T-SPOT.TB阳性率进行比较,分析痰涂片阳性率、T-SPOT.TB阳性率与患者FPG水平的相关性。对2组进行结核分枝杆菌培养,分离利福平(rifampicin,RFP)耐药菌株和敏感菌株,比较2组2种菌株rpoB基因检测结果。结果研究组咳嗽、呼吸困难、厌食、盗汗、胸痛、咯血、发热发生率、痰涂片阳性率、T-SPOT.TB阳性率均高于对照组(P均<0.05)。不同FPG水平患者痰涂片阳性率比较,差异具有统计学意义(P=0.003);T-SPOT.TB阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.262);痰涂片阳性率与T2DM合并肺结核患者FPG水平呈正相关(rs=0.386,P=0.015),T-SPOT.TB阳性率与FPG水平无明显相关性(rs=0.127,P=0.326)。研究组RFP耐药菌株多于对照组,研究组RFP耐药菌株rpoB基因突变率高于RFP敏感菌株(P均<0.05)。结论T2DM合并肺结核患者FPG水平与痰涂片结果呈正相关,但与T-SPOT.TB结果无相关性。与单纯肺结核患者相比,T2DM合并肺结核患者更易感染耐药株。通过检测耐药基因rpoB,可快速识别检测结核分枝杆菌对RFP耐药性,为临床治疗提供科学指导。

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能分析

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert)检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能。方法选取河北省胸科医院2021年4月至2022年10月期间行手术治疗的124例肺部空洞疾病患者相关病历资料,其中菌阴空洞肺结核86例(观察组),非结核肺部空洞疾病38例(对照组)。收集患者手术标本Xpert检测和外周血结核感染T细胞斑点(T-SPOT)试验结果,分析二者对菌阴空洞肺结核的诊断效能。结果Xpert检测和T-SPOT试验诊断菌阴空洞肺结核的敏感度为68.6%、75.6%,特异度为97.4%、68.4%。Xpert检测的敏感度低于T-SPOT试验(χ^(2)=5.832,P<0.001),特异度高于T-SPOT试验(χ^(2)=21.469,P<0.001)。2种方法在观察组中的阳性检出率均高于对照组[Xpert检测:68.6%(59/86)比2.6%(1/38);T-SPOT试验:75.6%(65/86)比31.6%(12/38)](均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Xpert检测诊断菌阴空洞肺结核的曲线下面积为0.830,T-SPOT试验的曲线下面积为0.729,Xpert检测的准确度高于T-SPOT试验(P<0.001)。结论Xpert检测对菌阴空洞肺结核有比较可靠的诊断效能。

超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术在结核病诊断中的应用进展

1结核病现状结核病是严重危害人类健康的传染性疾病之一,是仅次于新型冠状病毒感染的第二大传染病杀手,是全球第13大死因[1]。2022年10月27日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布《2022全球结核病报告》[2](以下简称报告)指出,2021年全球新发结核病患者约1060万人,其中儿童约120万人。受新型冠状病毒的影响,全球结核病发病率与2020年相比上升了3.6%,打破了过去20年间每年约2%的下降趋势。2019年至2021年,全球因结核病死亡人数有所增加,2021年全球共有160万人死于结核病,相当于倒退到2017年的水平。2020年至2021年全球耐药结核病负担增加了3%,2021年报告了45万例利福平耐药结核病例,需要治疗的耐药结核患者中仅有36%的人接受了治疗,并且全球耐药结核的成功治疗率只有60%。2021年全球结核病基本医疗服务支出也从2019年的60亿美元下降至54亿美元,而2022年所需的费用为130亿美元[2],资金缺口巨大。

广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因特征分析

目的分析广州地区利奈唑胺(linezolid,LZD)耐药结核分枝杆菌临床分离株耐药基因的突变特征,为控制广州地区耐利奈唑胺结核病提供一定的研究基础和依据。方法选取2012年1月~2022年1月广州市胸科医院住院患者的60株利奈唑胺耐药结核分枝杆菌的临床分离株,分为耐多药组和广泛耐药组。采用微孔板稀释法对60株菌株进行利奈唑胺最低抑菌浓度(MIC)检测,并对60株菌株的利奈唑胺耐药基因23S rRNA、rplC、rplD进行测序,分析其突变特征。结果60株LZD耐药株对LZD的MIC值分布于2~32μg/ml之间。耐多药组的MIC50和MIC90分别为2μg/ml、32μg/ml,广泛耐药组的MIC50和MIC90分别为8μg/ml、32μg/ml。60株菌株中发现有12株23S rRNA基因发生突变,其中有1株发生两个基因位点突变;有11株rplC基因发生突变,其中有1株发生双位点突变;发现2株rplD基因发生突变。23S rRNA、rplC基因突变发生率在不同性别和年龄患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因23S rRNA、rplC突变发生率明显高于rplD,在不同性别和不同年龄患者中的发生率无显著差异。

喀什地区结核分枝杆菌基因型分布及其与肺结核患者临床特征的关联

目的:了解喀什地区结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)基因型分布情况,以及基因分型与肺结核患者临床特征之间的关联。方法:收集2020年喀什地区结核病定点医院临床分离的MTB菌株,将其中有完整病例信息的810例肺结核患者和其对应的810株MTB临床分离株纳入研究。肺结核患者的个案信息从“结核病管理信息系统”中调取,包括患者的姓名、性别、年龄、职业等基本信息和临床症状、影像学表现、治疗史、治疗方案、治疗结局等。采用Illuminate HiSeq二代测序平台对MTB菌株进行基因分型,并鉴定谱系。结果:810株MTB中Lineage2谱系292株(36.0%)、Lineage3谱系321株(39.6%)、Lineage4谱系197株(24.4%)。喀什市、疏附县、疏勒县等县、市的MTB的谱系分布不均;有效测得的572株亚谱系中Lineage2.2.1亚谱系占44.6%(255/572)、Lineage2.2.2亚谱系占6.8%(39/572);Lineage3.1.3亚谱系占14.9%(85/572);Lineage4谱系分化较广,即Lineage4.1~4.9,其中Lineage4.5亚谱系占29.9%(171/572)。菌株谱系与患者临床症状之间差异不明显;相较其他谱系,Lineage3谱系菌株感染者痰涂片阳性比例更低(27.7%,89/321),但明确治愈者的比例更高(37.1%,119/321),差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为6.192和24.558,P值均<0.05)。结论:喀什地区MTB谱系、亚谱系分布呈基因多态性,Lineage3谱系感染患者涂片阳性率较低,临床治愈率较高。

Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测在结核病诊断中的应用价值

目的 探讨运用Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测(MTB/RIF)对疑似肺结核患者的诊断效能。方法 结合病原学、影像学诊断结果,选取郑州人民医院和郑州市中心医院2021年1—12月收治的248例疑似肺结核患者为研究对象,留取痰液或肺泡灌洗液进行培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色和液基集菌涂片染色检测,对Xpert MTB/RIF在肺结核疑似患者中的诊断效能进行评估。结果 248例研究对象中,最终诊断为肺结核122例。MTB液体培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色涂片、液基集菌染色检测诊断肺结核的敏感度分别为54.10%、97.54%、7.38%、16.39%,特异度分别为98.41%、98.41%、95.24%、93.65%。Xpert MTB/RIF检测结果的敏感度优于其他3种检测方法,且漏检率最低。结论 Xpert MTB/RIF能提高MTB的阳性检出率,对结核病的早期诊断及有效防控均有益处,具有实际临床应用价值。

纳米孔靶向测序在分枝杆菌鉴定和耐药基因检测中的研究进展

2023年全球结核病报告显示,结核病的流行病学形势依然严峻。现有的检测方法在分枝杆菌菌种鉴定和耐药基因检测方面存在不足之处,临床亟需开发更加便捷、高效、准确的检测技术,以满足结核病早期诊断和指导治疗的需求。纳米孔靶向测序具有便捷高效、长读长测序等优势,给结核病和耐药结核病的诊疗带来了新的契机。笔者就纳米孔靶向测序这一新技术的原理与特点,以及在分枝杆菌鉴定和耐药基因检测方面的应用进行综述,旨在为临床工作者探索新技术提供参考。

世界卫生组织《结核分枝杆菌耐药相关基因突变目录(第2版)》解读

耐药结核病是2035年实现全球终结结核病流行目标的巨大障碍。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)倡导采用快速分子药物敏感性检测技术进行耐药结核病早期诊断,而覆盖全面可靠的耐药检测靶标是提高分子药物敏感性检测技术可靠性的关键。WHO于2023年11月发布《结核分枝杆菌耐药相关基因突变目录(第2版)》,目的是基于更广泛的全球数据汇总形成更为全面准确的耐药相关基因突变目录,为开发与完善基于测序或其他方法的新型分子药物敏感性检测技术提供支持。本文对第2版目录相较于第1版目录在分析流程与耐药突变等内容的更新进行了详细的解读,并对未来目录完善的方向进行了展望。

安顺地区结核分枝杆菌基因分型及耐药性分析

目的研究贵州省安顺地区结核分枝杆菌(MTB)主要基因分型及耐药性。方法采用RD105基因缺失法和双重PCR法对安顺地区152株MTB临床分离株进行基因分型、药物敏感试验分析耐药性,采用基因测序技术对北京型MTB利福平耐药基因RNA聚合酶β亚基(rpoB)进行测序。结果152株MTB中,122株(80.26%)为北京型、30株(19.74%)为非北京型;108株MTB对抗结核药物敏感,44株对16种抗结核药物耐药,总耐药率为28.95%;44株MTB耐药菌株中31例对利福平耐药,占70.45%,北京型MTB对利福平耐药率显著高于非北京型(χ^(2)=6.896,P=0.009),非利福平耐药结核菌株共13株、占耐药结核菌株的29.55%;北京型MTB利福平耐药rpoB基因测序结果表明,相关位点突变共15株,其中最显著的突变位点是rpoB450、为Ser450Leu,共7株(7/15,46.67%)。结论贵州省安顺地区MTB主要为北京型,主要对利福平耐药,耐药基因rpoB的突变位点为Ser450Leu。

对比分析PCR结核分枝杆菌DNA检测与常规痰涂片对结核菌检出情况

目的:探讨结核菌检验中PCR结核分枝杆菌DNA检测与常规痰涂片的检出情况。方法:本研究将本院2022年1月—2024年1月收治的肺结核患者60例和非肺结核患者60例作为研究对象,所有研究对象均采用常规痰涂片查找抗酸杆菌、PCR结核分枝杆菌DNA检测。比较两组检测效能(准确度、灵敏度、特异度、阳性特异度、阴性特异度)。结果:PCR结核分枝杆菌DNA检测检出肺结核28例,常规痰涂片找抗酸杆菌检测出肺结核27例,其中PCR结核分枝杆菌DNA检测准确度为95.00%,常规痰涂片准确度为82.50%;PCR结核分枝杆菌DNA检测灵敏度为93.33%,常规痰涂片灵敏度为80.00%;PCR结核分枝杆菌DNA检测特异度为96.67%,常规痰涂片特异度为85.00%;PCR结核分枝杆菌DNA检测阳性预测值为96.55%,常规痰涂片阳性预测值为84.21%;PCR结核分枝杆菌DNA检测阴性预测值为93.55%,常规痰涂片阴性预测值为80.95%,两种检查方式诊断效能比较,PCR结核分枝杆菌DNA检测准确度、灵敏度、特异度、阳性特异度、阴性特异度均比常规痰涂片高,差异显著(P<0.05)。结论:PCR结核分枝杆菌DNA检测方法可以更准确地确定患者是否患有肺结核,这已被证明对肺结核的早期诊断和监测治疗效果非常重要。

贵州省某专科医院非结核分枝杆菌的菌种鉴定及耐药检测分析

目的探讨非结核分枝杆菌(NTM)的菌种鉴定分布及耐药性,为临床诊治提供参考依据。方法搜集2017―2020年贵州某专科医院微量肉汤稀释法药敏试验对-硝基苯甲酸(PNB)培养基阳性的疑似NTM菌株,经聚合酶链式反应(PCR)-荧光探针法初步鉴定为NTM后,用基因芯片法进行菌种鉴定,采用微量肉汤稀释法进行15种药物测试。结果贵州地区流行的100例NTM菌株经鉴定分为10种菌型类别。其中,占比最高者为龟/脓肿分枝杆菌48%(48/100),其后依次为鸟分枝杆菌16%(16/100),堪萨斯分枝杆菌12%(12/100),胞内分枝杆菌11%(11/100)。药敏结果显示100株NTM总耐药率61.8%,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高76.4%,其后依次为微黄分枝杆菌73.3%、偶然分枝杆菌55.6%、鸟分枝杆菌53.8%和戈登分枝杆菌53.3%。男女病人比例为63∶37,男性耐药率56.1%;女性耐药率71.5%。结论贵州地区有10种NTM菌种流行,龟/脓肿分枝杆菌是该地区NTM优势菌种。不同菌种间耐药率差异较大,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高。男性病人多于女性,女性耐药率高于男性。应用快速NTM菌种鉴定和药敏试验,可为NTM防控项目的决策者提供参考依据,有助于促进医务人员对抗NTM药物的科学选择。

肺结核合并2型糖尿病患者结核分枝杆菌rpoB基因的检测和意义

目的探究结核分枝杆菌rpoB基因检测在肺结核合并2型糖尿病患者中的诊断价值。方法选取河北省胸科医院2016年1月至2018年5月住院的单纯肺结核患者125例作为单纯组、肺结核合并2型糖尿病且糖化血红蛋白<9%患者81例作为轻度组、肺结核合并2型糖尿病且糖化血红蛋白>9%患者59例作为重度组;所有患者均接受结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)、痰涂片、干扰素试验(T-SPOT.TB)、结核菌培养,以结核菌培养结果为金标准,分析比较不同检测方法的特异性及敏感性。结果三组咳嗽、盗汗、胸痛、厌食、体重减轻、呼吸困难、咯血等症状发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05);以结核菌培养为金标准,结果显示,单纯组阳性率63.2%(79/125)低于轻度组76.5%(62/81)和重度组91.5%(54/59),差异有统计学意义(P<0.05);三种检测方式在三组中的诊断特异度比较差异无统计学意义(P>0.05);在单纯组中,Xpert MTB/RIF以及T-SPOT.TB诊断敏感度、准确度高于痰涂片,差异有统计学意义(P<0.05);在轻度组、重度组中,Xpert MTB/RIF诊断敏感度、准确度高于痰涂片以及T-SPOT.TB,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与单纯肺结核相比,合并2型糖尿病患者结核分枝杆菌阳性检出率更高。对于肺结核合并2型糖尿病患者,Xpert MTB/RIF诊断敏感度、准确度较好,可用于临床检测。

数字PCR技术检测结核分枝杆菌的应用进展

结核病是一种全球范围内的慢性传染病,对人类健康已构成严重威胁,早期诊断、耐药筛查和控制疾病传播是结核病防治的关键方面,然而,现有的诊断技术和药敏试验耗时长,难以实现早期诊断和耐药筛查的目的,大大限制了对疾病传播的控制。数字聚合酶链反应(dPCR)是第3代PCR,是一种灵敏度高、不需要校正曲线的核酸定量检测方法。该文就dPCR的原理及其在结核病诊断、耐药筛查和传播监测中的应用进行综述,并将dPCR与其他结核病检测方法进行比较,展望了dPCR在临床结核病实验室应用中的挑战和未来的前景。

2019—2021年宜春地区患者结核分枝杆菌利福平耐药株基因型分析研究

目的:探究2019—2021年宜春地区结核分枝杆菌利福平耐药株基因型。方法:选择2019年1月—2021年12月于宜春市人民医院接受治疗的肺结核患者100例,采集所有患者痰液样本进行检测。分析结核分枝杆菌分离情况及耐药性,另分析利福平耐药株基因型。结果:100例患者中共分离出结核分枝杆菌47株,分离率为47.00%,2019、2020、2021年结核分枝杆菌分离率分别为33.33%、45.95%、54.76%。2019年分离出结核分枝杆菌7株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为42.86%、28.57%、28.57%;2020年分离出结核分枝杆菌17株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为58.82%、29.41%、11.76%;2021年分离出结核分枝杆菌23株,利福平、异烟肼、链霉素耐药发生率分别为60.87%、21.74%、17.39%。结核分枝杆菌对利福平耐药率最高。经rpoB基因测序可见27株利福平耐药株均发生rpoB基因变异,基因突变率为100%(27/27),突变基因位点主要位于509~533位。结论:2019—2021年宜春地区结核分枝杆菌感染率呈逐年上升趋势,结核分枝杆菌感染患者对利福平存在较高的耐药性,且rpoB基因位点突变的发生与利福平耐药间存在密切联系。

以肺泡灌洗液行结核/非结核分枝杆菌检测对菌阴肺结核的诊断价值

目的评估取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行结核/非结核分枝杆菌(MTB/NTM)检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法收集临床诊断为菌阴肺结核的324例患者资料,对上述患者进行支气管镜检查,所有患者取BALF标本,根据检测方法分为MTB/NTM组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTB检测)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测)、结核分枝杆菌环介导等温扩增技术(TBLAMP)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测)。结果MTB/NTM组罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTM检测阳性率分别为14.04%、1.75%、43.86%;GeneXpert MTB/RIF组罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为16.77%、3.73%、54.66%;TB-LAMP组罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测阳性率分别为18.87%、4.72%、49.06%。MTB/NTM、GeneXpert MTB/RIF、TB-LAMP检测分别与罗氏培养、涂片抗酸染色阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MTB/NTM检测与GeneXpert MTB/RIF检测、TB-LAMP检测比较,差异无统计学意义(χ^(2)=2.185,P=0.335)。结论MTB/NTM检测具有较好诊断效能,相对简单、快捷,相较于TB-LAMP检测、GeneXpert检测更经济,并能鉴别NTM,及时减少NTM病患者误诊后使用结核药引起身体损害及经济损失。

牛源结核分枝杆菌pknB基因生物信息学分析

为了解牛源结核分枝杆菌关键蛋白的生物学功能,应用生物信息学方法对丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶pknB蛋白的结构及生物学特性进行了预测。结果显示:牛源结核分枝杆菌pknB蛋白是一类Ⅱ型跨膜蛋白,其跨膜区位于蛋白中部,亲水性强但缺乏能够分泌表达的信号肽;高级结构中无规则卷曲和α螺旋占比较高,分别为44.73%和32.27%,延伸链和β转角含量较少;pknB蛋白定位在细胞内质网的可能性最高,其次为细胞质,而定位在细胞核、高尔基体和线粒体的可能性最低;存在多个优势抗原表位,其中B细胞抗原表位有12个,分值大于25分的T细胞表位有8个;存在65个潜在的磷酸化修饰位点,它们可能与MRA_3902、MRA_3400、cfp17等多种蛋白发生相互作用。结果说明:pknB蛋白作为一种跨膜蛋白具有良好的免疫原性,并参与宿主的NF-κB信号通路进而影响细菌增殖,可以作为抗结核病疫苗研发及快速诊断试剂盒研制的候选靶标蛋白。

结核分枝杆菌游离DNA检测在肺外结核诊断中的价值

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值。方法选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例。所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)。通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值。结果MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中MTB的检出率均显著高于涂片抗酸染色(χ^(2)=5.714、9.289、9.226,P=0.017、0.002、0.002)。虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.143,P=0.705;χ^(2)=0.648,P=0.421);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(χ^(2)=4.222,P=0.040)。在肺外结核组,MTB cfDNA检测法的MTB检出率为26.50%(31/117),显著高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.362,P=0.037;χ^(2)=24.492,P<0.05);而TB-IGRA的MTB检出率为72.65%(85/117),显著高于MTB cfDNA检测(χ^(2)=49.850,P<0.001)。MTB cfDNA检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为26.50%、100.00%、100.00%、63.40%,其灵敏度显著高于GeneXpert MTB/RIF(15.38%)和涂片抗酸染色(3.42%),但低于TB-IGRA(72.65%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较高的灵敏度及特异度,故MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较好的应用前景。