结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA抗结核免疫效应的初步研究

目的:探讨小鼠皮内注射结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA后,小鼠腹腔巨噬细胞是否被激活以及激活后氮氧化物的产生、抗结核细胞因子的表达,比较研究结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA和卡介苗菌激活小鼠腹腔巨噬细胞的抗结核免疫应答过程及免疫效应。方法:用结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA、卡介苗菌和生理盐水分别皮内注射小鼠第30d、60d后,分别采用Griess法、化学法、ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO、H2O2以及IL-12、TNF-α的表达。结果:结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA皮内接种小鼠后能显著诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌表达IL-12和TNF-α,与卡介苗菌组相比较无明显差异;与生理盐水组比较差异显著(P<0.05)。结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA皮内接种小鼠后也能诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO、H2O2,与卡介苗菌组相比较无明显差异,与未免疫组比较差异显著(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA小鼠皮内接种后,能诱导小鼠腹腔巨噬细胞活化并产生较强的抗结核免疫效应,且该效应与卡介苗菌无明显差异。

茶叶不同提取物及不同茶叶对结核分枝杆菌抑制作用的研究

为探明茶叶对结核分枝杆菌H_(37)Ra菌株的抑制作用,采用牛津杯法对H_(37)Ra菌株进行抑菌试验,研究不同茶叶提取物(茶多酚、茶多糖和茶皂素)及不同种类茶叶(华农绿针、大宗炒青、广东大叶青、福鼎寿眉、铁观音、凤凰单丛、祁门红茶、下关沱茶、青砖茶)对H_(37)Ra菌株活性的抑制能力。结果显示,茶多酚对H_(37)Ra菌株表现出显著的抑菌能力,随着茶多酚浓度的增加,抑菌效果逐渐增强;在40 mg·m L^(-1)下,茶多酚显示出长期抑制H_(37)Ra菌株生长的能力;茶多糖和茶皂素对结核分枝杆菌没有抑制作用;不同种类茶叶表现出不同程度的抑菌能力,其中凤凰单丛的乙酸乙酯部较其他分离部有更强的抑菌能力,其60%乙醇洗脱的柱层析分离物抑菌能力最强,推测茶多酚是抑制H_(37)Ra菌株生长的主要成分。研究结果证实了茶叶对H_(37)Ra菌株具有抑制作用,且茶叶不同提取物和不同种类茶叶在抑菌能力上存在差异,为开发结核病相关的抗菌药物提供了一个新思路。

10株牛源非结核分枝杆菌16S rRNA基因序列分析

本研究应用结核分枝杆菌的16S rDNA序列分析方法,鉴定非结核分枝杆菌菌株。应用PCR方法从10株牛源非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5'端片段并测序。用DNA分析软件将所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列相比较,计算种间相似性,构建系统发育树,对菌株进行分类与鉴定。结果显示,10株牛源非结核分枝杆菌中浅黄分枝杆菌1株;偶发分枝杆菌1株;母牛分枝杆菌2株;新金色分枝杆菌4株;另有2株N8和N9分别与新金色分枝杆菌和偶发分枝杆菌有较好的亲缘关系。检测结果提示,非结核分枝杆菌在牛群中存在应引起重视,而且它们对人畜的致病性需要进一步研究,以便采取有效的防制措施确保人类及畜群的健康。

34株慢速生长非结核分枝杆菌针对一线和二线抗结核药物的敏感性试验研究（英文）

慢速生长分枝杆菌主要分布于土壤、污水等环境中,这类细菌可对人类致病,尤其是肺部疾病。本研究中,通过分析一线和二线抗结核药物的药敏试验,为了找到治疗慢速生长分枝杆菌病的最佳药物。结果表明,异烟肼(4/34)是敏感性最低的药物,只对Mycobacterium szulgai,Mycobacterium celatum,Mycobacterium duvalii和Mycobacterium elephantis敏感。利福平(13/34)和乙胺丁醇(14/34)有相似的敏感性。链霉素(27/34)是一线抗结核药物中效果最好的,对绝大多数的试验菌株都有较好的活性。氧氟沙星(23/34),卡那霉素(26/34)和妥布霉素(26/34)具有强有力的抗菌活性。环丙沙星(31/34),左氧氟沙星(31/34),阿米卡星(33/34)和卷曲霉素(33/34)具有极好的抗慢速生长分枝杆菌活性。莫西沙星(34/34)的抗菌活性最强。在本试验的测试慢速生长分枝杆菌中,Mycobacterium simiae和Mycobacterium africanum对更多的药物耐药。Mycobacterium szulgai和Mycobacterium duvalii对一线和二线抗结核药物都有较好的活性。总之,二线抗结核药物是治疗慢速生长分枝杆菌的良好药物,可被广泛用于慢速生长分枝杆菌病的治疗。

232株结核分枝杆菌起始耐药分析

目的分析本院结核分枝杆菌对各种药物起始耐药情况。方法采用WHO推荐的药敏比例法对577株结核分枝杆菌菌株进行鉴定及药物敏感试验,分析各类型结核菌的起始耐药情况。结果 577株结核分枝杆菌起始耐药232株(40.2%),复治耐药345株(59.8%)。起始耐药232株:单耐药57株(24.6%)、多耐药40株(17.3%)、耐多药114株(49.1%)、广泛耐多药18株(7.8%)、全耐药3株(1.3%)。结论结核分枝杆菌患者的起始耐药率日益趋高,须重视近年来结核分枝杆菌感染的特殊性和难治性,加强防治工作,减少获得性耐药菌株感染的机率。

北京基因型结核分枝杆菌中心菌株的筛选

背景结核分枝杆菌北京基因型(Beijing Genotype)是结核分枝杆菌中一个遗传关系接近的分支(clade)。在中国北京基因型的流行程度为64．9%。在全球广为流行且与耐药存在一定的联系。一些文献报道。

云南省结核分枝杆菌地方菌株耐药监测

目的 了解云南省结核分枝杆菌地方菌株耐药情况。方法 采用比例法对所分离的142株菌株进行异烟肼（INH）、利福平（RFP）、链霉素（SM）及乙胺丁醇（EMB）4种的耐药检测。结果 结核分枝杆菌对四种药物的耐药率在10．57％～19．02％之间，初始耐药率为4．06％～13．52％，INH的初始耐药率最高；获得性耐药为21．87％～34．38％，INH、RFP的获得性耐药率最高。结论 云南省结核分枝杆菌地方菌株对4种抗结核药物的耐药率由高到低分别为INH、SM、RFP和EMB，其中INH、SM和RFP3种药物的耐药率与全国基本一致（P〉0．05），而EMB的耐药性远高于全国水平。

14株非结核分枝杆菌16S rRNA基因序列分析

为了对非结核分枝杆菌菌株进行分类与鉴定,试验采用PCR方法从14株非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5'端片段,并对所得DNA基因片段进行测序;同时用DNAMan软件对所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列进行比较,计算种间相似性,构建系统发育树。结果表明:14株非结核分枝杆菌中有浅黄分枝杆菌2株、偶发分枝杆菌3株、母牛分枝杆菌2株、新金色分枝杆菌4株,另有3株分别与Mycobacterium sp.Myc399、新金色分枝杆菌与偶发分枝杆菌有较好的亲缘关系。

天津地区临床分离株结核分枝杆菌分子流行病学研究

目的探讨天津地区结核分枝杆菌临床分离株分子流行病学特征。方法连续收集天津市海河医院2005年8月16日～11月25日就诊病人痰培养阳性的结核分枝杆菌100株，采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）和数目可变串联重复序列（VNTR）两种方法进行基因分型，并运用软件对二者的结果进行分析。依据北京分化支的定义。运用多重和实时定量PCR方法将其区分为W菌/典型北京家族菌株和非典型北京菌株，x^2检验分析两种亚群与患者年龄和耐药性之间的联系。结果排除污染菌株，共对96株结核分枝杆菌临床分离株进行两种方法的基因分型，Spoligotyping结果为91．7％为北京基因型（含3株类北京基因型）结核分枝杆菌（88／96）。VNTR分型可将北京基因型分为60种基因型。在北京分化支结核分枝杆菌中，W菌/典型北京家族菌株占93．2％（82／88）。两种北京分化支亚群与患者年龄和耐药性没有显著性统计学差异（P〉0.05）。结论天津地区结核病患者临床分离的结核分枝杆菌中，北京基因型呈现较为明显的优势。VNTR的分辨率明显高于Spoligotyping。北京分化支的两种亚群在天津地区临床结核病患者中均存在流行，但以W菌/典型北京家族菌株为主。

卡介苗菌株和结核分枝杆菌H37Ra菌株原生质体的制备研究

分别以卡介苗菌株(BCG)及结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(H37Ra)为受体菌,制备上述两种菌株的原生质体,同时通过优化细菌菌龄、酶解浓度、酶解温度以及酶解时间等影响因素,探索出制备原生质体形成及再生的最优条件。结果显示:摸索出制备BCG和H37Ra菌株的原生质体条件:在对数生长期的两亲本菌株,经0.01 mol/L EDTA,0.01%β-巯基乙醇溶液预处理;酶解浓度为12 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间为5 h,可制备出活性较高的两种菌株的原生质体。由此可知,成功制备了BCG与H37Ra菌株的原生质体,并能在高渗固体培养基上再生。本实验为进一步研究该两种菌株原生质体融合试验奠定了基础。

耐氧氟沙星的结核分枝杆菌临床分离株的gyrA基因点突变特点

目的研究结核分枝杆菌临床分离株的gyrA基因点突变位点和突变频率,了解目前结核分枝杆菌临床分离株耐喹诺酮类药物的基本特点。方法以我室保藏H37Rv（ATCC272294）,H37Ra （ATCC251 77）菌株以及由我所参比实验室提供的具有在改良罗氏培养基上获取的。

结核分枝杆菌耐多药菌株对吡嗪酰胺的耐药性分析

目的探讨分析结核分枝杆菌耐多药菌株对吡嗪酰胺的耐药性。方法选取医院2017年11月至2018年11月收治的结核病患者210例,分离出268株菌株,使用DNA微阵列芯片法鉴定菌群,检测菌株对乙胺丁醇、利福平、链霉素和异烟肼等药的耐药性,对耐多药结核分枝杆菌实施吡嗪酰胺耐药性测定,分析耐药性差异。结果分离的141株菌株均为全敏感菌株,有16株为耐多药菌株,前者对吡嗪酰胺的耐药率为0.71%,明显低于后者的37.50%(P<0.05)。结论结核分枝杆菌中耐多药菌株对吡嗪酰胺的耐药性较高,临床应用和治疗时需要进行吡嗪酰胺药物敏感性试验,确保临床用药合理性。

IS6110-限制性片段长度多态性和间隔区寡核苷酸分型技术在结核分枝杆菌菌株鉴定中的应用

目的评价IS6110-限制性片段长度多态性（IS6110-RFLP）和间隔区寡核苷酸分型技术（spoligotyping）两种方法在结核病流行病学中的应用，探讨我国各地区的结核分枝杆菌菌株特点。方法收集158株结核分枝杆菌临床分离株，分别应用IS6110-RFLP和Spoligotyping两种方法进行鉴定。结果①IS6110-RFLP的分辨力大于spoligotyping分型。②将本次实验结果与国际spoligotype数据库进行比较。结果有14个类型属于共有类型，其中类型1为流行的类型，分布广泛，即所说的北京基因型。③广东地区与其他地区成簇率和北京基因型所占比例差异有统计学意义（P〈0．05）。广东地区成簇率和北京基因型所占比例均显著低于其他地区。结论同时应用IS6110-RFLP分型和Spoligotyping两种方法进行结核病流行病学调查研究非常有效，在中国不同地区的菌株具有不同的特点。

山东省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的分析山东省利福平耐药结核菌株rpoB基因突变特点。方法本研究为回顾性调查,135株样本分别取自1997、2000及2003年的流行病学调查和医院的临床样本。采用PCR直接基因测序法分析rpoB基因突变。结果135株结核菌中,60株为利福平耐药菌株,其中55株(91.7%)rpoB基因的利福平耐药决定区(RRDR)有突变。突变频率依次为密码子531(60.0%),526(29.1%)和516(7.3%)。1株耐药菌同时发生了少见的3个密码子(511,515,518)的多核苷酸突变。75株敏感菌株中,仅3株(4.0%)有突变,均发生在密码子533,包括一个新发现的突变基因型CTG(Leu)→ATG(Met)。结论来自山东省结核菌中,利福平耐药表型与rpoB基因突变的符合率为94.1%,并提示密码子533突变与利福平耐药表型相关性较低。

应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药基因的研究

在全球范围内,结核分枝杆菌耐药率不断上升,高耐药和耐多药菌株不断出现和传播,对化疗疗效及结核病流行产生很大影响。利福平（RFP）作为1种主要的抗结核药物,对其耐药常常导致化疗失败。快速检测RFP耐药菌株对了解细菌耐药性有较大意义。我们收集了76株临床分离RFP耐药菌株，扩增rpoB基因的核心位点，并进行自主设计DNA芯片检测，并进行DNA直接测序，了解本地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征。