以肺泡灌洗液行结核/非结核分枝杆菌检测对菌阴肺结核的诊断价值

目的评估取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行结核/非结核分枝杆菌(MTB/NTM)检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法收集临床诊断为菌阴肺结核的324例患者资料,对上述患者进行支气管镜检查,所有患者取BALF标本,根据检测方法分为MTB/NTM组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTB检测)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测)、结核分枝杆菌环介导等温扩增技术(TBLAMP)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测)。结果MTB/NTM组罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTM检测阳性率分别为14.04%、1.75%、43.86%;GeneXpert MTB/RIF组罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为16.77%、3.73%、54.66%;TB-LAMP组罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测阳性率分别为18.87%、4.72%、49.06%。MTB/NTM、GeneXpert MTB/RIF、TB-LAMP检测分别与罗氏培养、涂片抗酸染色阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MTB/NTM检测与GeneXpert MTB/RIF检测、TB-LAMP检测比较,差异无统计学意义(χ^(2)=2.185,P=0.335)。结论MTB/NTM检测具有较好诊断效能,相对简单、快捷,相较于TB-LAMP检测、GeneXpert检测更经济,并能鉴别NTM,及时减少NTM病患者误诊后使用结核药引起身体损害及经济损失。

流式细胞术检测结核分枝杆菌死活菌混合样本中活菌比例的研究

目的探讨利用基于荧光素二乙酸酯(FDA)的流式细胞术检测结核分枝杆菌(MTB)混合菌液中活菌比例的性能,为应用流式细胞术定量检测与分析MTB异质性耐药方法的创建提供实验依据。方法将10株1麦氏浊度MTB纯培养活菌悬液和其相应的1麦氏浊度85℃加热30 min处死的MTB菌液按一定比例混合得到MTB死活菌混合菌液(其中活菌比例分别为100%、75%、50%、25%和0%),应用FDA分别对其进行染色后,流式细胞仪检测其平均荧光强度(MFI),求其与对应100%活菌样本MFI值的比值来模拟MTB异质性耐药检验中的FDA敏感指数,双变量直线回归分析得到敏感指数与实际活菌比例之间的直线回归方程,并利用该方程计算另外10组死活菌混合菌液样本中MTB活菌比例。结果(1)死菌与活菌MTB样本经FDA染色后MFI值比较差异有统计学意义(P<0.05),该方法用于区分死菌与活菌的界值为1834,用该界值鉴定其余20个死、活未知的MTB样本,其检测的灵敏度为100%、特异度为100%。FDA染色能够明确鉴别MTB的死、活。(2)10组已知活菌比例的MTB死活菌混合菌液样本经FDA染色后各比例之间MFI值比较差异有统计学意义(P<0.05),敏感指数(Y)与混合样本中活菌比例(X)之间的直线回归方程:Ŷ=0.986X+0.016,该直线回归方程差异有统计学意义(P=0.000)。(3)应用这种染色方法对其余50个MTB死活菌混合菌液样本进行检测,计算活菌比例与实际活菌比例之间差异无统计学意义(P>0.05),基于FDA染色方法的流式细胞术可用于MTB死活菌混合菌液样本中活菌比例的检测。结论通过基于FDA染色的流式细胞术具有准确检测MTB混合菌液样本中活菌比例的潜力,该方法在MTB异质性耐药检测中将具有广阔的应用前景。

结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌混合感染的病例分析

目的研究结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌混合感染的病例特点。方法对南京市胸科医院实验室培养阳性的10389例菌株,经菌性鉴定为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌混合感染的223份样本,共70例患者的培养结果进行分析。结果结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌可以互为先后顺序感染,也可以同时感染,以先感染结核分枝杆菌,后感染非结核分枝杆菌为多。结论对于特殊人群和治疗效果欠佳的的患者,应定期、多次的进行相关的培养、菌型鉴定和药物敏感试验,尽早发现存在混合感染及时调整治疗。

不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测诊断菌阴肺结核的应用价值

目的探讨不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测诊断菌阴肺结核临床价值差异。方法选取2019年2月至2021年2月在该院诊治菌阴肺结核患者146例进行研究,所有患者均行检查,取支气管冲洗液分别进行涂片、结核菌培养、荧光定量PCR法和噬菌体生物扩增法检测,以支气管镜下组织病理检查为诊断“金标准”,判定支气管冲洗液涂片、结核菌培养、荧光定量PCR法和噬菌体生物扩增法在菌阴肺结核中诊断灵敏度、特异度、符合率,分析不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测在菌阴肺结核中诊断价值差异。结果146例菌阴肺结核患者经病理诊断确诊为肺结核117例(80.14%)。冲洗液涂片对菌阴肺结核诊断灵敏度为58.12%,特异度为75.86%,符合率为61.64%。结核菌培养对菌阴肺结核诊断灵敏度为61.54%,特异度为89.66%,符合率为67.12%。荧光定量PCR法对菌阴肺结核诊断灵敏度为39.31%,特异度为65.52%,符合率为44.52%。噬菌体生物扩增法对菌阴肺结核诊断灵敏度为27.35%,特异度为51.72%,符合率为32.19%。冲洗液涂片、结核菌培养在菌阴肺结核中诊断灵敏度高于荧光定量PCR法和噬菌体生物扩增法诊断灵敏度,差异有统计学意义(P<0.05);结核菌培养在菌阴肺结核中诊断特异度高于涂片、荧光定量PCR法和噬菌体生物扩增法,冲洗液涂片在菌阴肺结核中诊断特异度高于荧光定量PCR法和噬菌体生物扩增法,差异有统计学意义(P<0.05);冲洗液涂片、结核菌培养在菌阴肺结核中诊断符合率高于荧光定量PCR法和噬菌体生物扩增法诊断灵敏度,差异有统计学意义(P<0.05)。结论支气管冲洗液涂片、结核菌培养在菌阴肺结核中诊断灵敏度、特异度及符合率均高于荧光定量PCR法和噬菌体生物扩增法诊断,具有更高临床诊断价值。

3种方法对痰液标本结核分枝杆菌检测结果的影响

目的比较3种方法检测痰液标本结核分枝杆菌的检测效果。方法 50份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别用涂片抗酸染色法、结核分枝杆菌培养法和荧光定量PCR(RT-PCR)检测,分析3种方法的检出率及检测时间。结果 3种方法中,RT-PCR检出率最高,染色法检出率最低;染色法检出时间最短,菌培养法检出时间最长,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论不同方法对痰液结核分枝杆菌的检测效果存在差异,应据临床实际情况加以选择,发挥不同检测手段的优势。

不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值

目的分析对结核分枝杆菌给予不同支气管冲洗液检测在菌阴肺结核诊断中的价值。方法回顾性分析2016年10月—2017年10月该辖区收治的60例菌阴肺结核患者的临床资料,所有患者均行支气镜检查。分别进行结核菌培养、支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法、荧光定量PCR法检测,记录检测结果,分析不同检测方法对菌阴肺结核的临床诊断价值。结果结核菌培养检测阳性率为56.67%,支气管冲洗液涂片检测阳性率为30.00%,噬菌体生物扩增法检测阳性率为15.00%,荧光定量PCR法检测阳性率为33.33%,结核菌培养检测的阳性率明显优于其他方法;噬菌体生物扩增法检测的阳性率明显低于其他方法 (χ~2=14.483 1,6.451 6,11.005 2,9.167 2,P<0.05)。结论结核菌培养是临床诊断菌阴肺结核的金标准,支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法对菌阴肺结核的阳性率相对较高,噬菌体生物扩增法的阳性率相对较低。

不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测法在菌阴肺结核诊断中的应用价值

目的:分析不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测法在菌阴肺结核诊断中的应用价值。方法:选取2019年12月至2020年12月武汉市新洲区中医医院收治的60例疑似患有菌阴肺结核的患者作为研究对象。在这些患者入院后,对其均进行支气镜检查,并采集其支气管冲洗液进行实验室检查。分别采用涂片法、噬菌体生物扩增法和荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法对患者的支气管冲洗液进行检测,比较其检测结果,并以结核分枝杆菌培养法为“金标准”,比较用涂片法、噬菌体生物扩增法和荧光定量PCR法诊断菌阴肺结核的效能。结果:对60例患者进行结核分枝杆菌培养的结果显示,其中有24例患者的培养结果呈阳性(表示其患有菌阴肺结核),其余36例患者的培养结果均呈阴性(表示其患有其他疾病)。用涂片法、噬菌体生物扩增法诊断60例患者菌阴肺结核的敏感度、特异度、准确率与结核分枝杆菌培养法的一致性较好,效果较佳,显著优于荧光定量PCR法。结论:采用涂片法、噬菌体生物扩增法对菌阴肺结核患者的支气管冲洗液进行检测的效果较佳,临床诊断价值较高,而用荧光定量PCR法对此病患者的支气管冲洗液进行检测则存在一定的误差性。

基因芯片技术对非结核分枝杆菌肺病的诊断价值

目的探讨基因芯片法对非结核分枝杆菌(NTM)肺病的诊断价值。方法选择河南省胸科医院2020年9月至2021年3月收治的高度疑似肺结核患者200例进行回顾性分析。200例患者均行荧光支气管镜,同时采取管镜下灌洗液标本,对灌洗液标本进行基因芯片检测。以MGIT 960液体培养[对硝基苯甲酸(PNB)]为参照,分析基因芯片方法对NTM检测的敏感度、特异度和检测结果。结果200例患者中,基因芯片法鉴定出NTM阳性22例(11.0%),结核分枝杆菌复合群(MTC)阳性154例(77.0%),MTC阴性24例(12.0%)。其中22例NTM中,11例胞内分枝杆菌病(50.0%),9例脓肿分枝杆菌病(40.9%),1例堪萨斯分枝杆菌(4.5%),1例鸟分枝杆菌(4.5%);MGIT960液体培养(PNB)培养出NTM 23例(11.5%),MTC 152例(76.0%),阴性25例(12.5%)。以MGIT 960液体培养试验结果为参考标准,基因芯片法检测出NTM的敏感度为86.9%(20/23),特异度为98.9%(175/177),两者有较高一致性。而基因芯片可以分出菌型,所用时间更短。结论基因芯片技术在NTM的诊断中价值较大,有高度敏感度及特异度,用时短,有助于较早确诊,值得在临床上推广。

几种支气管冲洗液结核杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值

目的探讨几种支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值。方法回顾性分析行支气镜检查的68例菌阴肺结核患者的支气管冲洗液涂片、培养、荧光定量PCR和噬菌体生物扩增法检测的结果 ,了解对肺结核的诊断阳性率。结果 68例患者中冲洗液涂片、培养、荧光定量PCR和噬菌体生物扩增法检查的阳性率分别为29.4%、54.4%、33.8%和14.7%。结论支气管冲洗液涂片和荧光定量PCR检测对菌阴肺结核的快速诊断具有重要的临床应用价值,噬菌体生物扩增法检测对于菌阴肺结核的诊断价值有待进一步研究和探索,培养是目前诊断肺结核的金标准,在这几种检测方法中阳性率最高。

支气管肺泡灌洗液ADA和肿瘤标志物检测对老年菌阴肺结核的鉴别诊断

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的结核病是严重危害人民群众健康的传染病。检出结核分枝杆菌是诊断活动性肺结核的金标准，但由于肺结核患者痰液抗酸杆菌涂片阳率低，又有大量患者痰液质量不能达到质控要求，存在大量的抗酸杆菌涂片阴性和培养阴性肺结核，我国痰菌阴性肺结核占肺结核总数的70％左右。

支气管镜在菌阴肺结核诊断中应用价值

目的探讨电子支气管镜检查在菌阴肺结核诊断中应用价值。方法选取2018年6月至2020年12月大同市第四人民医院862例菌阴肺结核患者作为研究对象,所有对象均进行结核分枝杆菌相关检测,对比菌阴肺结核患者两种标本结核分枝杆菌相关检查的阳性率。结果镜检前后痰液及冲洗液标本抗酸染色阳性率三者之间比较(P<0.05);冲洗液BD-960快速培养、罗氏培养及药敏、PCR-TB-DNA、X-pert及Hain检测阳性率分别与镜检前传统痰涂片抗酸杆菌阳性率比较(P<0.05);支气管冲洗液抗酸染色联合BD-960快速培养、PCR-TB-DNA、X-pert、Hain及罗氏培养阳性率分别与镜检前后传统痰涂片抗酸杆菌阳性率比较(P<0.05)。支气管冲洗液抗酸染色联合BD-960快速培养、罗氏培养阳性率低于支气管冲洗液PCR-TB-DNA、X-pert、Hain阳性率(P<0.05)。结论采用电子支气管镜肺泡冲洗检查,联合抗酸染色,联合BD-960快速培养、PCR-TB-DNA、X-pert、Hain及罗氏培养检测能够明显提升菌阴肺结核患者的阳性检出率。

CT引导下经皮肺穿刺活检在菌阴肺结核诊断中的意义

3次结核菌痰涂片及1次培养阴性的肺结核为菌阴肺结核。菌阴肺结核诊断标准中指出，支气管肺泡灌洗液检出抗酸分枝杆菌或支气管、肺部组织病理证实结核病变，具备任何一项可确诊。随着影像技术的发展，CT引导下经皮肺穿刺活检作为一种微创的、快速的诊断方法，提高了肺部疾病的确诊率。我院对疑诊菌阴肺结核的住院患者进行CT引导下经皮肺穿刺活检，取得了较高的确诊率，减少了误诊。现报告如下。

C型臂引导下肺泡灌洗对菌阴肺结核的诊断价值

目的探讨C型臂引导下肺泡灌洗对菌阴肺结核的诊断价值。方法将经胸片或胸部CT怀疑肺结核且PPD(5TU)强阳性的患者98名分为两组,研究组48例;对照组50例。研究组应用C型臂引导下纤维支气管镜检查,对照组应用常规纤维支气管镜检查,对肺泡灌洗液行结核菌涂片及荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌DNA,两者之一为阳性即可确诊。结果研究组肺结核患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌涂片阳性率52.1%,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌DNA阳性率81.2%,最终菌阴肺结核确诊率为83.3%;均高于对照组肺结核患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌涂片阳性率34%(P<0.05),FQ-PCR技术检测结核分枝杆菌DNA阳性率64%(P<0.05),菌阴肺结核确诊率为72%(P<0.05)。结论 C型臂引导下肺泡灌洗可提高肺结核确诊率,对诊断菌阴肺结核有重要的价值。

支气管冲洗液涂片与培养在肺结核诊断中的价值分析

目的探讨应用支气管冲洗液进行结核病病原学检查的临床应用价值。方法2019年1月至12月应用广州市胸科医院医学检验科LIS系统资料,对比分析在3周内并行痰、支气管冲洗液金胺O荧光染色涂片与分枝杆菌培养结果情况。结果115例患者支气管冲洗液直接涂片与痰直接涂片、307例患者支气管冲洗液夹层杯法涂片与其痰直接涂片比较,应用支气管冲洗液样本的阳性检出率显著低于痰样本(P<0.001,P=0.049);应用MGIT 960系统对882例患者支气管冲洗液和痰进行分枝杆菌培养,支气管冲洗液、痰的培养阳性率分别为37.53%和33.90%,而且89例(10.09%)痰培养阴性患者支气管冲洗液培养阳性,差异具有统计学意义(χ^2=353.555,P<0.001)。结论应用支气管冲洗液进行分枝杆菌培养是结核病病原学诊断的重要手段,而其涂片染色检查则价值不大。

评价显微镜观察药物敏感性技术(MODS)快速检测肺泡灌洗液中结核分枝杆菌对菌阴肺结核的临床诊断价值

目的:探讨肺泡灌洗液中结核分枝杆菌对菌阴肺结核临床诊断过程中显微镜观察药物敏感性技术(MODS)的应用价值。方法:整理2017年3月~2019年3月本院100份肺泡灌洗液标本,对其分别实施MODS、罗氏培养法检测,回顾分析检测结果。结果:与罗氏培养法相比,MODS对结核分枝杆菌的阳性检出时间明显缩短(P<0.05);MODS对结核分枝杆菌的阳性检出率高于罗氏培养法对应的阳性检出率(P<0.05)。结论:肺泡灌洗液中结核分枝杆菌对菌阴肺结核临床诊断期间通过应用MODS技术,可缩短诊断时间,提高阳性检出,保证菌阴性肺结核的诊断准确率。

不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值

研究不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值。方法:以院内收治的60例菌阴肺结核患者为例,所有患者分别采用结核菌培养、PCR检测、支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法进行检测,比较不同检测方法的检测结果。结果:结核菌培养检测方法的阳性检测率最高,噬菌体生物扩增法的阳性检测率最低。结论:菌阴肺结核患者通过结核菌培养,可以得到较高的诊断准确率,诊断价值高,值得推广。

四种分枝杆菌快速检测方法的研究

目的建立敏感、特异的快速检测4种分枝杆菌的方法。方法用特异性引物对结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌菌悬液DNA进行PCR扩增,验证其敏感性和特异性。将上述4种分枝杆菌的特异性引物同时放入PCR扩增反应体系中,以此反应体系分别对该4种分枝杆菌菌悬液DNA、及其两两组合或特定的三重组合进行扩增,同时验证其敏感性。结果4种分枝杆菌的特异性引物分别放入各自的PCR扩增反应体系中,可分别特异性地扩增出该4种分枝杆菌对应的DNA片段,敏感性达1×101～1×102个菌细胞/mL。4种分枝杆菌的特异性引物同时放入同一PCR扩增反应体系中可分别特异性地扩增出对应的4种分枝杆菌单菌及其两两组合或三种分枝杆菌组合的DNA片段,敏感性达1×102～1×103个菌细胞/mL;4种分枝杆菌的特异性引物对其他分枝杆菌进行扩增,结果均为阴性。结论多重PCR方法能敏感、特异地快速检测4种分枝杆菌。

肺泡灌洗液XpertMTB/RIF、TB-RNA和TB-DNA联合检测对菌阴肺结核诊断效能

目的探讨肺泡灌洗液结核分枝杆菌利福平耐药基因(XpertMTB/RIF)、结核分枝杆菌核糖核酸(TB-RNA)和结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TB-DNA)联合检测对菌阴肺结核(bacterial negative tuberculosis,BGT)的诊断价值。方法选取2020年5月—2022年7月收治的疑似菌阴肺结核患者806例,经临床、X线及痰液标本结核分枝杆菌检查确诊为菌阴肺结核506例,设为BGT组,另300例非结核肺部疾病(non-tuberculous pulmonary disease,NTPD)患者设为NTPD组,均行肺泡灌洗液XpertMTB/RIF、TB-RNA和TB-DNA检测,以临床、X线及痰液标本结核分枝杆菌检查为金标准,统计肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF、TB-RNA、TB-DNA单独和联合检测对BGT的诊断效能。结果BGT组和NTPD组肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF、TB-RNA和TB-DNA检测阳性率分别为69.96%(354/506)和2.67%(8/300)、61.46%(311/506)和5.00%(15/300)、63.64%(322/506)和8.00%(24/300),BGT组高于NTPD组,差异均有统计学意义(χ^(2)=342.005,246.930,235.687,P<0.01)。与金标准比较,XpertMTB/RIF诊断BGT的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值和阴性预测值分别为69.96%、97.33%、80.15%、97.79%和65.77%,TB-RNA分别为61.46%、95.00%、73.95%、95.40%和59.38%,TB-DNA分别为63.64%、92.00%、74.19%、93.06%和60.00%。三者联合诊断BGT灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值和阴性预测值分别为61.26%、100.00%、75.68%、100.00%和60.48%,Xpert MTB/RIF、TB-RNA和TB-DNA联合诊断BGT的特异度和阳性预测值较高(P<0.05)。结论肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF、TB-RNA和TB-DNA联合检测可提高BGT的诊断效能,值得临床推广应用。

利福霉素与乳酸左氧氟沙星氯化钠溶液存在配伍禁忌

利福霉素是一线抗结核病药，属半合成广谱杀菌药，对结核分枝杆菌有杀菌作用，为暗红色的澄明液体。而左氧氟沙星主要作用机理是通过抑制细菌DNA旋转酶的活性，阻止细菌DNA的合成、复制，导致细菌死亡，具有广谱抗菌作用，抗菌作用强，适用于敏感革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌引起的呼吸道、消化道、泌尿生殖系等的感染，为淡黄绿色的澄明液体。

分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(E.coli.)BCG穿梭载体pOLYG中,构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22,按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体,分别命名为pDE22Ag85B ESAT6和pDE22ESAT6Ag85B,将纯化的重组质粒电穿入BCG,经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液,经浓缩和透析后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western blot法)分析。结果两株重组BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白,且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。