结核感染T细胞斑点试验、结核分枝杆菌核酸恒温扩增检测及腺苷脱氨酶联合检测在结核性胸腔积液诊断中的价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核分枝杆菌核酸恒温扩增检测(TB-SAT)、腺苷脱氨酶(ADA)联合检测对结核性胸腔积液的诊断价值。方法选择2021年1月至2021年12月于新乡医学院第一附属医院就诊的135例胸腔积液患者为研究对象,其中结核性胸腔积液患者83例,非结核性胸腔积液患者52例。135例患者均进行外周血T-SPOT.TB、胸腔积液TB-SAT和胸腔积液ADA检测,比较3种方法单独检测和联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度及特异度。结果T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度、特异度比较差异均无统计学意义(P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.990、13.410、14.590,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.000、2.420、0.060,P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于ADA单独检测(χ^(2)=4.069,P<0.05),与T-SPOT.TB、TB-SAT单独检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.055、3.384,P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.370、12.511、5.371,P<0.05)。TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度与T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.000、2.604、3.213,P>0.05)。TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于TB-SAT单独检测(χ^(2)=5.765,P<0.05),与T-SPOT.TB、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.782、1.251,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=6.760、15.755、16.966,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.370、12.511、5.371,P<0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测(χ^(2)=4.090、4.990,P<0.05);T-SPOT.TB+ADA联合检测与TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.060,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著高于T-SPOT.TB+ADA联合检测(χ^(2)=4.371,P<0.05);TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB+TB-SAT、T-SPOT.TB+ADA联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.780、1.490,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度与T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.210,P>0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测(χ^(2)=5.750、6.760,P<0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测(χ^(2)=4.370,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.000、1.490,P>0.05)。结论联合检测较单一检测诊断结核性胸腔积液效果理想,外周血T-SPOT.TB联合胸腔积液TB-SAT诊断结核性胸腔积液的总体效能最好。联合检测能有效降低漏诊率和误诊率,对结核性胸腔积液具有较高的临床应用价值。

结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)对γδ T细胞影响的研究进展

结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)是从结核分枝杆菌(MTB)减毒菌株H37Ra经121℃,20 min,高温高压处理后从菌体释放到上清液中一种多肽类抗原。γδ T细胞是一类广泛分布于非淋巴组织的非常规T细胞,可分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等细胞因子,在抗MTB感染的免疫应答中发挥重要作用。MTB-HAg可在体外有效刺激γδ T细胞增殖活化,使其更加高效地参与抗结核感染的过程,故MTB-HAg可作为设计新型结核疫苗或药物的潜在靶点。但由于MTB-HAg组成复杂,具体是何种成分刺激γδ T细胞发挥抗MTB感染功能还不清楚。

注射母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的影响

目的:探讨注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群及肺功能的作用.方法:选取2021年2月至2023年3月期间本院诊治的90例肺结核患者为研究对象,按照是否联合用药,将其分为研究组(n=45,接受注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL抗结核方案治疗)和对照组(n=45,接受常规3HLZE/4HL抗结核方案治疗).比较两组患者治疗前后T淋巴细胞亚群指标[CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)]及肺功能[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)及最大呼气峰流速(PEF)]水平.结果:治疗结束时,研究组患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均高于对照组,CD8^(+)低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);FVC、FEV1、PEF水平均较对照组高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:注射用母牛分枝杆菌联合3HLZE/4HL方案对肺结核患者T淋巴细胞亚群水平失衡的改善效果更好,更利于增强患者免疫力,促进患者肺功能更好的改善.

结核特异性CD4^(+)HLA-G^(+)和CD4^(+)CD69^(+)T细胞对活动性肺结核诊断及疗效评估价值

结核病仍是我国乃至全球的重大公共卫生问题之一[1]。如何早期诊断并监测结核病疗效是控制结核病的主要挑战。痰培养、痰涂片阳性以及其转阴分别是诊断和监测抗结核疗效的实验室常用方法,但这些方法均存在灵敏度低、耗时长等缺点。因此,可快速、灵敏的代替方法亟需临床探寻。目前关于结核特异性生物标志物用于结核的诊断和疗效监测少有研究报道。

髓系细胞和CD4^(+)T细胞在结核分枝杆菌感染和免疫病理中的作用

宿主先天性和适应性免疫应答在对抗结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染中发挥着重要作用,而耐药性的产生亦与免疫应答相关。研究发现,肺部髓系细胞能够对MTB产生免疫应答,在保护宿主和炎症产生过程中均有参与作用。适应性免疫应答中的多种细胞类型能对MTB感染产生免疫应答,其中抗原特异性CD4^(+)T细胞在控制MTB感染中发挥着主要作用。然而,在复杂的MTB感染环境中,不同的髓系细胞和CD4^(+)T细胞也可能是MTB感染的主要参与者,能够介导病理反应的发生。因此,本文就不同髓系细胞(主要包括单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞)和CD4+T细胞在MTB感染中的双重作用进行综述。

结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数鉴别儿童活动性结核病与潜伏结核感染的价值

目的通过γ干扰素释放试验探讨结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数(简称T细胞斑点数)鉴别儿童活动性结核病(TB)与潜伏结核感染(LTBI)的价值。方法纳入T细胞斑点试验(T.SPOT.TB)阳性且未经过抗结核治疗的93例活动性TB(重症TB27例,非重症TB66例)和47例LTBI儿童,根据T.SPOT.TB结果对T细胞斑点数进行比较分析。结果活动性TB组T细胞斑点数中位数84(6～710)显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;非重症TB患儿的T细胞斑点数中位数为99(6～710),显著高于重症TB的44(6～268),P=0.011,也显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;重症TB儿童T细胞斑点数中位数高于LTBI组儿童(44vs17),但差异无统计学意义(P=0.084),T细胞斑点数分布在活动性TB、重症TB、非重症TB和LTBI之间均有较大范围重叠。受试者工作特征曲线分析显示以T细胞斑点数43.5作为区分活动性TB与LTBI的最佳界值,其敏感度与特异度分别为69.9%和70.2%。结论 T细胞斑点数在活动性TB尤其是非重症TB患儿显著高于LTBI儿童;T细胞斑点数的数量可反映体内的结核分枝杆菌负荷,但不能用于区分儿童活动性TB与LTBI。

特异性T细胞体外释放酶联免疫法检测结核病的临床应用

目的:探究特异性T细胞体外释放酶联免疫法检测结核病的临床应用价值。方法:选取疑似发生结核病患者128例进行临床研究,患者均在医护人员辅助下完成结核菌素皮肤试验、特异性T细胞体外释放酶联免疫法、结核分枝杆菌分离培养检验,以结核分枝杆菌分离培养结果为金标准,统计前两种方法的诊断结果与诊断效能。结果:结核分枝杆菌分离培养结果如下,阳性、阴性检出率分别是62.50%与37.50%。结核菌素皮肤试验、特异性T细胞体外释放酶联免疫法的阳性率、阴性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。特异性T细胞体外释放酶联免疫法的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值大于结核菌素皮肤试验(P<0.05)。结论:结核病临床诊断中应用特异性T细胞体外释放酶联免疫法,诊断效能较好,值得临床推广。

肺结核患者外周血中结核分枝杆菌耐热抗原特异性的TNF-α^＋ γδ T细胞数量和亚群分析

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分为健康者(n=9)和潜伏性MTB感染者(n=6),另采集肺结核患者外周血(n=12),3组经密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),用MTB-HAg刺激20 h。收集细胞,流式细胞术检测TCRαβ+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+αβT细胞、CD8+αβT细胞、TCR-Vδ2+T细胞亚群中产生TNF-α产生细胞的比例。结果肺结核患者外周血γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血Vδ2T细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血中Vδ2T细胞在TNF-α+γδT细胞中所占比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。结论肺结核患者外周血MTB-HAg特异性γδT细胞及其Vδ2亚群产生细胞因子TNF-α能力显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。

中国猕猴CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞抑制抗结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞免疫反应

目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标记。将去除Tregs的剩余PBMCs标记上CFSE,然后单独或与纯化的Tregs混合,分别给予结核杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)或CD3/CD28单克隆抗体刺激,体外培养7d,用流式细胞术分析含或不含Tregs的PBMCs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞对PPD抗原和CD3/CD28抗体刺激的反应。结果:PPD不仅能引起CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞扩增,而且引起Vγ2Vδ2T淋巴细胞也发生扩增。Tregs不仅能抑制CD3/CD28抗体诱导的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原非特异性扩增,而且还可抑制PPD抗原刺激引起的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原特异性扩增。结论:中国猕猴Tregs对T淋巴细胞产生的抗结核杆菌特异性免疫反应有负调节作用。

SPOT.TB联合结核分枝杆菌核酸(PCR-荧光探针法)检测对诊断APTB的临床意义

探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合结核分枝杆菌核酸(PCR-荧光探针法)检测对活动性肺结核患者的诊断效能。方法 以2020年1月至2021年6月在我院同时检测了T-SPOT.TB及结核分枝杆菌核酸的129例活动性肺结核(APTB)患者为实验组,同期检测了这两个项目的44例肺部感染患者为对照组,分别计算这两个项目的检测结果在两组患者中的敏感度(真阳性率)与特异度(真阴性率)及其联合检测的敏感度与特异度。结果 以肺部感染患者为对照组,T-SPOT.TB诊断活动性肺结核的敏感度为83.72%(108/108+21),特异度为84.09%(37/7+37),阳性预测值为93.91%(108/108+7),阴性预测值为63.79%(37/21+37),准确度为83.82%(108+37/129+44);PCR-荧光探针法诊断活动性肺结核的敏感度为84.50%(109/109+20),特异度为100%(44/0+44),阳性预测值为100%(109/109+0),阴性预测值为68.75%(44/20+44),准确度为88.44%(109+44/129+44)。虽然两种检测方法的敏感度无显著性统计学差异(2=0.290,P=0.865),但PCR-荧光探针法的特异度优于T-SPOT.TB(2=8.100,P=0.004)。两者联合检测的敏感性为94.57%(122/122+7),特异性为84.09%(37/7+37),阳性预测值为94.57%(122/122+7),阴性预测值为84.09%(37/7+37),准确度为91.91%(129+37/129+44)。结论 PCR-荧光探针法诊断活动性肺结核患者的特异度优于T-SPOT.TB,两者联合检测,有助于临床尽早识别活动性肺结核患者。

T-bet突变介导的淋巴细胞差异性表达在结核分枝杆菌感染中的研究进展

T-bet作为CD4+T细胞最重要的转录因子,在结核分枝杆菌(MTB)增殖中起到重要作用。T-bet/GATA-3参与调控辅助性T1细胞(Th1)/Th2细胞的平衡,其中T-bet可促进CD4+T细胞向Th1细胞定向分化,进而分泌γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞因子,激活巨噬细胞直接清除MTB。T-bet突变会影响IFN-γ表达,不利于MTB的清除。最新研究结果发现,T-bet缺陷可抑制多种淋巴细胞亚型表达及其分泌的IFN-γ水平,但CD8+T细胞和非经典CD4+Th1*淋巴细胞表达不受影响。本文基于T-bet突变介导的淋巴细胞差异性表达,分析其在MTB感染中的研究进展。

基于酵母β-葡聚糖载体的口服OVA疫苗(WGP-OVA疫苗)诱导体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应

目的:探讨口服WGP-OVA疫苗对C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫的诱导作用。方法:分别连续给予C57BL/6小鼠口服PBS、WGP及WGP-OVA 17 d后,使用LEGENDplexTM多因子流式检测试剂盒检测给药后小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的含量;HE染色比较各组小鼠脾脏淋巴小结的大小。取小鼠腹股沟淋巴结(ILNs)制备单细胞悬液,流式细胞仪(FACS)检测淋巴结内F4/80+巨噬细胞及F4/80+SIINFEKL+巨噬细胞比例,分析WGP-OVA对巨噬细胞在ILNs内的浸润及抗原提呈情况;同时通过MHC Tetramer染色检测抗原特异性CD8+T细胞比例,明确WGP-OVA疫苗对T细胞免疫的诱导作用。结果:与PBS组相比,WGP-OVA能显著诱导IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的分泌,增大脾脏内淋巴小结。此外,口服WGPOVA疫苗能促进F4/80+巨噬细胞向淋巴结浸润,诱导巨噬细胞对OVA的抗原提呈,同时增加淋巴结内OVA特异性CD8+CTLs的数量。结论:口服WGP-OVA疫苗能诱导C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应。

母牛分枝杆菌菌苗对HIV感染合并结核分枝杆菌潜伏感染者外周血T细胞亚群的影响

目的:探讨母牛分枝杆菌菌苗对HIV合并结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)者T细胞亚群的影响及其使用的安全性。方法:采用多中心前瞻性队列研究方法,连续纳入2003年6月至2020年6月宁夏回族自治区银川市AIDS管理机构管理的经结核菌素皮肤试验筛查确诊的96例HIV感染合并LTBI者作为研究对象。研究对象按照银川市所辖县区划分为试验组(63例)和对照组(33例)。试验组在高效抗逆转录病毒治疗的基础上,注射母牛分枝杆菌菌苗22.5μg/次,每2周注射1次,共3次。对照组在高效抗逆转录病毒治疗的基础上,口服异烟肼300 mg/次,1次/d,连续服用6个月。于治疗前和治疗结束后1个月、3个月随访时,检测并比较两组研究对象的CD4^(+)、CD8^(+)、CD3^(+)T细胞等免疫细胞水平及肝功能指标变化情况;同时,评价两组研究对象不良反应发生情况。结果:试验组在治疗结束后1个月,CD3^(+)T细胞水平为(1583.83±584.69)个/μl,明显高于治疗前[(1221.20±399.52)个/μl;t=-2.962,P=0.004];治疗结束后3个月,CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞水平分别为(1816.67±736.86)个/μl、(674.10±282.30)个/μl和(833.21±314.11)个/μl,均明显高于治疗前[分别为(1221.20±399.52)个/μl、(588.71±273.44)个/μl和(609.65±267.71)个/μl],差异均有统计学意义(t=-4.460,P<0.001;t=-2.801,P=0.044;t=-3.801,P<0.001)。治疗结束后3个月,试验组CD3^(+)、CD4^(+)T细胞水平及CD4^(+)/CD8^(+)比值(0.86±0.54),均明显高于对照组[分别为(1716.47±689.07)个/μl、(559.11±187.14)个/μl、0.82±0.74],差异均有统计学意义(t=2.209,P=0.034;t=3.666,P=0.008;t=3.502,P=0.001)。在治疗结束后1个月,对照组谷草转氨酶水平为(33.15±11.70)U/L,明显高于试验组[(26.54±9.63)U/L],差异有统计学意义(t=2.624,P=0.011);治疗结束后3个月,对照组谷丙转氨酶[(52.58±27.72)U/L]、谷草转氨酶[(33.74±11.89)U/L]水平均明显高于试验组[(35.29±21.16)U/L、(26.67±11.07)U/L],差异均有统计学意义(t=2.563,P=0.013;t=2.172,P=0.034)。试验组无不良反应,无退出治疗患者,治疗完成率达到100.0%(63/63),明显高于对照组的84.9%(28/33),差异有统计学意义(χ^(2)=7.235,P=0.007)。结论:母牛分枝杆菌菌苗用于HIV感染合并LTBI者抗结核预防性治疗可提高其细胞免疫水平,且对肝功能的损伤更小,具有较好的安全性。

慢性乙型肝炎及HBV相关肝硬化和肝细胞癌患者间HBV特异性CD8^(+) T细胞反应活性的比较分析

目的 比较分析慢性乙型肝炎及HBV相关肝硬化和肝细胞癌患者间的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性。方法 选取124例慢乙肝、36例HBV相关肝硬化和114例HBV相关肝细胞癌患者,采用独创的ELISPOT系统定量检测患者外周血中具有反应活性的HBV特异性CD8^(+)T细胞数量;另对19例慢乙肝患者和20例肝细胞癌患者进行纵向追踪(每3~5月检测1次)。结果 慢乙肝组的HBV特异性CD8^(+)T细反应活性与肝硬化组无统计学差异,但明显低于肝细胞癌组,尤其是HBsAg、HBpol和HBe/cAg抗原特异性T细胞。慢乙肝组中,ALT和AST水平正常组、低病毒载量组比ALT和AST水平异常组、高病毒载量组都呈现更高的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性。NUCs治疗的时间长短对慢乙肝患者HBV特异性T细胞的功能恢复有一定影响,但在相同时长内药物种类对其影响较弱。肝硬化组中,HBeAg阳性组的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性明显高于HBeAg阴性组(P=0.03)。肝细胞癌组中,AFP正常和DCP正常组的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性明显高于AFP和DCP异常组。纵向研究结果显示,慢乙肝患者使用NUCs治疗期间,HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性呈逐渐上升趋势;而肝细胞癌患者在靶向药物联合免疫治疗期间,HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性呈现明显上升。结论 HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性在慢乙肝、肝硬化和肝细胞癌的进程中存在差异,且受到病毒学指标、肿瘤标志物以及药物治疗的影响,因此在临床治疗中应密切关注HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性的变化。

结核分枝杆菌DnaG引物酶与ssDNA模板相互作用的研究

目的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引物酶DnaG(MtuDnaG)在其基因组DNA复制中起着至关重要的作用,因而被认为是抗结核药物研发的新靶点。然而MtuDnaG起始引物合成的机制尚不清楚,这阻碍了MtuDnaG抑制剂的筛选。本研究将鉴定MtuDnaG结合模板的特异性识别位点,探讨MtuDnaG与ssDNA模板之间的相互作用。方法本研究以MtuDnaG的双结构域蛋白MtuP49(包含了锌指结合结构域和RNA聚合酶结构域)为研究对象,利用生物化学和生物物理学方法,研究MtuDnaG与含不同三联体的ssDNA模板之间的相互作用,鉴定MtuDnaG的特异性识别位点。结果5'-GCG/C-3'三联体可能是MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点。此外,在结核分枝杆菌基因组的复制起始点附近也存在可以与MtuP49特异结合的5'-GCG/C-3'位点,其3'端侧翼序列显著影响ssDNA与MtuP49的亲和力。突变实验表明,位于锌指结合结构域中的Arg31对MtuP49结合ssDNA的活性具有重要贡献。基于预测的MtuP49结构,推测在MtuP49结合模板ssDNA过程中,锌指结合结构域会发生分子内重排。结论本研究首次鉴定了MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点,揭示了影响MtuDnaG与模板ssDNA相互作用的主要因素。本文的研究结果不但有助于阐明MtuDnaG起始引物合成的机制,也为靶向DnaG的新型抗结核药物开发提供了新的信息。

分枝杆菌培养阳性外周血结核感染T细胞斑点试验阴性病例的临床特征分析

目的分析分枝杆菌罗氏培养阳性外周血结核感染T细胞斑点试验(T cell spot test of tuberculosis,T-SPOT.TB)阴性病例的临床特征。方法以2017年1-12月在首都医科大学附属北京胸科医院住院经痰液、体液或组织标本分枝杆菌罗氏培养阳性且T-SPOT.TB阴性的77例患者为观察组,以同期收治分枝杆菌罗氏培养阳性且T-SPOT.TB阳性的77例患者为对照组,比较两组患者的临床特征。结果观察组与对照组比较,非结核分枝杆菌肺病分别为24例(31.2%)与3例(3.9%),肺结核分别为53例(68.8%)与74例(96.1%),差异有显著性(P<0.001)。两组肺结核患者比较,观察组高龄患者(≥65岁)、超重(BMI≥24kg/m^2)及病程超过6个月的占比高于对照组,差异有显著性(P<0.05);两组在性别、吸烟史、饮酒史、基础疾病方面差异无显著性(P>0.05);两组血红蛋白、淋巴细胞计数、白蛋白水平差异有显著性(P<0.05);两组白细胞计数、血小板计数差异无显著性(P>0.05)。结论非结核分枝杆菌感染是分枝杆菌培养阳性T-SPOT.TB阴性的原因,而在结核分枝杆菌感染患者中,高龄(≥65岁)、超重(BMI≥24kg/m2)、病程超过6个月及血红蛋白、淋巴细胞计数、白蛋白水平可能是T-SPOT.TB阴性的影响因素。

结核分枝杆菌游离DNA检测在肺外结核诊断中的价值

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值。方法选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例。所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)。通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值。结果MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中MTB的检出率均显著高于涂片抗酸染色(χ^(2)=5.714、9.289、9.226,P=0.017、0.002、0.002)。虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.143,P=0.705;χ^(2)=0.648,P=0.421);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(χ^(2)=4.222,P=0.040)。在肺外结核组,MTB cfDNA检测法的MTB检出率为26.50%(31/117),显著高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.362,P=0.037;χ^(2)=24.492,P<0.05);而TB-IGRA的MTB检出率为72.65%(85/117),显著高于MTB cfDNA检测(χ^(2)=49.850,P<0.001)。MTB cfDNA检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为26.50%、100.00%、100.00%、63.40%,其灵敏度显著高于GeneXpert MTB/RIF(15.38%)和涂片抗酸染色(3.42%),但低于TB-IGRA(72.65%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较高的灵敏度及特异度,故MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较好的应用前景。

LncRNA GAS5靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例、同期健康体检者75名血清中LncRNA GAS5、miR-144-3p水平;将巨噬细胞(160 nmol/L佛波酯诱导分化后的贴壁THP-1细胞)分为8组,即MTB组、MTB+pcDNA组、MTB+pcDNA-GAS5组、MTB+inhibitor NC组、MTB+miR-144-3p inhibitor组、MTB+pcDNA-GAS5+mimic NC组、MTB+pcDNA-GAS5+miR-144-3p mimic组,另取正常培养的巨噬细胞作为对照组(NC组)。检测巨噬细胞中LncRNA GAS5、miR-144-3p表达(qRT-PCR法)及细胞上清中炎性细胞因子水平(ELISA法);分别检测巨噬细胞增殖(CCK-8法)、凋亡(流式细胞术)及检测巨噬细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(Western blot)水平;验证LncRNA GAS5与miR-144-3p的关系(双荧光素酶报告基因实验)。结果:结核病患者血清中LncRNA GAS5表达量为0.24±0.02,低于健康体检者(1.00±0.00);结核病患者血清中miR-144-3p表达量为2.35±0.12,高于健康体检者(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t值分别为329.090、97.428,P值均<0.001)。MTB组LncRNA GAS5表达量为0.22±0.02、细胞凋亡能力为(3.84±0.24)%、Bax蛋白表达量为0.22±0.02,均低于NC组[1.00±0.00、(9.79±0.23)%、1.21±0.12],miR-144-3p表达量(2.46±0.13)、炎性细胞因子水平[γ-干扰素(IFN-γ):(212.26±9.65)pg/ml;白细胞介素-6(IL-6):(123.35±5.12)pg/ml;肿瘤坏死因子α(TNF-α):(325.58±12.28)pg/ml]、细胞增殖能力(1.45±0.14)及Bcl-2蛋白表达量(1.53±0.15),均高于NC组[1.00±0.00、(35.58±1.23)pg/ml、(25.46±1.18)pg/ml、(51.12±2.03)pg/ml、0.86±0.07、0.56±0.05],差异均有统计学意义(q值分别为41.205、73.979、36.403、31.876、61.384、66.990、81.580、13.484、22.943,P值均<0.001)。MTB+pcDNA-GAS5组LncRNA GAS5表达量(0.86±0.07)、细胞凋亡能力[(7.62±0.17)%]及Bax蛋白表达量(0.94±0.08),均高于MTB+pcDNA组[0.23±0.01、(3.82±0.21)%、0.23±0.01];miR-144-3p表达量(1.35±0.10)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(96.63±4.17)pg/ml;IL-6:(41.93±2.19)pg/ml;TNF-α:(118.85±6.03)pg/ml]、细胞增殖能力(0.96±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.81±0.07),均明显低于MTB+pcDNA组[2.48±0.14、(210.63±9.78)pg/ml、(125.52±4.86)pg/ml、(327.73±10.15)pg/ml、1.44±0.13、1.54±0.14],差异均有统计学意义(q值分别为33.281、47.247、26.107、24.671、57.204、61.448、62.087、10.970、17.266,P值均<0.001)。MTB+miR-144-3p inhibitor组细胞凋亡能力[(7.51±0.19)%]及Bax蛋白表达量(0.89±0.08),均高于MTB+inhibitor NC组[(3.86±0.22)%、0.24±0.02];miR-144-3p表达量(1.21±0.09)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(103.36±5.11)pg/ml;IL-6:(39.95±1.62)pg/ml;TNF-α:(120.26±6.67)pg/ml]、细胞增殖能力(0.92±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.78±0.07),均低于MTB+inhibitor NC组[2.47±0.12、(214.45±10.03)pg/ml、(126.05±4.77)pg/ml、(326.69±8.33)pg/ml、1.46±0.12、1.54±0.12],差异均有统计学意义(q值分别为45.382、23.901、27.509、58.921、61.029、61.359、12.341、17.976,P值均<0.001)。结论:过表达LncRNA GAS5可能通过靶向下调miR-144-3p抑制MTB感染的巨噬细胞炎性反应,并诱导细胞凋亡。

抗原特异性T细胞计数法快速检测结核分枝杆菌感染

迄今为止对于检测潜在的结核分枝杆菌(简称结核杆菌)感染尚无可靠的方法,即使在活动性结核病人中,感染也是经常未被证实。作者设想,结核杆菌抗原特异性T细胞数可能表明感染,故计数了4组群体中外周血衍生的一种针对在BCG中缺乏而在结核杆菌中高度特异的ESAT-6表位分泌IFN-γ的T细胞数。细菌学实验证实患有结核病的47名病人中45人有ESAT-6特异分泌的IFN-γT细胞,与非结核病的47名病人中的4人相比较,表明这些T细胞是结核杆菌感染的准确标志。因此。

结核分枝杆菌T细胞斑点实验在肺结核诊断中的应用

目的探讨肺结核快速、准确的诊断方法。方法对1 171例肺结核患者、502例非肺结核患者进行痰涂片、结核分枝杆菌T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核菌核酸检测(TB-DNA)、抗结核抗体检测,对比分析检测结果。结果与其他3种方法相比,T-SPOT.TB诊断肺结核具有较高的灵敏性、阳性预测值、阴性预测、约登指数(P均<0.05),其诊断不同类型肺结核的阳性率最高(P均<0.05)。结论 T-SPOT.TB检测诊断肺结核具有较高的灵敏性和特异性。