抗结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖ELISA的建立及其临床应用

目的提取纯化结核分枝杆菌(MTB)脂阿拉伯甘露聚糖(LAM),建立抗LAM抗体(LAM-IgG)检测的酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法 MTB菌体彻底破碎后,去除蛋白、脂质、核酸,得到粗制的脂多糖。经Sephacryl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。以该LAM作为间接ELISA的包被抗原来检测血清中的LAM抗体。结果所得LAM经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)银染,与对照标准品大小一致,为37 000。115例肺结核患者LAM抗体阳性率71.3%;92例非结核肺部疾病患者假阳性率11.9%;188名健康体检者假阳性率3.2%。敏感性71.3%,特异性93.9%。结论本研究成功提取到LAM抗原,此抗原可作为间接ELISA的包被抗原用于结核抗体的检测。

两种糖脂抗原在结核病血清诊断中的应用

以结核杆菌主要的酚糖酯ＰＧＬＴｂ１和２，３－二酰基海藻糖－２－硫酸酯ＳＬⅣ为抗原，用ＥＬＩＳＡ法检测１２０例肺结核患者、１１２例健康人血清中抗ＰＧＬＴｂ１和ＳＬⅣ的ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体，并与ＰＰＤ抗原进行比较。结果表明：ＳＬⅣ－ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ、ＳＬⅣ－ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ、ＰＧＬＴｂ１－ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ、ＰＧＬＴｂ１－ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ和ＰＰＤ－ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ的特异性分别为９６．４３、９６．４３、９６．４３、９６．４３和９５．５３％；敏感性分别为５１．６７、３２．５０、１４．１７、１８．３３和３３．３３％，符合率分别为７３．２８、６３．３６、５３．８８、５６．０３和６２．９３％，阳性预测值分别为９６．８７、８６．６７、８０．９５、８４．６２和８８．６４％。３种抗原中以ＳＬⅣ最好。

蛋白芯片三种抗原检测结核抗体对肺结核的诊断价值

结核病是一种慢性传染病，每年全球大约有150万人因结核病死亡。结核病的致病菌为结核分枝杆菌，主要通过呼吸道传播，许多器官均可受累，但肺结核是最常见的[1]。如今世界上有1/3的人感染结核分枝杆菌，我国现有结核患者450万例，每年病死近20万人[2]。在我国有80%的肺结核患者分布在经济欠发达的中、西部地区。结核病的诊断主要依靠症状、体征、痰涂片及培养，胸部影像检查，结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）试验等[3]。目前结核抗体测定技术在临床上广泛应用，我院使用结核蛋白芯片3种抗原检测结核抗体。通过测定患者血清中特异的脂阿拉伯甘露糖（LAM）、16000、38000抗体来诊断结核病。现将本院2012年1月至2013年11月收治的肺结核、结核性胸膜炎、非结核性肺部疾病患者住院期间的检测结果报告如下。

CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒的构建和表达

目的:构建结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,M.tb)CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒,并且在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法:以M.tb H37Rv株DNA作为模板,PCR法扩增ESAT6和PPE68基因,利用基因拼接技术中的Gene-SOEing法扩增ESAT6-PPE68融合基因,克隆至原核表达质粒pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68。再分别以H37Rv株DNA和重组质粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68为模板扩增CFP10和ESAT6-PPE68基因,Gene-SOEing法获取目的基因CFP10-ESAT6-PPE68,克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-CFP10-ESAT6-PPE68,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果:CFP10-ESAT6-PPE68酶切片段大小与理论值符合,基因测序结果显示融合基因CFP10-ESAT6-PPE68的序列与Genbank中序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达了目的蛋白,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,相对分子量约为77 kD。结论:成功构建了M.tb CFP10-ESAT6-PPE68融合基因的原核表达质粒,并诱导表达出了融合蛋白,为该融合蛋白在结核病血清诊断学中的应用奠定了实验基础。

TBGL在良恶性胸腔积液临床鉴别诊断中的应用研究

目的探讨结核分枝杆菌糖酯抗原（TBGL）在良恶性胸腔积液中的表达情况，找到一种适合临床的快速的鉴别胸腔积液性质的方法。方法收集兰州大学第二医院呼吸科住院的101例患者，分为恶性胸膜炎组、结核性胸膜炎组和疑似结核性胸膜炎组，采用酶联免疫吸附试验检测各组患者血清及胸水中的TBGL，生化指标检测胸水蛋白、腺苷脱氨酶（ADA），血清学检测肿瘤标记物，痰涂片检测结核分枝杆菌。结果结核性胸膜炎组和疑似结核性胸膜炎组血清TBGL含量明显高于恶性胸膜炎组（P值均〈0．001），而两者之间差异无统计学意义（P=0．42）。结核性胸膜炎组胸水TBGL与恶性胸膜炎组比较差异有统计学意义（P=0．032），恶性胸膜炎组与疑似结核性胸膜炎组比较差异有统计学意义（Pd0．001），结核性胸膜炎组与疑似结核性胸膜炎组比较差异无统计学意义（P=0．391）。相关性分析显示，血清TBGL与胸水TBGL呈正相关（r=0．5892，P=0．0049），ADA与二者之间无相关性。结论TBGL可作为一种血清学指标用于鉴别良恶性胸腔积液的性质，但是与传统指标ADA无相关性，其具体的发生机制有待于继续研究。