结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的效果分析

分析在耐药肺结核临床治疗中应用结核分枝杆菌耐药基因检测的效果。方法 进行回顾性研究,选303择我院2022年3月至2022年12月收治的88例肺结核患者,根据临床检测方式,对患者分组。对照组(44例)接受传统的药敏试验,观察组(44例)接受结核分枝杆菌耐药基因检测。对比分析2组检测效果。结果 两组检出的结核分枝杆菌耐药情况没有显著差异(P>0.05)。但两组在检验时间上存在着显著差异(P<0.05),此外,观察组还可以精确测定结核分枝杆菌突变株数。结论 结核分枝杆菌具有高度的变异性,该菌可通过变异产生明显的耐药性,导致肺结核患者的病情发展成为耐药性肺结核。但是,可以基于结核分枝杆菌高度变异性这一特点,对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测。通过结核分枝杆菌耐药基因检测,可以及早检出耐药性肺结核,并确定结核分枝杆菌突变株的具体类型,从而帮助医生更快地确定最佳的治疗方案,提高临床治疗效果。

结核分枝杆菌耐药基因检测应用于耐药肺结核治疗的价值探讨

剖析耐药肺结核患者在采取相应治疗措施时经结核分枝杆菌耐药基因检测取得的临床价值。方法 研究目标入院治疗时间范围于2020年1月—2023年1月,采取相关检查措施被确诊为耐药肺结核,筛选样本量共计200例,以随机数字表法为分组依据将其划分并命名为对照组(n=100)和观察组(n=100),对照组用药期间给予其常规药敏试验,观察组所用检验方式为结核分枝杆菌耐药基因检测,分析两组诊断方法应用期间的耐药肺结核阳性检出率、诊断效能。结果 耐药肺结核阳性检出率测定结果呈现为,观察组明显高于对照组(P值<0.05)。评估两组检测方式的诊断效能,特异度、敏感度、准确度、阳性预测值、阴性预测值经统计学分析,对比差异显著(P<0.05)。结论 耐药肺结核患者治疗期间应用结核分枝杆菌耐药基因检测有利于提高诊断效能,为合理制定治疗方案提供了参考依据,在临床上具有较高的借鉴价值。

结核分枝杆菌耐药机制的研究进展

迄今为止,结核病依然是全球范围内重要的传染病以及重大公共卫生问题。世界卫生组织(WHO)2018年全球结核病报告显示,2017年全球新增结核病人1000万例,同时因病死亡的人数高达160万。估计2017年全球共新增55.8万耐利福平的结核病人,其中,有五分之四的病人为耐多药结核病人.

分子线性探针技术分析四川地区结核分枝杆菌耐药情况

目的应用分子线性探针GenoTypeMTBDRplus Assay(GTplus)试剂盒检测四川地区耐多药结核分枝杆菌(MTB)株的基因型特征,并初步了解耐药结核病的流行情况。方法选取结核确诊患者105份临床标本和68株临床分离株,应用GTplus试剂盒检测MTB耐利福平和异烟肼相关的rpoB、katG、inhA基因的突变,推测其对利福平和异烟肼的耐药性。结果 151例样本的GTplus结果有效,总耐药率和耐多药率分别为29.14%(44/151)和17.22%(26/151);耐利福平和高、低水平耐异烟肼的突变菌株分别为21.85%(33/151)、21.19%(32/151)和3.31%(5/151);突变型以rpoB S531L、katGS315T1和inhA C-15T为主。痰标本组的耐多药菌株比率明显高于肺外标本组。结论四川地区MTB耐药形势严峻,尤以耐多药结核病的情况严重,耐药菌株以rpoB S531L和katG S315T1突变型为主,应推广快速分子药敏试剂盒的临床应用,快速并提高对耐药结核病的诊断。

结核分枝杆菌耐药检测方法的研究进展

结核分枝杆菌的耐药问题已成为新世纪结核病控制的难题之一。该菌耐药检测的方法有常规方法和分子生物学方法。其中常规方法有显微镜观察法、菌体药敏法、流式细胞术法、微量快速显色药敏检测法;分子生物学方法主要包括直接测序法、高分辨熔解曲线分析法、多重聚合酶链反应单链构象多态法、多重等位特异聚合酶链反应检测法、分子信标法、线性探针杂交法和基因芯片技术等。

结核分枝杆菌耐药基因芯片检测在结核性脑膜炎中的应用

目的分析结核分枝杆菌耐药基因芯片检测在结核性脑膜炎应用中的价值。方法选取我院2015年9月—2017年9月诊治的结核性脑膜炎疑似病例136例为研究对象。采用随机数字表将其分为观察组和对照组,分别采用结核分枝杆菌耐药基因芯片法和酶联免疫吸附(ELISA)法对脑脊液进行检测,并根据检测结果进行诊断。并对诊断的准确率、检查时间等数据进行组间比较。结果观察组阳性率为18.6%,对照组阳性率为17.4%,观察组高于对照组(P>0.05);两组准确率分别为95.7%和85.5%,观察组高于对照组(P<0.05)。结论结核分枝杆菌耐药基因芯片检测在结核性脑膜炎应用中具有阳性率高,准确性高等优势。

172株结核分枝杆菌耐药性分析

目的，了解我县肺结核病人对常用抗结核药物的敏感情况。方法，利用高低两个药物浓度分别检测172株结核分枝杆菌对异烟肼（INH）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）、利福平（RFP）的耐药性。结果，172株结核分枝杆菌全敏感81株占47．1％，耐药91株占52．9％。结论单一耐药高于同时耐两种药，同时耐两种药高于耐三种药，低浓度耐药高于高浓度耐药。

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

随着抗结核药物广泛、长期以及不规范使用等因素影响,结核分枝杆菌耐药问题越来越复杂,耐药结核病尤其耐多药结核病(MDR-TB)的发病率日趋增高,耐药性的产生使其具有病程长、病情复杂、治愈率低、病死率高等危害。2020年全球上报耐多药/利福平耐药结核(MDR/RR-TB)13.2万例,准广泛耐药或广泛耐药结核病2.6万例,合计约15.8例,较2019年下降22%,据估算我国耐药结核病发病率居全球前三位[1]。2017年,《肺结核诊断标准》把结核分枝杆菌(MTB)分子生物学检查纳入结核病病原学诊断范围[2]。

结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒诊断结核分枝杆菌耐药效果研究

目的评价结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒(GenoType MTBDRplus VER2.0,简称MTB‐DRplus 2.0)检测利福平和异烟肼耐药的灵敏度和特异度等效能指标,为提高结核分枝杆菌耐药性检测水平提供依据。方法收集2022年1—12月云南省32个县(市、区)级结核病定点治疗医院分离培养的阳性菌株,经MTBDRplus 2.0检出结核分枝杆菌880株,进行最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)法药敏试验检测。结果以MIC法为金标准,MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药的灵敏度为67.69%,特异度为98.40%,阳性预测值为77.19%,阴性预测值为97.45%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测异烟肼耐药结果一致性中等,Kappa为0.701(P<0.001);检测利福平耐药的灵敏度为87.80%,特异度为99.40%,阳性预测值为87.80%,阴性预测值为99.40%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测利福平耐药结果一致性较好,Kappa为0.872(P<0.001)。MTBDRplus 2.0结果显示对异烟肼耐药而MIC法结果为对异烟肼敏感的13株菌中,发生inhA(C15T)突变有11株(占84.62%),MTBDRplus 2.0结果显示对利福平耐药而MIC法结果为对利福平敏感5株菌中,发生rpoB其他突变有4株(80.00%)。结论MTBDRplus 2.0检测利福平耐药的灵敏度和特异度均较高,但检测异烟肼耐药的灵敏度略低,检测异烟肼耐药的灵敏度低可能是由于试剂盒检测异烟肼耐药的靶点覆盖不足。inhA基因突变与异烟肼耐药的相关性较差,rpoB基因其他突变与利福平耐药的相关性较差。

Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测在结核病诊断中的应用价值

目的 探讨运用Xpert结核分枝杆菌及利福平耐药菌检测(MTB/RIF)对疑似肺结核患者的诊断效能。方法 结合病原学、影像学诊断结果,选取郑州人民医院和郑州市中心医院2021年1—12月收治的248例疑似肺结核患者为研究对象,留取痰液或肺泡灌洗液进行培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色和液基集菌涂片染色检测,对Xpert MTB/RIF在肺结核疑似患者中的诊断效能进行评估。结果 248例研究对象中,最终诊断为肺结核122例。MTB液体培养、Xpert MTB/RIF、抗酸染色涂片、液基集菌染色检测诊断肺结核的敏感度分别为54.10%、97.54%、7.38%、16.39%,特异度分别为98.41%、98.41%、95.24%、93.65%。Xpert MTB/RIF检测结果的敏感度优于其他3种检测方法,且漏检率最低。结论 Xpert MTB/RIF能提高MTB的阳性检出率,对结核病的早期诊断及有效防控均有益处,具有实际临床应用价值。

肉汤微量稀释法对耐多药结核分枝杆菌敏感性检测的评价

目的评价肉汤微量稀释(BMD)法在耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)敏感性检测中的应用效果。方法采用罗氏比例法和BMD法对海南省108株MDR-MTB及11株非MDR-MTB菌株进行药敏试验,并对两种药敏方法检测结果不一致菌株进行全基因组测序(WGS)。结果罗氏比例法和BMD法药敏结果平均判读时间分别为28.0、8.5 d。罗氏比例法检测异烟肼、利福平、乙胺丁醇、卡那霉素和卷曲霉素的耐药率高于BMD法(均P<0.001);BMD法检测丙硫异烟胺和对氨基水杨酸的耐药率高于罗氏比例法(均P<0.001)。以罗氏比例法药敏结果为金标准,BMD法检测耐药性的灵敏度和特异度分别为50.00%~100%、95.69%~100%,除EMB(87.39%)、INH(94.96%)外,BMD法检测其他药物的耐药性符合率均≥95%。罗氏比例法药敏结果与WGS总符合率为76.19%(32/42),BMD法药敏结果与WGS总符合率为23.81%(10/42),差异具有统计学意义(χ^(2)=23.048,P<0.001)。两种药敏方法检测结果不一致的MTB共34株,罗氏比例法耐药+BMD法敏感的26株MTB中,22株(84.62%)相关耐药基因发生突变;罗氏比例法敏感+BMD法耐药的11株MTB中,5株(45.45%)相关耐药基因发生突变。结论BMD法是一种准确、快速的MDR-MTB敏感性检测方法,但仍需要进一步改进和优化,耐药性与相关耐药基因的突变密切相关。

超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术在结核病诊断中的应用进展

1结核病现状结核病是严重危害人类健康的传染性疾病之一,是仅次于新型冠状病毒感染的第二大传染病杀手,是全球第13大死因[1]。2022年10月27日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布《2022全球结核病报告》[2](以下简称报告)指出,2021年全球新发结核病患者约1060万人,其中儿童约120万人。受新型冠状病毒的影响,全球结核病发病率与2020年相比上升了3.6%,打破了过去20年间每年约2%的下降趋势。2019年至2021年,全球因结核病死亡人数有所增加,2021年全球共有160万人死于结核病,相当于倒退到2017年的水平。2020年至2021年全球耐药结核病负担增加了3%,2021年报告了45万例利福平耐药结核病例,需要治疗的耐药结核患者中仅有36%的人接受了治疗,并且全球耐药结核的成功治疗率只有60%。2021年全球结核病基本医疗服务支出也从2019年的60亿美元下降至54亿美元,而2022年所需的费用为130亿美元[2],资金缺口巨大。

(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌抑制作用及其生物被膜调控基因的影响

目的 研究(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌体外抑制作用及其生物被膜调控基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的影响。方法 通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)筛选含生物被膜调控基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的耐药结核分枝杆菌,采用刃天青显色法和液体培养计数法测定(R)-(+)-长叶薄荷酮对生物被膜介导的耐药结核分枝杆菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibit concentration, MIC)和最低杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration, MBC),应用反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌生物被膜调控基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的影响。结果 在3×10^(7) CFU/mL和3×10^(6) CFU/mL菌液浓度下,刃天青显色法测得(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌的MIC和MBC分别为14.79、29.59 mg/mL;液体培养计数法测得(R)-(+)-长叶薄荷酮对耐药结核分枝杆菌的MIC_(90)和MBC分别为19.89、24.62 mg/mL。RT-PCR法结果表明长叶薄荷酮可抑制Rv0024、Ra1362的表达,促进Rv2872的表达(P<0.05)。结论 (R)-(+)-长叶薄荷酮通过调控耐药结核分枝杆菌生物被膜主要基因Rv0024、Rv2872、Ra1362的表达,达到抑制耐药结核分枝杆菌的生长的作用。

宁波地区不同基因型利福平耐药结核分枝杆菌耐药特征

目的 应用全基因组测序技术分析宁波市利福平耐药结核分枝杆菌(RR-TB)耐药特征,为RR-TB感染患者的临床诊疗及疫情防控提供科学依据。方法 选取宁波市耐药肺结核唯一定点诊疗机构(宁波市第二医院)耐药监测期间保存的2018-2019年59株RR-TB临床分离株,提取总DNA后进行全基因组测序。应用Perl脚本处理原始数据,并通过结核分枝杆菌(MTB)耐药基因数据库确定耐药基因相关突变,同时结合表型药敏试验结果综合分析本地区RR-TB临床分离株对异烟肼(INH)、利福平(RIF)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)、阿米卡星(AM)、卷曲霉素(CAP)、左氧氟沙星(LFX)、丙硫异烟胺(PTO)及对氨基水杨酸(PAS)9种抗结核药物的耐药特征。结果 59株RR-TB菌株INH、RIF的耐药率分别为83.05%、100.00%;基于全基因组测序的59株RR-TB菌株共检测到40种耐药相关基因突变类型,其中以katG基因Ser315Thr(62.71%),rpoB基因Ser450Leu(62.71%),rpsL基因Lys43Arg(50.85%)和embB基因Met306Val(30.51%)为主;59株RR-TB菌株分为2个基因型,分别为L2型(89.83%)和L4型(10.17%);其中,L2型菌株又分为2个亚型,分别为L2.1型菌株(1.89%)和L2.2型菌株(98.11%);L4型菌株又分为3个亚型,分别为L4.2型菌株(16.67%),L4.4型菌株(66.67%)和L4.5型菌株(16.67%);9种抗结核药物的耐药基因主要突变类型在L2型菌株中的占比远高于L4型。结论 宁波地区RR-TB临床分离株对9种抗结核药物的耐药形势较为严峻,主要流行基因型为L2型,需进一步加强耐药结核病的防控工作。

GeneXpert结核分枝杆菌/利福平耐药检测在肺结核诊断中的价值评估

目的:评估在肺结核临床诊断中应用GeneXpert MTB/RIF(结核分枝杆菌/利福平耐药检测)的价值,为肺结核疾病诊断、治疗工作提供参考。方法:评估对象选择2020年3月—2021年3月天津市滨海新区塘沽传染病医院就诊的60例肺结核疑似与确诊患者,对患者痰标本进行收集,实行GeneXpert MTB/RIF、抗酸染色法、固体培养实验检测,比较三种检测方法耐药菌和结核杆菌的阳性率;并比较GeneXpert MTB/RIF、抗酸染色法的特异性和灵敏度。结果:相比固体培养法,GeneXpert MTB/RIF的实行,阳性检出率提升明显,差异有统计学意义(χ^(2)=4.3854,P<0.05);与固体培养法相比,抗酸染色法的实行,阳性检出率降低明显,差异有统计学意义(χ^(2)=4.0615,P<0.05);与抗酸染色法相比,GeneXpert MTB/RIF的实行,特异性和灵敏度均明显提升,差异有统计学意义(χ^(2)=17.7882,6.8056,P<0.05)。结论:在肺结核临床诊断中应用GeneXpert MTB/RIF价值较高,特异性、灵敏度和准确性均较高,操作方便,有助于疾病的早期治疗工作。

HRCA技术联合DNA芯片检测结核分枝杆菌利福平耐药基因突变的初步分析

目的对超分支滚环扩增技术(hyperbranched rolling cycle amplification,HRCA)技术联合DNA芯片检测结核分枝杆菌利福平耐药基因突变进行初步分析。方法采用直接涂片检测在2013年至2015年期间搜集的898份痰液样本中结核分枝杆菌情况,同时采用改良罗氏培养法与HRCA技术联合DNA芯片法对阳性样本进行鉴定,并对利福平耐药基因进行初步分析。结果 989份检测的痰液样本中361份为阳性,涂阳率为40.2%。HRCA技术联合DNA芯片法阳性率为98.0%,显著高于改良罗氏培养法(35.2%),且差异具有统计学意义(P<0.05)。通过HRCA技术联合DNA芯片法发现85株结核分枝杆菌对利福平耐药,其中单纯rpoB基因突变比例为36.5%(31/344);katG基因与rpoB基因均突变比例为60.0%(51/344);inhA基因与rpoB基因突变比例均为3.5%(3/344);且二位点联合突变及单位点突变率分别为89.4%(76/85)与10.6%(9/85)。结论 HRCA技术联合DNA芯片法能够有效快速检出结核分枝杆菌突变基因,rpoB基因突变为主要结核分枝杆菌利福平耐药的基础,且突变呈现多样性。

2021—2022年某院耐多药结核分枝杆菌影响因素分析

目的2021—2022年青海省第四人民医院耐多药结核分枝杆菌影响因素分析。方法选取2021年1月—2022年12月青海省第四人民医院诊治的结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)阳性肺结核患者200例,根据耐多药情况分为耐多药组(50例)和非耐多药组(150例),同时进行影响因素分析。结果耐多药组的低蛋白血症、糖尿病(diabetes mellitus,DM)、慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)、复治占比等明显高于非耐多药组,差异有统计学意义(P<0.05)。在200例人群中,多因素logistics回归分析显示低蛋白血症、DM、COPD、复治等都为导致耐多药MTB发生的独立危险因素(OR=3.155、2.681、4.446、3.588,P<0.05)。结论2021—2022年本院耐多药MTB的检出率比较高,低蛋白血症、DM、COPD、复治为独立危险因素,可为临床耐药结核的诊断治疗和个体化用药提供依据。

结核分枝杆菌游离DNA检测在肺外结核诊断中的价值

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值。方法选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例。所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)。通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值。结果MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中MTB的检出率均显著高于涂片抗酸染色(χ^(2)=5.714、9.289、9.226,P=0.017、0.002、0.002)。虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.143,P=0.705;χ^(2)=0.648,P=0.421);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(χ^(2)=4.222,P=0.040)。在肺外结核组,MTB cfDNA检测法的MTB检出率为26.50%(31/117),显著高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.362,P=0.037;χ^(2)=24.492,P<0.05);而TB-IGRA的MTB检出率为72.65%(85/117),显著高于MTB cfDNA检测(χ^(2)=49.850,P<0.001)。MTB cfDNA检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为26.50%、100.00%、100.00%、63.40%,其灵敏度显著高于GeneXpert MTB/RIF(15.38%)和涂片抗酸染色(3.42%),但低于TB-IGRA(72.65%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较高的灵敏度及特异度,故MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较好的应用前景。

结核分枝杆菌广泛耐药株与耐多药株菌体蛋白质组学比较研究

目的比较和分析结核分枝杆菌广泛耐药(XDR)与耐多药(MDR)菌株在菌体蛋白质表达水平上的差异,并寻找与XDR相关的蛋白质点。方法利用双向凝胶电泳分离XDR、MDR菌株以及H37Rv标准菌株菌体蛋白质,通过计算机图像分析软件分析各菌株之间在菌体蛋白质表达水平上的差异性,并进行质谱分析。结果 XDR与MDR以及H37Rv菌株之间在菌体蛋白质表达水平上存在明显差异;与XDR相关的28个差异(新增、缺失、上调、下调)表达的蛋白质点中,质谱分析鉴定出5个相关的蛋白质点。结论结核分枝杆菌XDR与MDR菌株在菌体蛋白质表达水平上存在明显差异,为进一步研究XDR菌株耐药机理奠定了基础。